复方熊胆茵陈颗粒质量标准研究

开篇：润墨网以专业的文秘视角，为您筛选了一篇复方熊胆茵陈颗粒质量标准研究范文，如需获取更多写作素材，在线客服老师一对一协助。欢迎您的阅读与分享！

摘要：目的 建立复方熊胆茵陈颗粒的质量标准。方法 采用薄层色谱法鉴别制剂中的熊胆粉、茵陈、白术、甘草。采用高效液相色谱法测定制剂中牛磺熊去氧胆酸钠的含量。色谱柱：Kromail 100-5 C18 （4.6 mm×250 mm，5 ?m）；流动相：甲醇-0.03 mol/L磷酸二氢钠溶液（60∶40），pH=4.4；检测波长：210 nm；流速：1 mL/min；柱温：25 ℃。结果 在薄层色谱中可以检出熊胆粉、茵陈、白术、甘草。牛磺熊去氧胆酸钠在进样量0.182 1～1.821 mg范围内与峰面积积分值线性关系良好（r=0.999 98），平均加样回收率为100.39%，RSD=1.70%（n=6）。结论 该方法简便、准确、专属性强，可以有效控制复方熊胆茵陈颗粒的质量。

关键词：复方熊胆茵陈颗粒；质量标准；薄层色谱法；高效液相色谱法

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2013.09.018

中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2013）09-0052-03

Study on Quality Standard of Fufang Xiongdan Yinchen Granule LI Huang1， XU Wei1， ZHENG Hai-yin2， HONG Zhen-feng2， XU Shu-yu1 （1.College of Pharmacy， Fujian University of TCM， Fuzhou 350122， China；2.College of Integrated Medicine， Fujian University of TCM， Fuzhou 350122， China）

Abstract：Objective To establish the quality standard for Fufang Xiongdan Yinchen Granule. Methods TLC was employed to identify Pulvis ellis urs， Capillary Wormwood Herbin， Atractylodis Macrocephalae Rhizoma and Glycyrrhizae Radix， and HPLC was used to determine the content of sodium tauroursodeoxycholic acid in Fufang Xiongdan Yinchen Granule. Kromail 100-5 C18 column （4.6 mm× 250 mm， 5 ?m） in an oven at 25 ℃ was need， with a mobile phase consisting of methanol-0.03 mol/L sodium dihydrogen phosphate solution （60∶40， pH=4.4） and UV detector at 210 nm， the flow rate was 1.0 mL/min. Results Pulvis ellis urs， Capillary Wormwood Herbin， Atractylodis Macrocephalae Rhizoma and Glycyrrhizae Radix can be detected by TLC. The linearity of sodium tauroursodeoxycholic acid was obtained in the range of 0.182 1-1.821 mg （r=0.999 98）. The average recovery was 100.39%， and RSD was 1.70% （n=6）. Conclusion The method is simple， accurate， specific， and can control the quality of Fufang Xiongdan Yinchen Granule effectively.

Key words：Fufang Xiongdan Yinchen Granule；quality standard；TLC；HPLC

基金项目：福建省科技重大专项（2010YZ0001-1）；福建省教育厅项目（JA11139）

通讯作者：洪振丰，Tel：0591-22861012，E-mail：zfhong1953

复方熊胆茵陈颗粒（原名归真脂肝宝颗粒）由熊胆粉、茵陈、山楂等7味中药组成，具有清肝利湿、化痰祛瘀的功效，用于肝胆湿热、痰浊血瘀型脂肪肝。该制剂处方为福建中医药大学阮时宝教授临床验方，目前已开发为院内制剂，为更好地控制其质量，确保其临床疗效，本研究对方中熊胆粉、茵陈、白

术和甘草进行薄层鉴别，对牛磺熊去氧胆酸钠进行含量测定。现报道如下。

1 仪器与试药

戴安Ultimate 3000液相色谱仪，KQ-500DE型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），DK-S24型电热恒温水浴锅（上海森信实验仪器有限公司），UNIQUE-R30多功能超纯水器，XS105型电子分析天平（梅特勒-托利多国际股份有限公司），DHG-9023A型电热恒温鼓风干燥箱（上海精宏实验设备有限公司），硅胶板（青岛海洋化工厂分厂）。

复方熊胆茵陈颗粒（福建中医药大学药学院中药制剂室自制）；熊胆粉购于福建归真堂药业股份有限公司；甘草对照药材（批号121244-200301）、白术对照药材（批号121468- 200401）、绿原酸对照品（批号110753-200413）、熊去氧胆酸对照品（批号110755-9003）、鹅去氧胆酸对照品（批号110806-200704）、胆酸对照品（批号100078-200414）、牛磺熊去氧胆酸钠对照品（批号110816-200507）、猪去氧胆酸对照品（批号100087-200610）、甘草酸铵对照品（批号110731-200614）均购于中国药品生物制品检定所；甲醇为色谱纯（美国Thermo Fisher Scientific公司），无水磷酸二氢钠（批号F20110613，国药集团化学试剂有限公司），水为重蒸馏水，其余试剂均为分析纯。

2 薄层鉴别

2.1 熊胆粉

取本品2 g，研细，加10%氢氧化钠溶液5 mL，超声溶解后，滤过，滤液100 ℃加热水解2 h，放冷，滴加盐酸调节pH值至2～3，醋酸乙酯萃取2次，每次10 mL，合并提取液，置水浴上蒸发至干，残渣加乙醇适量使溶解，移至5 mL量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。取2 g缺熊胆粉的阴性对照品，同法制成阴性对照溶液。另取胆酸、猪去氧胆酸、熊去氧胆酸、鹅去氧胆酸对照品，分别加乙醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法[2010年版《中华人民共和国药典》（一部）附录Ⅵ B]试验，吸取上述6种对照品溶液及供试品溶液各10 ?L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以新鲜配制的异辛烷-乙醚-冰醋酸-正丁醇-水（10∶5∶5∶3∶1）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸溶液，于105 ℃烘约5 min，至斑点显色清晰，置于紫外灯365 nm下检视。供试品色谱中，在与熊去氧胆酸、鹅去氧胆酸对照品色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照溶液在相应的位置上无斑点。

2.2 茵陈

取本品1 g，加50%甲醇25 mL，超声处理30 min，离心，取上清液，蒸干，残渣加甲醇2 mL使溶解，为供试品溶液。取1 g缺茵陈和山楂的阴性对照品，同法制成阴性对照溶液。另取绿原酸对照品，加甲醇制成每1 mL含0.1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法[2010年版《中华人民共和国药典》（一部）附录Ⅵ B]试验，取供试品溶液和阴性对照溶液各5 ?L、对照品溶液2 ?L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸丁酯-甲酸-水（7∶2.5∶2.5）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯365 nm下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照溶液在相应的位置上无斑点。

2.3 白术

取本品10 g，加正己烷25 mL，超声处理30 min，过滤，滤液蒸干，残渣加正己烷0.5 mL使溶解，作为供试品溶液。另取白术对照药材0.5 g和缺白术的阴性对照品10 g，同法制成对照药材溶液和阴性对照溶液。照薄层色谱法[2010年版《中华人民共和国药典》（一部）附录Ⅵ B]试验，吸取上述3种溶液各10 ?L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60～90 ℃）-乙酸乙酯（25∶2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照溶液在相应的位置上无斑点。

2.4 甘草

取本品10 g，加乙醚40 mL，加热回流1 h，滤过，弃乙醚液，药渣加甲醇30 mL，加热回流1 h，滤过，滤液蒸干，残渣加水40 mL使溶解，用正丁醇提取3次，每次20 mL，合并正丁醇溶液，蒸干，残渣加甲醇5 mL使溶解，作为供试品溶液。另取甘草对照药材1 g和缺甘草的阴性对照品10 g，同法制成对照药材溶液和阴性对照溶液。再取甘草酸铵对照品，加甲醇制成每1 mL含2 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法[2010年版《中华人民共和国药典》（一部）附录Ⅵ B]试验，吸取上述4种溶液各1～2 ?L，分别点于同一1%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水（15∶1∶1∶2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加热至斑点显色清晰，置于紫外光灯365 nm下检视。供试品色谱中，在与对照品及对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照溶液在相应的位置上无斑点。

3 含量测定

3.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Kromail 100-5 C18（250 mm×4.6 mm，5 ?m）；流动相：甲醇-（0.03 mol/L）磷酸二氢钠溶液（60∶40），用磷酸调节pH值为4.4；检测波长：210 nm；柱温：25 ℃；进样量：5 ?L；流速：1 mL/min。理论塔板数按牛磺熊去氧胆酸钠峰面积计应不低于5000。

3.2 对照品溶液的制备

精密称取牛磺熊去氧胆酸钠0.014 57 g，加甲醇溶解并定容至20 mL量瓶中，即得牛磺熊去氧胆酸钠对照品贮备液，浓度为0.728 5 mg/mL。精密吸取该贮备液3 mL于10 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

3.3 供试品溶液的制备

取复方熊胆茵陈颗粒2 g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20 mL，称定质量，超声（功率100 W，频率42 kHz）30 min，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，过滤，取续滤液，即得。

3.4 阴性对照溶液的制备

按处方比例称取除熊胆粉的其他药材，取2 g，研细，精密称定，依照复方熊胆茵陈颗粒的制备工艺制成阴性样品，照“3.3”项下方法制备阴性对照溶液。

3.5 空白试验

精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各10 ?L，按“3.1”项下色谱条件注入液相色谱仪，色谱图见图1。结果显示，在此条件下，复方熊胆茵陈颗粒中牛磺熊去氧胆酸钠与其他成分的分离度好，供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上，有相同保留时间的色谱峰，而阴性对照色谱在此保留时间无相应峰，表明阴性无干扰。

注：1.对照品；2.供试品；3.阴性对照

图1 复方熊胆茵陈颗粒HPLC图

3.6 线性关系考察

精密吸取“3.2”项下对照品贮备液0.5、1、2、3、4、5 mL于10 mL量瓶中，加入甲醇稀释至刻度，摇匀，得到0.036 42、0.072 85、0.145 70、0.218 55、0.291 40、0.364 25 mg/mL溶液，按“3.1”项下色谱条件分析，测定峰面积，上述浓度峰面积均值为0.210 0、0.417 4、0.834 0、1.270、1.695 0、2.120 0。以对照品浓度（C）对峰面积（A）作线性回归，得回归方程A=5.839 2C-0.007 9，r=0.999 978。结果表明，牛磺熊去氧胆酸钠在0.182 1～1.821 mg范围内与峰面积呈良好的线性关系。