青牛胆急性毒性实验性研究

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作者：姜月霞，张俊清，刘明生

【摘要】 目的：采用海南青牛胆茎提取物，通过对小鼠急性毒性实验及安全性研究，作出初步评价。方法：取km小鼠50只，雌、雄各半，10只做预试验，另40只按同性别随机分为雌、雄空白对照组(蒸馏水组)和药物组，每组各20只。对小鼠空腹经口灌胃给予青牛胆提取物分别为人临床用量的200倍、400倍和600倍剂量，观察小鼠出现的毒性反应及有无死亡。结果：观察7 d，未见小鼠死亡，所有受试小鼠毛色光洁,活动、饮食和二便正常,两组经t检验,差异无统计学意义(p>0.05)。结论：海南青牛胆未见有明显毒性反应，表明本品安全性较高。

【关键词】 青牛胆;提取物;急性毒性实验;海南省

[abstract] objective: to evaluate the safety of tinospora hainanensis. methods: 200, 400 and 600 times of clinical dosage of tinospora hainanensis extraction were administered to rats by intragastric administration. acute toxicity reactions and death were recorded. results: during 7 days of administration, all rats ate, and discharged normally, kept normal figure and movement. no death was observed. there is no significant difference between the dispersing liver and improving eye?sight and the distilled water group (p>0.05). conclusion: no obvious toxicity reactions were observed and tinospora hainanensis is pretty safe.

[key words] tinospora hainanensis; extraction; acute toxicity test; hainan province

海南青牛胆(tinospora hainanensis h.s.lo et z.x.li)系防己科青牛胆属植物，为海南特有种[1]，在民间广泛用以治疗关节疼痛和筋骨损伤。具有镇痛、松筋、抗炎和抗菌的功效[2]。近年来海南青牛胆药效物质的研究已取得重大进展。通过经典柱色谱的分离，结合体外细胞学实验研究，确定了该复方有效部位为植物总甾酮类化合物，既可显著地抑制钙的流失和促进成骨细胞的形成，亦可改善因钙流失或成骨细胞合成受阻而造成的骨质疏松[3]。为进一步挖掘海南青牛胆的药用价值，确保其安全性，根据中药临床前毒理学评价的指导原则，笔者对海南青牛胆提物进行了急性毒性试验研究, 为开发利用海南青牛胆资源提供了科学根据。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 药物来源 实验用药为醇提海南青牛胆。以95%乙醇回流3次，合并提取液后浓缩，产率为20.13%。

1.1.2 动物 km小鼠50只，体重18～22 g，雌雄各半，由长沙市开福区中创实验动物科技服务部提供。湖南省实验动物质量合格证第002478号。

1.2 方法

1.2.1 预实验剂量确定 为探讨其急性毒性,在预试灌胃测不出ld50的情况下,进行了小鼠最大耐受试验最低剂量组定为6 g/kg，用10只小鼠(雌雄各半)做预试,经观察后,小鼠无一例死亡,也未出现任何中毒现象。故此剂量为安全剂量,经计算可得,此剂量为成人日用量的100倍。将最大浓度溶液(能够用灌胃针头注射为标准)的浓度定为最高剂量组36 g/kg。

1.2.2 急性毒性实验 取km小鼠40只，雌雄各半，随机分成空白组与药物组(按同性别分组), 采用空腹经口灌胃给药，各组药物浓度不同, 灌胃体积相同, 均为每只给药 0.5 ml, 一次性给药，灌胃前禁食12 h, 但不禁水。蒸馏水作为空白对照。每日3 次给药，间隔8 h，然后观察小鼠的死亡、中毒及活动情况,并记录小鼠的体重、饮食变化。连续观察1 周。

1.2.3 观察指标 给药后密切观察12 h，并详细记录观察结果，以后每天上午8～ 9时及下午 3～ 4 时各观察1 h, 并记录观察结果，对其中死亡的动物立即进行尸体解剖检查。连续观察7 d，神经系统方面:(1)行为及反应(包括不正常叫声、烦躁、不安等);(2)运动(包括肌肉抽搐、僵硬、强迫运动等);(3)瞳孔及分泌物(瞳孔有无缩小或放大、流泪等);(4)呼吸及心血管:呼吸急促或过缓、鼻分泌、触心前区心率快慢等;(5)胃肠方面:腹部胀气或收缩、大便坚硬或湿等;(6)泌尿生殖系统:、乳腺肿胀、会肮脏;(7)皮肤和毛:颜色、完整性、有否充血、发疹等;(8)眼:眼睑下垂、眼球突出、震颤等。每天称食量。

1.3 统计学处理

数据的比较采用t检验，检验水准α=0.05。

2 结果

给药后，连续观察7 d，小鼠无出现死亡情况。其中前2 d大便略稀，活动较弱，以后恢复正常。其他未出现明显的中毒现象。处死后解剖观察其心、肝、脾、肺、肾，均无特殊改变。我们记录了小鼠每天的饮食和体重的变化情况，具体数据见图1、2、3和表1。

经检验，雄性、雌性小鼠体重空白组与给药组差异均无统计学意义(p>0.05),小鼠的体重和饮食均增长，可见此药对小鼠并无明显的毒副作用。由实验可知，海南青牛胆以最大给药量给药，小鼠不出现死亡和明显的中毒情况，此时，小鼠的日用剂量为36 g/kg，相当于生药180 g/kg，为临床成人日用剂量600倍以上，故海南青牛胆的安全性较高。表1 最大给药量(mtd)测定

3 结论

对海南青牛胆所进行的急性毒性实验表明,该药的毒性作用极小。用ld50已不能测出其毒性，故只能以最大给药量代之。最大给药量的耐受倍数反映了该药的安全性，本药的最大给药量的耐受倍数相当于临床拟用日剂量的600倍以上，表明其毒副作用已相当微弱，从毒副作用的角度来看，该药是安全的，为临床的安全使用提供了科学依据。

【参考文献】

1 罗献瑞，赵素云.中国防已科资料[j].广西植物，1986，6:51.

2 季宇彬.中药有效成分药理与应用[m].哈尔滨:黑龙江科学出版社，1995.26?26，146?146,270?270,336?336,347?347,461?461.544?544.

3 刘明生.海南青牛胆植物总甾酮的医药用途及其制备方法:中国，zl02128429.6[p].2005?02?23.