HPLC法测定复方硫酸新霉素滴眼液中地塞米松磷酸钠含量

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摘要：目的： 寻找一种只需高效液相色谱仪配备两个泵即可测定复方硫酸新霉素滴眼液中地塞米松磷酸钠含量的流动相。方法： 用高效液相色谱仪检测标准品-地塞米松磷酸钠，根据保留时间，峰形等，选择最佳流动相，并验证此方法测定地塞米松磷酸钠含量在0.2-4.0μg的可行性。结果： 流动相A：峰宽0.8413，保留时间40.84min;流动相B：峰宽0.2102，保留时间2.69min出现肩峰;流动相C：峰宽0.2932，保留时间11.50min。结论： 流动相C可以用于医院对复方硫酸新霉素滴眼液中地塞米松磷酸钠含量。

关键词： hplc法;复方硫酸新霉素滴眼液;地塞米松磷酸钠

ABSTRACT：Objective To look for a mobile phase suitable for two-pump-HPLC to determine the dexamethasone content in neomycin sulfate eye drops. Method the mobile phase A： 0.8413 peak width， retention time， 40.84min， mobile phase B where acromion， peak width 0.2102， retention time， 2.69min， mobile phase C： retention time 11.50min， the peak width 0.2932. Results Methodological research with mobile phase C determination quality of dexamethasone sodium phosphate in the 0.2-4.0 μg feasibility. Precision test，Stability test，Repeat test，Recovery test is consistent with the Chinese Pharmacopoeia.Conclusions mobile phase C was proved to be the best one of three mobile phases. linear relationship between，Precision test， Stability test， Repeat test， Recovery test is consistent with the Chinese Pharmacopoeia; Mobile phase C can be used in hospitals to neomycin sulfate content of dexamethasone in eye drops.

Keywords ：compound neomycin sulfate eye drops; dexamethasone sodium phosphate

复方硫酸新霉素滴眼液又名的确当滴眼液，地塞米松滴眼液，主要成分为地塞米松磷酸钠和硫酸新霉素，其辅料有磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、羟苯乙脂、氯化钠等，收载于《国家药品标准》[1]。

中国药典规定复方硫酸新霉素滴眼液中地塞米松磷酸钠含量测定方法要求高效液相色谱仪必须有三个泵，以三乙胺溶液（取三乙胺7.5ml，加水至 1000ml。用磷酸调节pH值至3.0±0.05）-甲醇-乙腈=55：40：5为流动相[2];但医院的高效液相色谱仪一般只有两个泵。本论文通过实验，寻找一种只需高效液相色谱仪配备两个泵即可测定复方硫酸新霉素滴眼液中地塞米松磷酸钠含量的流动相，以满足医院对于复方硫酸新霉素滴眼液的质量检测与控制。

1 仪器与试剂

Waters e2695-2998高效液相色谱仪（PDA检测器、Empower色谱数据工作站）;AE240分析天平;硫酸新霉素标准品（宜昌三峡制药股份有限公司，纯度> 99%， 批号120703）;地塞米松磷酸钠标准品（中国食品药品检验研究所，含量98.6%）;乙腈、甲醇为色谱纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Eclipse XDB-C18色谱柱（250 mm×4.6mm，5μm），检测波长：242nm;流速：1ml/min;温度：28℃;流动相：三乙胺溶液（取三乙胺7.5ml，加水至1000ml，用磷酸调节pH至3.0±0.05）：甲醇=45：55;R>4.4，理论塔板数不小于7000;进样量：20L。

2.2 溶液配置

2.2.1 空白对照品溶液的配置

取磷酸二氢钠89.02mg、磷酸氢二钠36.40mg用适量热水溶解，加3滴羟苯乙脂，再加硫酸新霉素51.33mg、亚硫酸氢钠30.63mg溶解，过滤后取过滤液1ml用40%的甲醇溶解稀释至25ml作空白对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的配置

在2.2.1项的空白对照品溶液中入适量地塞米松磷酸钠制成地塞米松磷酸钠含量为40？g/ml的供试品溶液。

2.2.3 对照品溶液的配置

精密称取地塞米松磷酸钠约20mg，精密称定，置50ml容量瓶中，加水溶解稀释至刻度，摇匀，精密量取适量，用流动相定量稀释制成40？g/ml的溶液。

2.3 流动相的选择

精密量取2.2.3项下的对照品溶液20μl，注入液相色谱仪，以流动相：A、三乙胺溶液：甲醇=55：45;B、三乙胺溶液：乙腈=45：55;C、三乙胺溶液：甲醇=45：55分别进样测定，结果如图1所示。流动相C相比较其他流动相保留时间合适，且峰形较好。因此选择三乙胺溶液：甲醇=45：55为流动相。

图1 A：流动相A测定结果;B：流动相B测定结果;

C：流动相C测定结果

2.4 方法学评价

2.4.1专属性实验

分别取空白对照品溶液、供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定结果如图2所示。处方中其他成分不干扰地塞米松磷酸钠的测定，表明此方法可行。

图2 复方硫酸新霉素高效液相色谱图：

A空白对照品溶液;B供试品溶液

2.4.2 线性关系考察

精密量取

2.2.3项下的对照品溶液5μl、10μl、20μl、50μl、100μl注入高效液相色谱仪，用流动相C进行检测。以地塞米松磷酸钠的进样量为横坐标（X），以峰面积为纵坐标（Y），绘制标准曲线。计算回归方程为Y=75.119X-1.4396，R2=1，结果表明，地塞米松磷酸钠在0.2-4.0μg范围内有良好的线性关系。

2.4.3精密度

精密量取2.2.3项下的对照品溶液（40μg/ml），进样量20μl，连续重复6次，结果表明RSD%为0.18%（n=6），表明本方法精密度良好，满足测定要求。

2.4.4 稳定性

将2.2.3项下的对照品溶液，按照1.2.1色谱条件，连续重复进样7次，每次间隔4h，结果如表1所示;其峰面积测量值的RSD%为0.17%，符合《中国药典》的要求。

表1 稳定性实验结果

2.4.5重复性

精密量取2.2.3 项下地塞米松磷酸钠对照品溶液20μl，按照2.1色谱条件，采用流动相C，重复进样6次，其峰面积测量值的RSD%为0.20%（n=6），所以重复性符合《中国药典》的要求。

2.4.6回收率

配制浓度为地塞米松磷酸钠对照品溶液80%，100%和120%的地塞米松磷酸钠3种不同溶液，按照2.1色谱条件，分别进样3次，每次间隔4h，结果如表2所示。其回收率平均值为99.65%，RSD%为0.10%，符合《中国药典》的要求。

表2 回收率实验结果

3 讨论

Eclipse XDB-C18色谱柱为非极性色谱柱，在反相色谱中，地塞米松磷酸钠分子极性较大，流动相的极性为流动相C<流动相B<流动相A，故流动相A洗脱速度慢，出峰时间较长;流动相B中乙腈的极性大于甲醇的极性[3]，故其极性较大，并且与地塞米松磷酸钠的极性相近，洗脱速度最快，出峰时间最短，出现肩峰[4];而流动相C流动相的极性适中，峰型良好，出峰时间适当，故流动相C是 A、B、C三流动相中的最佳流动相。

流动相A、B、C都是在《中国药典》中收入的“三乙胺溶液：甲醇：乙腈=55：40：5”的基础上分析产生的，流动相C符合要求具有偶然性，而没有逐个进行实验，并非所有流动相中的最佳流动相[5]。但对流动相C进行线性关系考查、精密度实验、稳定性实验、重复性实验、回收率实验都符合《中国药典》规定。所以流动相C：三乙胺溶液：甲醇=45：55可以满足医院对自制复方硫酸新霉素滴眼液中地塞米松磷酸钠的含量测定。

参考文献：

[1] 国家药典委员会. 国家药品标准（化学药品地方标准上升国家标准第三册） [S] . 2002. 215

[2] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典（二部）[S].北京：化学工业出版社，2010.249-251.

[3] 李发美，王磊，郁韵秋等.分析化学[M].北京：人民卫生出版社，2013：393-394.

[4] Chan ECY，Wee PY，Ho PY，et al.High-performance liquid chromatographic assay for catecholamines and met an ephrines using fluorimetric detection with pre-column 9-fluorenyl methyl oxycarbonyl chloride derivatization [J] .J ChromatogrB，2000，749（2）：179

[5] 毕雪艳，李丽萍.HPLC法测定复方硫酸新霉素滴眼液中的地塞米松磷酸钠的含量.药学学报[J]，2006.22（3）：235-236.