酶联免疫吸附实验(ELISA)测定的影响因素

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[关键词]ELISA

酶联免疫吸附实验（elisa）测定是现如今临床采用最普遍的方法，现通常采用微孔板为固相的测定模式，操作规程非常简单，但其受到标本的收集保存，试剂准备、加样、温育、洗板、显色、结果判断和结果报告等方面的影响，其中任一步操作不当都会影响结果，现将测定过程中其影响因素分析如下：

1.临床标本的收集和保存

患者的准备及标本采集除常规的注意事项外，在采集标本时还应

1.1注意有些药物对测定结果的影响，在收集时掌握好时间，如激素和治疗药物测定的血清标本，再如治疗药物的检测，应根据药物动力学选服药后的最佳时间抽血检测。用于传染病原体的抗体和抗原、肿瘤标志物和特种蛋白等检测的血清标本的收集则没有时间方面的影响。

1.2标本的保存标本避免严重血。标本的采集及血清分离中要注意尽量避免细菌污染。标本采集后要尽早检测，在2-8℃下保存时间过长，IgG可聚合成多聚体，在间接法中会导致本底过深，甚至造成假阳性。

2.试剂的准备

对试剂的准备一般不太注意，通常的做法是在实验时将试剂从冰箱镇南关拿出来即用，而忽略了这种做法有可能影响后面时间不够的问题，其直接的后果是对一些弱阳性标本的检测出现假阴性。因此，在ELISA测定中试剂的准备最为关键的是，将试剂盒先从冰箱中取出置室温中20-30分钟以上后，再进行测定，以满足后面的操作不至于出现误差。

3.加样与加试剂

在使用加样器进行加样时，一定要注意加样的速度，保证加样的准备，要避免加在孔壁上和产生气泡。试剂如用滴瓶滴加除要注意滴加速度外，滴加的角度也很重要。

4.温度

这是ELISA测定影响因素中最关键的一步，也是容易出现问题的一步，抗原抗体的结合反应进行，必须在一定的温度条件下反应一定的时间。目前国内试剂的温育时间为37℃0.5-1h，低于0.5h可能会影响测定下限。

5.洗板

洗板的充分性和洗板后的残留液是关键，将直接影响显色。

6.结果的判定和报告

定性测定判断标准主要是依据试剂盒所确定的（cut-off）值。定量测定是对标本中待测物的多少进行量值的测定，以具体数字表示。对结果的报告要求实验室技术人员对所测定的项目有较为全面的基础知识。

综上所述，尽管ELISA测定的操作步骤非常简单，但有可能影响测定结果的因素却较多，分布在测定操作的各步，特别是加样、温育、洗板.