HPLC法测定补肾颗粒中马钱苷的含量

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摘要：目的 建立hplc法测定补肾颗粒中马钱苷的含量。方法 采用kromasil C18 5μm 4.6×250mm色谱柱，以乙腈-水（14∶86）为流动相，流速为1ml/min；检测波长为236nm，柱温为25℃。结果 线性范围为6.384～63.84μg/ml（r2=0.9998），平均回收率为96.20%，RSD=0.7%。结论 所建立方法专属性强、灵敏度高，重现性好。

关键词：补肾颗粒；马钱苷；HPLC

补肾颗粒在《金匮要略》中肾气丸和《小儿药证直诀》中六味地黄丸、《医学心悟》中二冬汤的基础上根据祖国传统中医学理论并结合多年的临床经验化裁而成。处方由山茱萸、熟地、山药、牡丹皮等十二味中药材组成。山茱萸为方中君药，具有补益肝肾、涩精固脱的功效，马钱苷为其主要化学成分之一，因此研究选择马钱苷含量为测定指标。参照中国药典[1]2005年版一部及相关文献报道中马钱苷[2]的含量测定方法，建立了本品中马钱苷的高效液相色谱含量测定的方法。经实验研究，该方法灵敏、精密、重现性好，故本法可用于控制本品中山茱萸的含量。

1 仪器与试药

Agilent1100高液相色谱仪；kromasil C18 5μm 4.6×250mm

色谱柱；FA2004N电子天平，Sartorius BT25S电子天平；岛津UV-2101紫外分光光度计；SK250H超声波清洗仪。

马钱苷对照品（111640--200502 ）购自中国药品生物制品检定所。补肾颗粒批号：20090926、20090928、20090930、（自制）。乙腈为色谱纯；甲醇为分析纯；水为超纯水。

2 方法与结果

2.1色谱条件 采用kromasil C18 5μm；以乙腈-水（14∶86）为流动相，流速为1ml/min；进样量20μl；检测波长为236nm，柱温为25℃。理论板数按马钱苷峰计算应不低于3000。

2.2溶液的制备

2.2.1对照品溶液的制备 取马钱苷对照品适量，精密称定，加60%甲醇制成每1ml含马钱苷20μg 的溶液，即得。

2.2.2供试品溶液的制备 取装量差异下的本品，研细，取约1.2g，精密称定，加60%甲醇25ml，超声30min，放冷，补重，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.3阴性对照溶液的制备 取缺山茱萸药材的阴性样品1.2g，按“2.2.2”项下方法制备，即得。

2.3系统适用性及阴性干扰试验 精密吸取供试品溶液、对照品溶液和阴性对照溶液各20μl，注入液相色谱仪，色谱见图1。由图1可知，在与对照品色谱峰保留时间相应的位置上，供试品有色谱峰出现，而阴性对照无色谱出现，故本品中其他组分对马钱苷的含量测定无干扰。在该色谱条件下，马钱苷分离效果较好，理论板数按马钱苷计算不低于3000。

2.4精密度试验 精密吸取“2.2.1”项下同一对照品溶液21.28μl，重复测定5次，结果：峰面积的相对标准偏差RSD=0.8%，表明本方法精密度良好。

2.5稳定性试验 精密吸取“2.2.2”项下同一供试品溶液21.28μl，分别于0、2、4、6、8进样测定。结果RSD为0.7%，表明马钱苷供试品在8h内稳定性良好。

2.6线性关系考察 精密称定马钱苷对照品5.32mg，置25ml量瓶中，加60%甲醇至刻度；精密量取0.3ml、0.5ml、1ml、2ml、3ml分别置10ml量瓶中，加60%甲醇到刻度，摇匀，精密吸取上述溶液各20μl，照正文色谱条件下测定，记录峰面积，以对照品的浓度（μg/ml）为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程y=34.982x+21.581，r2=0.9998。马钱苷在6.384～63.84μg/ml范围内呈良好的线性关系，

2.7重复性试验 取同一批样品（080926）精密称定5份，按照“2.2.2”项下方法制定供试品溶液，分别进样测定，计算马钱苷，得马钱苷平均含量为0.404mg/g粒，RSD=1.1%。表明本方法的重复性较好。

2.8加样回收率试验 精密称取已知含量的本品约0.2g，共五份，置容量瓶中，分别精密加入五份12.768μg的对照品0.6ml溶液，照含量测定项下的方法试验，计算回收率，见表1。

2.9样品含量测定 分别取各批样品，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，并按2.1项下色谱条件进样测定，计算马钱苷的含量，见表2。

7批样品的平均含量为6.05mg/袋，考虑到实际生产中药材来源的不同及批量生产等因素的影响，取含量均值的75%为含量下限，规定本品每袋含山茱萸以马钱苷计，不得低于4.5mg。

3 讨论

在超声提取时间方面，笔者曾比较三种超声时间，结果超声20min样品马钱苷提取不完全，超声30min与超声50min样品马钱苷提取率相近，因此选择超声30min为提取条件。

在流动相方面，比较了三种流动相：①乙腈-水（15∶85）；②乙腈-水（10∶90）；③乙腈-水（14∶86）。结果以流动相③的出峰时间快，与杂质峰分离好，峰形尖锐对称。故选择乙腈-水（14∶86）为本方法的流动相。

考虑到实际生产中药材来源的不同及批量生产等因素的影响，取含量均值的75%为含量下限，规定本品每袋含山茱萸以马钱苷计，不得低于4.5mg。

综上所述，本试验建立的含量测定方法可为补肾颗粒开展进一步的质量标准研究工作提供基础。

参考文献：

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（第1部）[M].北京：中国医药科技出版社，2010：602.

[2]谢瑞芳，周昕.RP-HPLC 法测定复方自身清颗粒中马钱苷的含量[J].中国药房，2009，20（9）：679.