夏桑菊颗粒中迷迭香酸的含量测定

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【摘 要】 目的：夏枯草为夏桑菊颗粒的君药，研究检测夏枯草主要药效成分迷迭香酸来建立夏桑菊的质控指标。方法：采用HPLC方法对夏桑菊中迷迭香酸含量进行测定，检测条件为色谱柱：Zorbax Eclipse XDB-C18；流动相：乙腈-1%醋酸（19∶81）洗脱；流速：1.0ml/min；柱温：40℃；检测波长：329nm；进样量：10μl。结果：检测得到迷迭香酸含量平均值为0.33mg/g，该方法的平均回收率为101.01%，线性方程为Y=2376737X-3261。结论：为提高夏桑菊颗粒质量标准，对处方中夏枯草以迷迭香酸计的含量进行研究，为更好的监控和评价夏桑菊颗粒的质量提供实验依据。

【关键词】 夏桑菊颗粒；迷迭香酸；HPLC法

【中图分类号】R284.1 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2016）12-0044-03

Abstract：Objective Prunella valgaris is the monarch drug of Xiasangju granules， in this study to establish a quality control for Xiasangju granules by detecting rosmarinic acid in Prunella.Methods Determine the rosemary acid in Xiasangju granulesby HPLC，the detection conditions，Column Zorbax Eclipse XDB-C18； mobile phase： acetonitrile-1% acetic acid （19∶81） to give； flow rate： 1.0ml/min； column temperature： 40℃； detection wavelength： 329nm； injection volume： 10μl.Results The average content of rosemary acid was 0.33mg/g， the average recovery of the method was 101.01%， the linear equation was Y=2376737X-3261.Conclusion This study can improve Xiasangju pranules quality standards， prescription Prunella meter with rosemary acid content were studied to provide a scientific basis for better quality monitoring and evaluation Xiasangju granules.

Keywords：Xiasangju granules Rosmarinic Acid UV HPLC

夏桑菊颗粒为夏枯草、桑叶、野三味药材经加工制成，具有清肝明目、疏风散热、除湿痹、解疮毒的功效、用于风热感冒、目赤头痛、高血压、头晕耳鸣、咽喉肿痛、疔疮肿毒等症，并可作清凉饮料。夏桑菊颗粒原标准收载于中华人民共和国卫生部标准（部颁标准）第15册，标准编号：WS3-B-2967-98。原标准收载了该药品的处方、制法、性状、鉴别、检查、主治与功能、用量与用法、规格和贮藏九个项目。根据国家药品标准提高行动计划的要求，对夏桑菊颗粒原标准进行修订。由于夏桑菊颗粒的君药是夏枯草，参考2010版《中国药典》选择夏枯草主要药效成分迷迭香酸为质控指标[1]，目前对夏枯草中迷迭香酸的含量测定已有研究[2-4]。迷迭香酸具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗炎活性和免疫抑制活性、抗血栓等[5-7]作用。2010年版《中国药典》一部夏枯草质量标准已制定了迷迭香酸的含量测定方法。为提高夏桑菊颗粒质量标准，对处方中夏枯草以迷迭香酸计的含量进行研究，为更好的监控和评价夏桑菊颗粒的质量提供科学依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器 Shimadzu LC-20AT液相色谱仪（含柱温箱、四元梯度系统、带恒温的自动进样器、二极管阵列检测器、LCsolution色谱工作站）；Millipore Simplicity 185纯水器；BP211D电子天平（Sartorius公司）；HN-1006超声清洗仪。

1.2 材料 迷迭香酸（批号：Lot#0001432843，SIGMA-ALDRICH）；夏桑菊颗粒（广州星群（药业）股份有限公司、广州花城制药厂、广西亿康药业股份有限公司等）；乙腈、醋酸、甲醇均为色谱纯，水为自制超纯水，其余试剂为分析纯。

2 方法

2.1 色谱条件 色谱柱：Zorbax Eclipse XDB-C18（4.6mm×250mm，5μm）；流动相：乙腈-1%醋酸（19∶81）洗脱；流速：1.0ml/min；柱温：40℃ ；检测波长：329nm；进样量：10μl。理论塔板数以迷迭香酸计不应低于5000，在选定的条件下分离度为3.52。见图1。

2.2 对照品溶液制备 精密称取迷迭香酸对照品适量，加甲醇使溶解，制成每1ml含迷迭香酸20μg的溶液，即得。

2.3 样品溶液制备 本品研细，取2.5g，精密称定， 置50ml容量瓶中，加入75%甲醇40ml，超声30min（功率250W，频率33kHz）溶解，放冷后，补加75%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为样品溶液。

2.4 阴性对照液制备 按处方组成，取除夏枯草外的其余药味，按工艺要求制成不含迷迭香酸的夏桑菊颗粒。按“2.3”项下的方法进行制备，即得。

2.5 标准曲线 精密称取迷迭香酸对照品10.03mg，加甲醇定容到50ml，得浓度为194.58μg/ml的迷迭香酸对照品溶液；精密吸取浓度为194.58μg/ml的迷迭香酸对照品溶液5ml，加甲醇定容到50ml，得浓度为19.46μg/ml的迷迭香酸对照品溶液；再精密吸取浓度为19.46μg/ml的迷迭香酸对照品溶液5ml，加甲醇定容到50ml，得浓度为1.95μg/ml的迷迭香酸对照品溶液。将不同浓度的对照品溶液分别进5、10μl，测得迷迭香酸峰面积。以迷迭香酸的进样量（μg）x为横坐标、迷迭香酸的峰面积Y为纵坐标，绘制标准曲线。得回归方程：Y=2376737X-3261，R2=1.00000，结果表明：迷迭香酸在0.01946～1.94582μg范围内呈良好的线性关系。

2.6 精密度试验 取同一对照样溶液重复进样测定6次。结果，峰面积的平均值为366926.5，RSD为0.73%，表明该方法仪器精密度良好。

2.7 重复性试验 取同一批号为IA10378批夏桑菊颗粒，按供试品溶液配制方法，平衡操作配制6份，并依法测定。结果，测得含量平均值为0.33mg/g，RSD为0.63%。表明该方法重复性良好。

2.8 准确度试验 取夏桑菊颗粒（批号：IA10378，含迷迭香酸0.33mg/g），粉碎成细粉，分别取1.25g，精密称定，置6个50ml容量瓶中，分别精密加入适量迷迭香酸对照品，按供试品溶液配制方法配制，依法测定，计算回收率。结果，测得平均回收率为101.01%，RSD为0.35%，表明该法准确度良好。

2.9 稳定性试验 取同一供试品溶液，分别在1、2、3、4、5、6、7、8、12、18、24h进样检测，结果测得该样品含迷迭香酸的平均含量为0.33mg/g，RSD为0.76%。结果表明在24h内供试样品的稳定性良好。

2.10 样品的测定 在“2.1”色谱条件下，依法检测“2.3”的样品溶液，按外标法计算迷迭香酸的含量，结果见表1。

3 讨论

3.1 提取条件 首先对超声提取及回流提取进行对比考察，结果在提取率相同的条件下，超声提取具有用时短、操作方便等优点，因此选用甲醇超声提取。为充分提取样品中迷迭香酸，实验以提取溶剂、提取时间、溶剂量作为3因素进行提取方法正交试验筛选，由正交试验直观分析结果表明，3因素对提取影响顺序为，溶剂量>提取时间>提取溶剂，确定选用溶剂量为50ml，超声30min，因提取溶剂对含量影响无显著性差异，在为75%甲醇中样品颗粒可全溶解，因此选用75%甲醇提取。

3.2 波长的选择 取迷迭香酸对照品适量，加入甲醇溶液配成对照品溶液，于紫外分光光度计上在190～400nm进行扫描，迷迭香酸对照品在329nm处有最大吸收，选取329nm作为检测波长。

3.3 流动相选择 研究尝试了甲醇-水、乙腈-1%醋酸、乙腈-0.1%磷酸等流动相，结果发现采用乙腈-1%醋酸溶液（19%～81%）水进行分析，所得色谱的分离较好，峰型对称。

3.4 不同色谱柱的比较 取同一批号为IA10378批夏桑菊颗粒，按供试品溶液配制方法，平衡操作配制3份，分别用Zorbax Eclipse XDB-C18、Gemini 5μm C18 110A、Hypersil ODS-2三种品牌的色谱柱测定，结果用三种品牌的色谱柱测定同一批号为IA10378的夏桑菊颗粒的迷迭香酸含量为3.36、3.27、3.22，RSD为2.16%。结果表明，既定的色谱条件，均适用于上述的色谱柱。

3.5 含量限度的确定 研究考察了星群公司近期样品、3年有效期及过期1年内的有糖及无糖型夏桑菊留样中迷迭香酸含量情况，结果样品中迷迭迭香酸含量均不低于2.0 mg/包。实验同时考察了其他19个不同生产厂家夏桑菊中迷迭香酸含量情况，结果样品中迷迭香酸含量波动较大（0.01～5.7mg/包）。考虑大生产及原材料药材的波动等因素影响，药典规定夏枯草药材迷迭香酸含量不得低于0.2%，一般转移率不得少于20%，根据处方计算迷迭香酸含量应不得低于2mg/包。

参考文献

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（收稿日期：2016.04.29）