六盘山蕨菜多糖红外分析
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（兰州大学药学院甘肃 兰州 730000）
【摘要】目的：提取分离纯化具有抗氧化作用的蕨菜多糖，并对其进行红外鉴定，以初步确定蕨菜多糖的一级结构。方法：水提醇沉得蕨菜粗多糖,用Sevage法（氯仿：正丁醇＝4：1）除蛋白。再加无水乙醇使含醇量达到80%，静置过夜，5000r/min离心10min，残渣依次用体积分数95%乙醇、无水乙醇、丙酮、乙醚多次洗涤，冷冻干燥，得精制多糖，红外分析蕨菜多糖。结果结论：经红外分析后初步推测具有抗氧化作用的蕨菜多糖一级结构是具有β-D（1、4）连接的吡喃葡聚糖主链。
【中图分类号】R217.24 【文献标识码】A 【文章编号】1005-0515（2011）09-0166-02
蕨菜属羊齿科,多年生草本植物,别名如意菜、拳头菜等,是六盘山林区和山区常见的一种山野菜。蕨菜多糖具有多种生理活性［1］，表现出强的抗氧化活性。而且蕨菜生长周期短,适宜人工栽培,便于采集和加工,生产成本低。因此,蕨菜在医药和保健食品等方面极具开发潜力［2］。本文利用水浴回流提取、乙醇沉淀多糖、Sevage法去除蛋白质等工艺提取粗多糖；将得到的粗多糖通过有机溶剂离心洗涤，冷冻干燥进行分离纯化，收集得到精制多糖［3］；采用紫外分光光度计、红外光谱仪对多糖结构进行初步的光谱分析。以期能够为利用六盘山蕨菜植物资源奠定理论基础［3］－［8］。
1 材料与方法
1.1材料与仪器
蕨菜：采自六盘山区，80℃烘干，粉碎过80目药典筛。
试剂（分析纯）：葡萄糖，硫酸，苯酚，氯仿，无水乙醇，正丁醇，过硫酸钾，ABTS等。
仪器：红外分光光度计，UV7501紫外可见分光光度计，高速离心机，冷冻干燥器，索氏提取器
1.2 试验设计
1.2.1 蕨菜多糖的提取［9］ －［10］
称取干燥粉碎后的蕨菜细粉20g，置索氏提取器中，依次用石油醚提取至提取液无色为止。残渣挥干溶剂后，加入200ml蒸馏水回流提取2h,趁热过滤，重复3次。合并滤液，减压浓缩至原体积的1/2后，用4倍量的无水乙醇沉淀过夜，5000r/min离心10min，沉淀冷冻干燥为粗多糖。
1.2.2 蕨菜多糖的精制:将粗多糖加100ml热水溶解，用Sevage法（氯仿：正丁醇＝4：1）法除蛋白质；浓缩多糖溶液，加入无水乙醇使含醇量高达80%，静置过夜，5000r/min离心10min，沉淀依次用95%乙醇、无水乙醇、丙酮、乙醚多次洗涤，冷冻干燥，得到精制多糖。
1.2.3 多糖含量得测定:采用苯酚－硫酸法。
1.2.4 结构分析［11］ －［13］
1.2.4.1 紫外光谱分析：用紫外光谱扫描仪对多糖组分进行扫描， 测定蕨菜多糖的紫外吸收光谱。
1.2.4.2 红外光谱分析［14］：取1 mg 左右经干燥的多糖样品， 与100 ～ 200 mg 经干燥的KBr 粉末在玛瑙研钵中轻轻研磨均匀， 在红外灯下操作. 经压片机压成薄片， 随即上机测定， 于4 000 ～ 400 cm－1红外光谱仪扫描。
2 结果与分析
2.1 蕨菜多糖的提取结果：蕨菜粗多糖为浅灰色，无味。易溶于水，热水中溶解度增大。不溶于丙酮、乙醚等非极性溶剂。干燥粉碎后的蕨菜细粉20g按法提取得到多糖1.248g,最终测定多糖得率为6.24%。
2.2 紫外光谱分析：我们在蕨菜多糖的紫外吸收光谱的260nm和280nm处未观察到任何吸收峰；而此处的吸收峰主要是核酸和蛋白质［15］，所以我们确定用Sevage法除蛋白后的蕨菜多糖中不含核酸、蛋白质。
2.3 红外光谱分析：根据图（1）我们在蕨菜多糖的红外吸收光谱中，发现在3600－3200cm-1, 3000－2800cm-1, 1400－1200cm-1, 1200－800cm-1,均有多糖特征峰；在891 cm-1处的吸收峰表明多糖结构中存在β吡喃糖苷键，3400 cm-1处出现的强而宽的峰显示蕨菜多糖中存在－OH，1600 cm-1处的峰是CO伸缩振动引起的吸收［16］- ［18］。
图1蕨菜多糖的红外光谱
3 结论
依据上述光谱分析，再结合Smith降解法等化学方法［19］：我们初步确定蕨菜多糖的一级结构中主要含有葡萄糖、半乳糖、鼠李糖、木糖、甘露糖，而具有β-D（1、4）连接的吡喃葡聚糖主链。
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