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多功能酶标仪指拥有多种检测模式的单体台式酶标仪。通常具有比色皿插槽,可检测吸光度(Abs)、荧光强度(FI)、时间分辨荧光(TRF)、荧光偏振(FP)、和化学发光(Lum)。可对以微孔板为体系的实验提供多种不同模式的检测。通常,多功能酶标仪至少可提供“吸收光”、“荧光”、“发光”三种不同的检测模式。一些中高端多功能酶标仪还可完成“时间分辨荧光”、“荧光偏振”、“荧光共振能量转移”等高级荧光检测实验。该仪器适用于临床检验、微生物学、流行病学、免疫学、内分泌学以及农林科学等领域。广泛用于医院、血站、防疫站、生物制品等部门。
酶标仪的分析原理:酶标仪实际上就是一台变相光电比色计或分光光度计,其基本工作原理与主要结构和 光电比色计基本相同,光源灯发出的光波经过滤光片或单色器变成一束单色光,进入塑料微孔极中的待测标本.该单色光一部分被标本吸收,另一部分则透过标本照射到光电检测器上,光电检测器将这一待测标本不同而强弱不同的光信号转换成相应的电信号,电信号经前置放大,对数放大,模数转换等信号处理后送入微处理器进行数据处理和计算,最后由显示器和打印机显示结果。微处理机还通过控制电路控制机械驱动机构X方向和Y方向的运动来移动微孔板,从而实现自动进样检测过程.而另一些酶标仪则是采用手工移动微孔板进行检测,因此省去了X,Y方向的机械驱动机构和控制电路,从而使仪器更小巧,结构也更简单.微孔板是一种经事先包理专用于放置待测样本的透明塑料板,板上有多排大小均匀一致的小孔,孔内都包埋着相应的抗原或抗体,微孔板上每个小孔可盛放零点几毫升的溶液.
光是电磁波,波长100nm~400nm称为紫外光,400nm~780nm之间的光可被人眼观察到,大于780nm称为红外光。人们之所以能够看到色彩,是因为光照射到物体上被物体反射回来。绿色植物之所以是绿色,是因为植物吸收的大部分为红橙光和蓝紫光,但对绿色不吸收,反射出来,所以植物呈现为绿色。
酶标仪测定的原理是在特定波长下,检测被测物的吸光值。?随着检测方式的发展,拥有多种检测模式的单体台式酶标仪叫做多功能酶标仪,可检测吸光度(Abs)、荧光强度(FI)、时间分辨荧光(TRF)、荧光偏振(FP)、和化学发光(Lum)。?酶标仪从原理上可以分为光栅型酶标仪和滤光片型酶标仪。光栅型酶标仪可以截取光源波长范围内的任意波长,而滤光片型酶标仪则根据选配的滤光片,只能截取特定波长进行检测。
现在市场上国产和进口的酶标仪种类较多,但其基本功能不外乎是OD值测定,所不同的是测定波长范围、吸光度范围、光学系统、检测速度、温度控制、数据分析、结果打印、软件功能等方面的差异,下面分别做一简单介绍。
一、 测定波长:酶联免疫测定所使用的波长是400nm至750nm的可见光。每一种物质都有其特定的波长,在此波长下,此物质能够吸收最多的光能量。如果选择其它的波长就会造成结果的不准确,因此,在测定检测物时,我们选择特定的波长进行测量,称为测量波长。在临床实践中,各种试剂的操作多采用单波长测量。? 但是每一种物质对光能量还存在一定的非特异性吸收,为消除这种非特异吸收,我们还可以选择一个参照波长,以消除这个不准确性。在参照波长下,检测光吸收就是非特异性的光,检测波长和参照波长的吸光值之差可以消除非特异性吸收,也即为双波长测定。因此,作为临床领域和疾病控制和防疫领域的实验室,选择400nm至750nm的检测波长范围基本可以满足检测要求。
二、 测量的光学系统和读板速度:光学系统是酶标仪至关重要的组成部分,光源灯的稳定及寿命、光学系统功能如何,都直接影响仪器的吸光度范围、线性度、精密度和准确度,在这些性能指标方面进口设备要比国产设备好一些。
酶标仪的光学系统采用的是垂直光路多通道(通常为8或12通道,亦有单通道)检测,一般为硅光管或光导纤维,除测定通道外,有的酶标仪还有一个参比通道,每次测定可进行自我校准。酶标仪的光学系统功能如何,均可通过酶标仪测定的吸光度范围、线性度、精密度和准确度等体现出来。光学系统好的话,则上述指标也应较佳。测定的精密度与测定通道之间的均一性有直接关系。单通道可避免因通道不同所致的差异。
最初设计的单通道酶标仪读板速度长达2分钟以上,但现在随着工艺水平的提高,单通道酶标仪单波长的读板速度可以达到30秒以内,与多通道酶标仪已无显著差异;同时考虑到无通道差的优点,单通道酶标仪受到不少实验室的欢迎。
三、 吸光度范围 符合以下指标的仪器应该算是较精密的仪器:在波长范围400~750nm,吸光度范围为0-2.5OD时,线性
四、 检测速度?酶标仪的检测速度是指其完成比色测定所需要的时间。检测速度快,有利于提高检测的精密度,即避免由于测定过程中,因测定时间不同所致的各微孔间吸光度间的差异。
五、 震板功能 酶标仪的震板功能是指酶标仪在对ELISA板孔进行比色测定前对其进行振荡混匀,使板孔内颜色均一。目前市场上常见的酶标仪均有震板功能,所不同的是震板方式,有的可按上下、左右或旋转等方式及振荡幅度等任意调节。
六、 其他方面:A、温育功能是指酶标仪本身能按要求自动精确地控制仪器内部的温度,使得ELISA测定中微孔板条的温育过程可在仪器内部完成,而无需再外配温箱。软件功能是指酶标仪所具有的对ELISA定性和定量测定及其他测定方式如酶标动力学、紫外和凝集等数据的统计分析并报告结果的功能。B、软件功能是中高档酶标仪的一个非常重要的功能。如果硬件方面区别不大,则软件就成为判定酶标仪优劣的惟一指标。C、语言界面? 通常进口的中高档酶标仪人机对话多采用英文。这对于某些基层实验室可能会存在语言方面的困难,从而难以最大限度地发挥酶标仪的作用。
酶标仪自问世以来发展迅速,新产品不断推陈出新,型号众多,很难对其全面阐述。目前市场上的多功能酶标仪可谓是琳琅满目、型号众多,是否让您挑的眼花缭乱呢?我们关注多功能酶标仪最重要的特点就是灵敏度、结果的准确性、重复性、应用拓展。这些特点及功能与多功能酶标仪的硬件、光路设计是相辅相成的。虽然不同型号的仪器都能做许多相同的速度、测定周期和每份测定的成本上都有差异。仪器又分为原装进口机、组装机、国产机等。其次要根据医院的规模、门诊及住院病人的多少确定购买何种机型。一般说来世界著名的大公司生产的自动生化分析仪技术性能,先进程度、售后服务都较好,但价格较贵,属首选产品。国产多功能全自动酶标仪知名品牌雷杜、德铁、博科、普朗质量不错,进口品牌BioTek、TECAN、Thermo是不错的选择,不同品牌的仪器往往性能侧重点有所不用,选购之前多了解市场与维修工程师交流,充分了解各家的性能特长和售后情况,反复对比,总能找到最适合自己需要的一款多功能酶标仪。