微波辅助提取-高效液相色谱法测定蔬菜中6-苄基腺嘌呤
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1 引言
6-苄基腺嘌呤（n6-benzylaminopurine，6-ba）作为植物生长激素，不仅在植物栽培方面广泛应用，也可用于蔬菜、水果的防腐保鲜，市售蔬菜、水果中可能有少量残留。人体摄取过量6-ba会刺激皮肤黏膜，伤害食道和胃黏膜，出现恶心、呕吐的现象，因此gb2760-1996规定了食品中6-ba最高残留量为0.2 mg/kg。至今我国尚未建立食品中6-ba残留量标准检测方法。微波辅助提取法（mae）以提取时间短、提取剂用量少、提取产率高等优点得到广泛的应用。本研究采用mae提取，hplc分离来检测蔬菜中6-ba的残留量。本方法具有检出限低、回收率高，提取时间短等优点，用于实际样品分析，结果满意。
2 实验部分
2.1 仪器与试剂 agilent-1100 高效液相色谱仪（美国agilent公司），配有紫外检测器；kq-200voe型超声波提取仪（中国昆山市超声仪器有限公司）；sc-3610离心机(科大创新股份有限公司中佳分公司)；wr-e型微波样品制备系统（北京美诚公司）；r201型旋转蒸发器（巩义市英峪予华仪器有限公司）。6-苄基腺嘌呤标准品（含量≥99.0%，fluka公司）；乙腈和甲醇（色谱纯，美国fisher 公司）；冰乙酸（色谱纯）；酸化甲醇：100 ml甲醇-水（7∶3，v/v）中加入冰乙酸50 μl；实验用水为娃哈哈纯净水。
2.2 hplc测定条件 venusil xbp-c18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm，美国agela公司)；检测波长：270 nm；流动相：甲醇-水-乙腈（55∶40∶5， v/v）；柱温：30 ℃；流速：0.8 ml/min；进样量：20 μl。
2.3 标准曲线绘制 准确移取浓度为10.00 mg/l 6-ba标准液0.125， 0.25， 1.00， 1.50， 2.00， 2.50， 7.50， 10.00， 12.50及15.00 ml于25 ml容量瓶中，用甲醇溶液定容。配制成浓度为0.05，0.10，0.40，0.60，0.80，1.00，3.00，4.00，5.00及6.00 mg/l的标准系列，按上述hplc条件测定，以峰面积（a）对浓度（c，mg/l）绘制标准曲线。
2.4 提取方法 （1）mae法 准确称取10.00 g绿豆芽样品于研钵中，捣碎，移至微波提取罐中，加入40.00 ml酸化甲醇，温度为60 ℃时，高压（150 kpa）mae提取10 min，冷却高温提取液，以5000 r/min离心15 min，清液收集于50 ml离心管中。（2）ue法 准确称取10.00 g绿豆芽样品于研钵中，捣碎，移至50.00 ml离心管中，加入20.00 ml酸化甲醇，ue提取15 min，收集上层清液。再向剩余残渣中加入20.00 ml提取剂重复上述步骤，合并两次提取液。（3）浓缩处理 将mae或ue提取液经旋转蒸发仪浓缩至10 ml，用甲醇定容于25.00 ml容量瓶中，经0.45 μm滤膜过滤，进行hplc分析。
3 结果与讨论
3.1 方法线性范围、精密度与检出限 按标准曲线配制成浓度为0.05～80.00 mg/l的标准系列并进行测试。结果表明，在0.050~80 mg/l范围内，6-ba浓度（c，mg/l）与峰面积（a）呈良好的线性关系，其线性回归方程为a=101.03c+3.29， 相关系数r=0.9999。对11份浓度为0.05 mg/l的标准溶液进行测定，rsd为1.2%。以豆芽、豆苗为基质制备7份加入0.5 mg/kg的加标样，以mae法提取，以7份样品分析结果的标准偏差的3倍计算，方法的检出限为0.016 mg/kg。
3.2 实际样品分析与回收率 准确称取绿豆芽、黄豆芽、黑豆芽、豆苗及经过6-ba保鲜液处理的菜花和西兰花各10.00 g， mae提取。另取上述样品， 加入适量6-ba标准品溶液，捣碎样品，混匀， 进行回收率实验。其回收率为92.8%~96.8%， 相对标准偏差为1.1%~5.2%