二氢杨梅素对肝纤维化大鼠脂质过氧化损伤的保护作用
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[摘要] 目的：观察二氢杨梅素对四氯化碳（CCl4）所致大鼠肝纤维化的保护作用，并探讨与抗脂质过氧化有关的作用机制。方法：84只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、复方鳖甲阳性对照组和二氢杨梅素低、中、高剂量组。采用40% CCl4皮下注射制备大鼠肝纤维化模型，造模的同时，二氢杨梅素低、中、高剂量组分别用25 mg/100 g、50 mg/100 g和100 mg/100 g 3种不同浓度的二氢杨梅素进行干预，持续13周，检测肝组织匀浆丙二醛（MDA）含量以及超氧化物歧化酶（SOD）活性变化，光镜下观察肝组织病理学变化。结果：二氢杨梅素可明显降低肝纤维化时升高的MDA含量（P
[关键词] 二氢杨梅素；肝纤维化；脂质过氧化；丙二醛；超氧化物歧化酶
[中图分类号] R575[文献标识码]A [文章编号]1673-7210（2009）06（c）-026-03
Protective effects of dihydromyricetin on lipid peroxidation in rats with hepatic fibrosis
KUANG Manyuan, LUO Mingying, JIA Lei
(Department of Anatomy, Xiangnan College, Chenzhou 423000, China)
[Abstract] Objective: To observe the protective effects of dihydromyricetin on hepatic fibrosis in rats induced by carbon tetrachloride (CCl4), and explore its mechanism related to anti-lipid peroxidation in rats. Methods: 84 male SD rats were randomly divided into six groups: normal group, model group, Fufangbiejia positive control group, lower, middle and high dosages of dihydromyricetin treatment groups. The hepatic fibrosis rat model was developed by subcutaneous injecting 40% CCl4. At the same time, rats were treated with dihydromyricetin at 25 mg/100 g, 50 mg/100 g or 100 mg/100 g. The levels of malondialdehyde (MDA) and superoxide dismutase (SOD) activities in liver tissue were determined, the histopathological change of the liver tissues was observed under optical microscope. Results: Dihydromyricetin could decrease serum level of MDA obviously (P
[Key words] Dihydromyricetin; Hepatic fibrosis; Lipid peroxidation; Malondialdehyde; Superoxide dismutase
藤茶，学名显齿蛇葡萄（Ampelopsis grossedentala），是葡萄科蛇葡萄属多年野生藤本植物的茎叶，具有消炎、止咳、抑菌、镇痛、消脂、抗高血压等功效[1]。显齿蛇葡萄的主要成分为黄酮类化合物，笔者在前期的研究中发现，藤茶总黄酮具有较好的保肝、护肝、抗肝纤维化的作用[2-3]。研究表明，二氢杨梅素是藤茶中含量最高的化学成分（约占40%）[4]，具有抗脂质过氧化、保肝、护肝等作用[5-6]，但其抗肝纤维化作用尚未见报道。本实验采用40% CCl4皮下注射制备大鼠肝纤维化模型[7]，研究二氢杨梅素对肝纤维化大鼠脂质过氧化损伤的保护作用。
1 材料与方法
1.1 实验动物
SD雄性大鼠84只，体重180～220g，由南华大学医学院实验动物学部提供。
1.2仪器与试剂
E260电子天平（梅特勒公司）；低温高速离心机（美国Beckman公司）；二氢杨梅素、白色结晶由湖南中医药大学药学院中药化学教研室提供；复方鳖甲软肝片由内蒙古自治区福瑞中蒙药科技股份有限公司生产；CCl4分析纯购自天津市北宏试剂厂；MDA、SOD测定试剂盒购自南京建成生物工程研究所。
1.3动物分组及处理
84只雄性SD大鼠随机分为6组：正常对照组（A组）、模型组（B组）、复方鳖甲阳性对照组（C组）和二氢杨梅素低、中、高剂量组（D、E、F组），每组14只。正常对照组正常喂养，仅每天与模型组予以同体积的生理盐水灌胃。模型组、复方鳖甲阳性对照组和二氢杨梅素各剂量组予以40％ CCl4橄榄油（将CCl4与橄榄油按体积4∶6配成40%油剂），首剂0.5 ml/100 g，以后0.3 ml/100 g，每周2次皮下注射，共13周。造模的同时，二氢杨梅素低、中、高剂量组分别予以二氢杨梅素25 mg/100 g、50 mg/100 g、100 mg/100 g体重灌胃干预，每次灌胃前将二氢杨梅素以生理盐水分别配制成25、50、100 mg/ml浓度的混悬液，每天1次，共13周。复方鳖甲阳性对照组：将复方鳖甲软肝片原药研磨成粉末，按照100 mg/ml的浓度，与生理盐水配成混悬液，每次按100 mg/100 g体重灌胃，每天1次，共13周。
1.4 取材和标本处理
造模13周后，大鼠处死前禁食12 h，称重后经腹腔注射10%水合氯醛溶液麻醉并固定。在肝右叶取约0.5 g肝组织，在低温条件下剪碎，放入匀浆器中，再加入9倍体积的冷生理盐水，研磨成匀浆后，倒入离心管中，低温高速离心机3 000 r/min，离心15 min，取上清装入Eppendorf管中，保存于-20℃冰箱，按试剂盒说明书测定MDA的含量和SOD的活性。
1.5 统计学处理
数据以均数±标准差（x±s）表示，经SPSS 13.0软件处理，采用单因素方差分析，组间比较采用LSD-t检验，以P
2 结果
2.1大鼠肝脏病理学变化
造模结束时，模型组、复方鳖甲阳性对照组和二氢杨梅素低、中、高剂量组大鼠分别死亡5、2、3、4、2只，正常组无死亡。HE染色（图1）显示，正常组肝细胞结构完整，无变性、坏死；模型组可见肝细胞脂肪变性、水肿，肝索排列紊乱，汇管区及肝小叶内可见明显的炎性细胞浸润，纤维组织增生明显，形成假小叶，证明造模成功。Masson染色（图2）显示，正常组大鼠仅在汇管区见少量胶原纤维；模型组可见较粗的纤维间隔；复方鳖甲阳性对照组和二氢杨梅素各剂量组可见稍细的纤维间隔。
图1 肝组织的HE染色（×200）
（A：正常组；B：模型组；C：复方鳖甲阳性对照组；D：二氢杨梅素低剂量组；E：二氢杨梅素中剂量组；F：二氢杨梅素高剂量组）
2.2 二氢杨梅素对肝组织匀浆MDA含量和SOD活性的影响
与正常组比较，模型组大鼠肝组织中MDA含量明显升高，SOD活性明显下降，差异有统计学意义（P
表1 各组大鼠肝组织匀浆MDA含量、SOD活性比较（x±s）
与正常组比较，#P
3讨论
肝纤维化是多种致病因素作用于肝细胞引起肝细胞变性、坏死后的共同病理基础，是肝脏纤维组织过度沉积的过程，表现为细胞外基质的合成大于降解[8]。CCl4诱导的大鼠肝纤维化模型是研究肝纤维化的经典模型[9]。CCl4进入机体后，可直接溶解肝细胞膜，且在肝细胞内质网中经肝微粒体内依赖于细胞色素P450的混合功能氧化酶的代谢后，生成有活性的三氯甲基自由基和氯甲基自由基，它们与肝细胞内的大分子发生共价结合，也可攻击膜不饱和脂质，引发活性氧自由基的产生和脂质过氧化，损伤肝细胞，促使肝脏纤维化形成。MDA是氧自由基与细胞膜表面不饱和脂肪酸脂质过氧化反应的终末产物，SOD是细胞内天然的氧自由基清除剂。研究表明，肝纤维化的发生、发展与氧自由基损伤、脂质过氧化有关，肝组织中脂质过氧化产物MDA含量明显增加，SOD活性不同程度地降低[10-12]。本研究中，在采用CCl4诱导制备大鼠肝纤维化模型的同时，给予不同浓度的二氢杨梅素干预，从组织切片发现3个不同剂量组的大鼠肝脏纤维组织增生、脂肪变性、炎性细胞浸润均低于模型组，肝纤维化病理改变明显得到改善，说明二氢杨梅素对CCl4诱导的大鼠肝纤维化有较好的预防、保护作用。同时，随着剂量的增大，二氢杨梅素低、中、高剂量组升高的MDA有不同程度的降低，降低的SOD有不同程度的升高，说明二氢杨梅素能提高肝组织的抗氧化酶活性，抑制自由基的产生及其引起的脂质过氧化反应，并清除氧自由基，使大鼠肝纤维化程度减轻，提示抗脂质过氧化损伤作用可能是二氢杨梅素抗肝纤维化的作用机制之一，为进一步研究和开发藤茶提供基础。
[参考文献]
[1]易诚.显齿蛇葡萄研究进展[J].经济林研究,2004,22(3):51-56.
[2]邝满元,王岐本,李映菊,等.藤茶总黄酮对大鼠肝纤维化的防治作用[J].现代生物医学进展,2008,8(12):2445-2447.
[3]邝满元,刘映霞,李映菊,等.藤茶总黄酮抗大鼠肝纤维化的作用[J].南华大学学报:医学版,2008,36(6):745-747.
[4]何桂霞,裴刚,周天达,等.显齿蛇葡萄中总黄酮和二氢杨梅素的含量测定[J].中国中药杂志,2000,25(7):423.
[5]伍杨.凤鸣藤茶抗氧化作用的研究[J].湖北民族学院学报:医学版,2006,23(3):14-15.
[6]何桂霞,杜方麓,杨伟丽,等.藤茶总黄酮清除氧自由基与抗脂质过氧化作用[J].中药材,2003,26(5):338-340.
[7]邝满元,刘映霞,李映菊.肝纤维化动物模型造模方法的研究进展[J].现代生物医学进展,2008,8(9):1768-1770.
[8]赵建学,陆玮婷,郭海燕,等.肝纤维化与细胞因子的研究新进展[J].中国医药导报,2008,5(4):19-21.
[9]Wu J, Norton PA. Animal models of liver fibrosis [J]. Scand J Gastroenterol,1996,31(12):1137-1143.
[10]Kim SH, Cheon HJ, Yun N, et al. Protective effect of a mixture of Aloe vera and Silybum marianum against carbon tetrachloride-induced acute hepatotoxicity and liver fibrosis [J]. J Pharmacol Sci,2009,109(1):119-127.
[11]Shi HY, Xu JW, Ren XX. Effect of genistein on hepatic stellate cell proliferation and lipid peroxidation in vitro [J]. Nanfang Yike Daxue Xuebao,2008,28(11):2066-2068.
[12]何燕,胡志峰,李平,等.柴胡皂苷抗肝纤维化大鼠脂质过氧化作用的研究[J].中国中药杂志,2008,33(8):915-919.
（收稿日期：2009-03-25）