HPLC法测定脑灵素胶囊淫羊藿苷含量

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【摘要】目的建立hplc法测定脑灵素胶囊中淫羊藿苷的含量。方法用DiamonsilC18（4.6mm×200mm，5μm）色谱柱，流动相：乙腈-水（26：74），流速：1.0ml/min，检测波长：270nm。结果淫羊藿苷在0.0404～0.504μg范围内与峰面积线性关系好，r=0.99998，平均回收率为98.8%，RSD为1.3%（n=6）。结论本法测定简便，结果准确，重复性和分离度好，可用于脑灵素胶囊的质量控制。

【关键词】HPLC

【Abstract】ObjectiveToestablishaHPLCmethodforthedeterminationoficariininNaolingsucapsules.MethodADiamonsilC18column（200mm×4.6mm,5μm）wasusedwithamobilephaseofacetonitrile-water（26:74）.Theflowratewas1.0ml/minandthedetectionwavelengthwas270nm.ResultsThelinearrangeoficariinwas0.0404～0.504μg（r=0.99998）.Theaveragerecoverywas98.8%withRSD1.3%（n=6）.ConclusionThedeterminationmethodissimple,accurateandcanbeusedforthequalitycontrolofNaolingsucapsules.

【Keywords】HPLC;icariin;Naolingsucapsule;determination

脑灵素胶囊为《卫生部药品标准中药成方制剂第八册》收载的品种［1］，由黄精、淫羊藿、五味子等十五味中药组成，具有补气血、健脑安神等功效。用于治疗神经衰弱，健忘失眠，头晕心悸，身倦无力，体虚自汗，阳痿遗精等症。原标准中无含量测定方法，方中淫羊藿为主要药味,其有效成分为淫羊藿苷。为能有效地控制药品质量，本研究用HPLC测定淫羊藿苷，建立质量控制标准。

1仪器与试药

ShimadzuHPLC色谱仪（LC-20ALiquidChromatograph,SIL-20AAutoSampler,SPD-M20ADiodeArrayDetector,CTO-10ASVPColumnOven）LCSolution色谱工作站。水为Ⅰ级纯化水，乙腈为色谱纯，其他为分析纯。淫羊藿苷对照品购自中国药品生物制品检定所（批号：110737-200312）;脑灵素胶囊：吉林百姓堂药业有限公司（批号：20050702，M平=0.3513g；批号：20060803，M平=0.3622g；批号：20061102，M平=0.3557g；规格：0.35g/粒）.

2试验方法与结果

2.1色谱条件色谱柱：DiamonsilC18柱（4.6mm×200mm，5μm），柱温：35℃，流动相：乙腈-水（26：74），流速：1.0ml/min，检测波长：270nm。

2.2溶液的制备

2.2.1对照品溶液的制备精密称取淫羊藿苷对照品10.09mg，加50%甲醇制成每1ml含淫羊藿苷20.18μg的溶液，备用。

2.2.2供试品溶液的制备取本品10粒，混匀，取2g，精密称定，置锥形瓶中，加50%甲醇50.00ml，称重，超声处理（功率250W，频率33kHz）40min，放冷，用50%甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液。

2.2.3阴性对照溶液的制备取缺淫羊藿的处方，按供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液。

2.3系统适用性试验分别取对照品溶液、样品溶液、阴性对照溶液进样10μl，色谱图见图1。淫羊藿苷峰保留时间为21.333min，阴性对照色谱图在淫羊藿苷峰位置无干扰峰，与其他组分分离完全，分离度为1.7，理论板数以淫羊藿苷峰计算为6239。

图1HPLC色谱图

2.4线性关系考察精密吸取对照品溶液2、5、10、20、25μl，按上述色谱条件测定，以峰面积为纵坐标，以进样量为横坐标，进行线性回归，得方程：

Y=-4.95×103+2.23×106X，r=0.99998，线性范围为0.0404～0.504μg。

2.5精密度试验取对照品溶液连续进样7次，每次10μl，峰面积积分值RSD=0.3%

2.6重复性试验取同一批号（20050702）样品6份，按供试品液制备方法制备，依法测定，结果淫羊藿苷含量RSD=1.2%，表明本法重复性好。

2.7稳定性试验取同一样品溶液（20050702）在0、6、12、24h分别进样10μl，依法测定，淫羊藿苷峰面积RSD=1.3%，表明样品溶液在24h内稳定。

2.8加样回收试验取已知含量的样品（20050702），精密加入淫羊藿苷对照品适量，按样品测定方法测定含量，计算回收率，结果见表1。表1回收率试验结果

2.9样品测定取3批样品，按2.2.2项下方法制备样品溶液，依法测定淫羊藿苷的含量，结果见表2。表23批样品含量测定结果

3讨论

3.1考察流动相中乙腈对淫羊藿苷保留时间和分离度的影响。曾采用抗骨增生胶囊中测定淫羊藿苷的流动相乙腈-水（30：70）［2］，乙腈-水（28：72）、乙腈-水（27：73），结果表明乙腈量增大，保留时间提前，但分离效果差，与杂质峰无法分离，以乙腈-水（26：74）较合适。

3.2在提取方法中，利用黄酮类化合物与聚酰胺柱有亲和力，先水洗洗去杂质，再醇洗得淫羊藿苷类的方法，可除去大部分杂质峰，但某些保留时间与淫羊藿苷接近、影响分离度的关键峰不能除去；同样，碱水提取后酸化，用正丁醇萃取，还是不能解决这个问题。而且操作步骤增加，影响含量的精确性［3］。

3.3在实验过程中，曾采用稀乙醇［2］、70%乙醇、50%甲醇、甲醇为提取溶剂，超声处理（功率250W，频率33kHz）30min、40min、50min、60min［4］，滤过，取滤液，结果表明超声40min、50min、60min含量几乎无变化，且用50%甲醇测得含量最高，故选用50%甲醇超声40min。

【参考文献】

1卫生部药品标准.中药成方制剂第八册.144.

2国家药典委员会.中国药典一部.北京：化学工业出版社，2005，470.

3洪行球,黄燕芬.HPLC测定乳腺康颗粒剂中淫羊藿苷的含量.中成药,2004,26（2）:165-167.

4刘莲英，郭耀武.HPLC法测定益肾灵胶囊中淫羊藿苷的含量.中国药品标准,2004,5（1）:42-43.