金属烤瓷修复龈沟白细胞动态测定

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金属烤瓷冠（porcelain-fused-to-metal，PFM）兼有金属的强度和瓷的美观，在中国已被广泛应用于临床，但很多患者在使用一段时间后出现牙龈红肿、龈缘黑线等牙周损伤现象，严重影响了牙冠修复的长期效果[1]。由于烤瓷铸造合金在口腔内可腐蚀释放出离子沉积于牙体表面和牙龈[2]，对与其接触的牙周组织造成一定的刺激，促进牙龈炎症发展[3]，这是引起修复后牙周损伤的重要因素。白细胞介素-8（inter-leukin-8，IL-8）是一种中性粒细胞功能调节因子，对牙周炎的发生、发展起到了重要影响。本研究通过观察不同合金烤瓷冠修复前后龈沟液（gingivalcrevicularfluid，GCF）总量及GCF中IL-8水平的变化，初步探讨不同合金烤瓷冠对牙周组织的影响程度，为临床合理选择金属烤瓷冠提供参考。

1材料和方法

1.1病例选择临床随机选取镍铬合金、钴铬合金、金合金烤瓷修复的患者共计45例，患牙45颗，每组各15例。研究均选取单冠修复的患者，年龄25～45岁。纳入标准：1）牙齿修复前经牙髓电活力检测均为活髓牙，无根尖周、牙周炎症状及影像学改变；2）测试对象无全身急慢性系统病患，无口腔慢性疾患，有良好口腔卫生习惯；3）3个月内未服用抗菌素，未服用免疫抑制剂；4）妇女非妊娠期。由固定临床医师和口腔修复技术人员治疗，制备牙体时不伤及牙龈组织，烤瓷冠边缘与龈边缘齐平。

1.2材料镍铬合金（Bego公司，德国）成分为Ni64.5%、Cr22%、Mo10%、Si2.1%、其他1.4%；钴铬合金（Bego公司，德国）成分为Co60.2%、Cr25%、Mo4.8%、W6.2%、Ga2.9%、其他0.9%；金合金（北京有研亿金公司）成分为Au86.2%、Pt11.5%、Zn与Mn2.3%。烤瓷粉、粘接剂（松风株式会社，日本），临时冠（DMG公司，德国），印模材料（贺利氏公司，德国），石膏粉（上海齿科材料厂），IL-8酶联免疫吸附试验（en-zyme-linkedimmunosorbentassay，ELISA）试剂盒（上海森雄科技实业有限公司）。

1.3方法分别在3组金属烤瓷冠修复前以及修复后1、3、6个月时，使用滤纸吸着法采集每组患牙的龈沟液。将2mm×20mmWhatman（沃特曼）3号滤纸条置于干净容器中待用。用无菌干棉球擦干牙面，以棉花卷隔湿，记录菌斑指数（plaqueindex，PLI）。轻吹牙龈，将滤纸条插入烤瓷冠唇和舌（腭）侧近、远中龈沟中，30s后取出，用游标卡尺测量并记录浸湿面积，剪去干燥部分，放入含200μL0.1%BSA-PBS（pH=7.4）缓冲液的Eppendorf管中，每管放置同一样本的3条滤纸，4℃下10000r•min-1离心10min，取上清液，-80℃冷藏待检。

1.4GCF的测定龈沟液成分与正常人血清相似，可根据正常人血清量与滤纸浸湿面积的标准曲线来确定GCF的量。用进样器分别取正常人血清，以0.5～2.4μL标准量滴于滤纸条一端，30s后用游标卡尺测量滤纸浸湿长度，换算为浸湿面积。计算正常人血清量与滤纸浸湿面积相关系数，并行直线相关t检验，根据标准曲线、样本的滤纸面积计算GCF的量。

1.5IL-8的测定将-80℃冷藏的Eppendorf管取出，室温解冻，离心取上清液，采用双抗体夹心酶联免疫吸附法测定IL-8。反应终止后用酶联检测仪测出光密度（opticaldensity，OD）值，IL-8量与OD值成正比，以标准品稀释后作标准曲线，分别计算出3组金属烤瓷冠在修复前以及修复后1、3、6个月时龈沟液样本中IL-8的含量。IL-8总量（pg）=IL-8检测量×洗提体积，IL-8含量（pg•μL-1）=IL-8总量/GCF量。

1.6统计学分析采用SPSS12.0软件包对数据进行分析，对组间GCF量、IL-8总量、IL-8含量的比较采用方差分析。

2结果

2.1GCF量标准曲线正常人血清量和滤纸浸湿面积呈直线性相关（图1），r=0.987，P＜0.001。2.23组合金不同时期IL-8总量、GCF量、IL-8含量的比较按照IL-8标准品的OD值在半对数纸上作图，画出标准曲线（图2）。根据标准曲线计算得出3组合金不同时期IL-8总量、GCF量、IL-8含量，并与修复前相比较，结果见表1。3组合金在修复后1个月的IL-8总量和GCF量与修复前相比较差异有统计学意义（P<0.05）。镍铬合金在修复后3、6个月IL-8总量和GCF量与修复前相比较差异有统计学意义（P<0.01）。钴铬合金、金合金烤瓷冠在修复后3个月IL-8总量、GCF量回复到修复前水平（P>0.05）。3组合金的IL-8含量在修复前后差异均无统计学意义（P＞0.05）。

3讨论

IL-8属于内源性趋化因子，也是诱导型细胞因子，中性白细胞、巨噬细胞、单核细胞、T淋巴细胞、牙龈成纤维细胞、上皮细胞等均能产生IL-8。IL-8在免疫调节和炎症过程中发挥双重作用，可趋化并活化中性粒细胞，促进溶酶体酶的活性和吞噬效应，同时促进中性粒细胞Ⅰ型和Ⅲ型补体受体的表达，参与免疫调节，促进细胞黏附。有学者[4]用放射免疫技术发现：在有牙龈炎和牙周附着丧失的部位龈沟液中，IL-8的检出率明显高于在牙周健康部位龈沟液中IL-8的检出率。另有学者[5]研究发现：牙周致病菌携带者龈沟液中IL-8的水平与龈炎指数、牙周袋深度、出血指数显著相关。龈沟液中IL-8水平变化能较好地早期显示出牙周组织的炎症反应，可早于其他临床指标反映牙周组织健康程度。金属基底冠腐蚀和金属离子析出的临床可表现为牙龈炎、牙龈出血、口腔异味、龈缘变黑等，若治疗不及时将会导致不可逆的牙周破坏[6]。有学者[7]认为：在严格保证修复体质量的前提下，内冠材料对牙周组织的影响可以忽略不计。也有学者[2，8]则发现不同的内冠材料可引起不同的牙周损害。本研究结果显示：3组合金在修复后1个月的IL-8总量和GCF量均较修复前差异有统计学意义（P<0.05），说明3组合金内冠材料在修复早期均存在对牙周组织的刺激；镍铬合金在修复后3、6个月IL-8总量和GCF量较修复前差异有统计学意义（P<0.01），钴铬合金及金合金在修复后3、6个月IL-8总量和GCF量较修复前差异无统计学意义（P＞0.05），说明IL-8水平变化与不同合金烤瓷冠和戴入时间存在着相关性，3组合金在修复后不同时期可引发不同程度的牙周炎性反应，该结果与以往学者[9-10]临床试验发现不同金属基底烤瓷冠戴入后牙周组织会有不同程度的炎性反应的结论相一致。不同合金析出的金属离子种类和数量存在差异，PFM浸渍在口腔唾液中，烤瓷合金会发生电化学腐蚀，从而使金属离子析出[11]。有研究表明金属离子参与介导了牙周组织细胞免疫反应，造成PFM修复体局部牙周微生态环境变化，引发牙周组织炎症[12]。在口腔唾液中，合金的腐蚀是选择性溶解，镍铬合金中镍、铬等金属离子析出，具有潜在毒性[13]，镍离子可以使白细胞、巨噬细胞炎性因子分泌量增加，并改变中性粒细胞的趋化功能，引发组织炎症反应的炎症介质的持续分泌。钴铬合金可在钝化膜表面形成Cr-O和Cr-OH结构连续致密氧化膜，增加合金耐腐蚀性能，具有很好的生物相容性。贵金属合金化学性能更稳定，金属离子的析出远低于非贵金属析出，从而有更好的生物相容性，未发现其有明显的细胞毒性[14-15]。在伴有咀嚼磨耗下的腐蚀与单纯的腐蚀比较，镍铬合金较钴铬合金、金合金中的金属离子更容易释放。综上分析，3组合金材料理化性质的差异可能是造成镍铬合金烤瓷冠在修复后不同时期GCF量、IL-8总量持续高于修复前水平，而钴铬合金、金合金烤瓷冠在修复3个月后GCF量、IL-8总量回复到修复前水平的主要原因。本研究结果显示，3组合金的IL-8含量在不同时期差异均无统计学意义（P＞0.05）。可能因炎性反应中GCF量和IL-8量均有增加，GCF量的增加产生稀释作用导致IL-8含量相对稳定。由于稀释也是GCF早期防御炎症细胞侵袭牙周组织的方法，提示同步观测GCF总量、IL-8总量和含量3个参数变化更具参考价值。本研究通过对GCF中IL-8水平变化周期性动态检测，说明钴铬合金、金合金较镍铬合金具有更好的生物相容性，预后效果更好，提示临床合理选择修复内冠材料的必要性。3种合金内冠材料是否还存在波动的可能性和规律性有待长期动态检测和进一步跟踪研究。