中药治疗糖尿病性视网膜病变的实验研究水

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糖尿病视网膜病(Diabetic Retinopathy，DR)是糖尿病眼部最严重的并发症，是50岁以上人群的重要致盲性眼病之一，已成为防盲的重要课题。现代中医眼科将DR命名为“消渴目病”。但其治疗效果缺乏客观的评价。本研究通过动物模型研究，评价生脉散合玉女煎、六味地黄汤和参苓白术散治疗STZ-糖尿病视网膜病大鼠的效果。

1　材料与方法

1.1　实验动物及分组　健康雄性清洁级SD大鼠，屈光间质透明，体重200±20g(上海斯莱克实验动物有限公司)。随机分为5组：正常对照组、模型组、生脉散合玉女煎治疗组、六味地黄汤治疗组和参苓白术散治疗组，每组6只。

1.2　主要实验药品和试剂生脉散合玉女煎、六味地黄汤和参苓白术散(福建中医学院附属人民医院药剂科提供)，链脲佐菌素(streptozotocin，STZ)、Evans蓝(美国Sigma公司)。

1.3　主要仪器　福达FVC-45眼底荧光血管摄像机，DU-640可见。光.紫外分光分析仪(美国贝克曼库尔特有限公司)o

1.4　造模方法　大鼠禁食12小时，大鼠按每只55mg/kg剂量，一次性左下腹腔内注射STZ溶液(1％)。对照组注射同等剂量的柠檬酸盐缓冲液。72h后取尾血测血糖，血糖＞16.7mol/L者为造模成功。

1.5　动物给药方法　造模成功后，正常对照组和模型组给予中药治疗组等量的生理盐水灌胃，qd，持续至造模后6M。生脉散合玉女煎治疗组给予生脉散合玉女煎灌胃，qd；六味地黄汤治疗组给予六味地黄汤灌胃，qd；参苓白术散治疗组给予参苓白术散灌胃，qd，持续至造模后6M。每月应用裂隙灯眼底照相机和眼底血管荧光造影观察眼底。

1.6　视网膜Evans蓝渗漏量定量检测血一视网膜屏障破坏：鼠尾静脉注射Evans蓝(45 mg/kg)，注射后经股动脉抽血0.3mL入抗凝管，15000r/min离心30min，取上清检测血浆中Evans蓝浓度；2h后用10g/L多聚甲醛柠檬酸盐缓冲液灌洗，摘除眼球，在赤道部剖开眼球，显微镜下分离视网膜，于60℃真空抽干5h后称视网膜干重；加入甲酰胺120ul，70℃以萃取视网膜中的Evans蓝8h，离心弃除视网膜碎片，取上清液100ul用分光光度计检测Evans蓝浓度(采用双波检测，Evans蓝吸收峰620nm，吸收谷740nm，OD=OD620nm-OD740nm)，通过标准曲线计算上清液中Evans蓝浓度。视网膜中Evans蓝的浓度通过下列公式计算：

1.7　统计学处理　各组数据均采用X±s表示，数据采用SPSS 12.0软件包进行统计学处理，采用ANOVA检验，以P＜0.05作为差别有统计学意义的检验标准，P＜0.01作为差别有极显著统计学意义的检验标准。

2　结果

造模后8W，FFA示模型组、生脉散合玉女煎治疗组、六味地黄汤治疗组和参苓白术散治疗组可见荧光渗漏，但生脉散合玉女煎治疗组、六味地黄汤治疗组和参苓白术散治疗组荧光渗漏较模型组轻。

正常对照组视网膜Evans蓝渗漏量极低，模型组、生脉散合玉女煎治疗组、六味地黄汤治疗组和参苓白术散治疗组视网膜Evans蓝渗漏量明显高于正常对照组，但生脉散合玉女煎治疗组、六味地黄汤治疗组和参苓白术散治疗组视网膜Evans蓝渗漏量明显低于模型组，组间差异有统计学意义(F=28.044，P＜0.001)，如图1所示。

3　讨论

DR是糖尿病眼部最严重的并发症，是50岁以上人群的重要致盲性眼病之一，已成为防盲的重要课题。DR是以新生血管形成为主要标志的一种异常增生性疾病，是多种因子相互协调、共同作用的结果，会导致一系列严重的并发症，严重影响患者的视功能。

本研究发现生脉散合玉女煎治疗组、六味地黄汤治疗组和参苓白术散治疗组视网膜Evans蓝渗漏量明显低于模型组。祖国医学很早就认识到DR，对其治疗积累了几千年的经验。现代中医眼科将DR命名为“消渴目病”。DR患者根据辨证论治可分为：(1)气阴两虚型：治法益气养阴、凉血化瘀，方选生脉散合玉女煎加减；(2)肝肾阴虚型：治法滋补肝肾、活血明目，方选六味地黄汤加减；(3)脾虚气弱型：治法健脾益气、化浊散血，方选参苓白术散加减。STZ糖尿病大鼠表现既消又渴，大便燥结(包括口渴多饮、多尿、多食易饥且消瘦)，其病机应为肾燥精虚，肝肾阴虚，气阴两虚，治以滋补肝肾，活血明目，故方选生脉散合玉女煎、六味地黄汤和参苓白术散。临床研究中发现，采用中医辨证论治DR，在延缓DR的发生、发展，提高病人生活质量，改善视力，促进眼底出血吸收，取得较好疗效。但其治疗效果缺乏客观的评价。本研究采用的视网膜Evans蓝渗漏量为中药治疗DR提供了疗效评价的实验数据。