肺炎支原体肺炎诱导痰中肺炎支原体核酸检测研究

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【摘要】 目的：探讨肺炎支原体核酸诊断支原体肺炎的敏感性和特异性，为该病的早期快速准确诊断提供依据。方法：选择98例肺炎支原体肺炎（MPP）患儿作为研究对象，分别检测患儿诱导痰中MP-IgM、MP-DNA，比较两种检测方法的结果及与金标准培养法检测结果的一致性。结果：MP-IgM、MP-DNA检测结果的一致性较好，两种检测结果与金标准培养法检测结果的一致性较好。结论：肺炎支原体核酸的检测结果准确性较好，能够为肺炎支原体肺炎的早期诊断提供一定参考。

【关键词】 支原体； 肺炎； MP-DNA； MP-IgM； 一致性

【Abstract】 Objective： To investigate sensitivity and specificity of mycoplasma pneumoniae nucleic acid diagnosis for mycoplasma pneumoniam， provide basis for early rapid and accurate diagnosis. Method： 98 mycoplasma pneumonia （MPP） children were selected as research subjects， and detected induced sputum MP-IgM， MP-DNA. To compare the results of the two methods consistent with the gold standard culture method test result. Result： MP-IgM， MP-DNA test results were in good agreement and the gold standard culture assay result was in good agreement. Conclusion： Result accuracy of the mycoplasma pneumoniae nucleic is better， able to provide some reference for early diagnosis of mycoplasma pneumonia.

【Key words】 Mycoplasma； Pneumoniae； MP-DNA； MP-IgM； Consistency

First-author’s address： Zhongshan Guzhen People’s Hospital， Zhongshan 528421， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2015.31.047

肺炎支原体肺炎（MPP）是临床上较为常见的儿童呼吸道感染疾病，肺炎支原体（MP）是常见病原体[1]。MPP的临床表现缺乏特异性，容易误诊[2]，为能够早期确诊MPP，避免贻误病情，需要一种能够快速、准确诊断MPP的检查方法。MP核酸检查在MPP的早期诊断中得到一定应用，但关于其检查敏感性和特异性的报道较少。本研究选择了98例肺炎支原体肺炎（MPP）患儿，对比了MP-IgM、MP-DNA检测结果与金标准培养法检测结果的一致性，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2010年1月-2013年12月本院住院诊断为肺炎支原体肺炎98例患儿作为研究对象，所有患儿均符合《诸福棠实用儿科学》（第7版）关于MPP的诊断标准[3]，X线检查提示为片状阴影炎症浸润。其中男57例，女41例；年龄1～12岁，平均（6.2±1.3）岁；病程2～31 d，平均（18.4±5.9）d。98例患儿均采集痰液样本置于-70 ℃冰箱中保存待检。

1.2 诱导痰采集 诱导之前，为有效清洁患儿空腔、咽喉、后鼻部污染物，需进行充分漱口。以浓度为3%高渗盐水超声雾化吸入，若感觉有痰液随时咳出到清洁平皿中，为避免出现支气管痉挛问题，雾化时间不应超过30 min。选取痰液标本时，取符合标准的痰液1 mL，加入等量的痰液蓄积保护液，旋涡震荡3 min，使其均匀，并于4 ℃环境下2000 r/min离心10 min，取上清液，将采集到的痰液样本置于-70 ℃冰箱中保存待检。

1.3 检测方法 肺炎支原体免疫球蛋白（MP-IgM）、肺炎支原体DNA（MP-DNA）的检测均由广州金域医学检验中心完成。MP-IgM采用酶联免疫吸附试验，MP-DNA采用聚合酶链反应（PCR）检测。

1.4 统计学处理 使用PEMS 3.0软件对统计数据进行处理及分析，组间一致性采用Kappa检验，并以U检验排除抽样误差影响。以Kappa系数大小划分6个区段的方法以表达结果一致性的强弱：（1）极差，Kappa系数

2 结果

MP-IgM、MP-DNA检测结果的一致性较好，两种检测结果与金标准培养法检测结果的一致性较好，见表1～3。

3 讨论

肺炎支原体（MP）是儿童呼吸道感染的常见病原体，MPP是儿童呼吸道感染的常见疾病。婴幼儿是MPP发病的高危群体[4]，但是其具体发病机制仍不十分清楚。一般认为，MP感染成为重症肺炎的重要原因，MP会攻击并破坏机体的免疫系统，导致免疫防御屏障不完整，在MP表面电子致密P1蛋白末端结构的作用下，使其黏附于呼吸道黏膜上皮细胞上，进而破坏支气管、细支气管的黏膜层，破坏上皮纤毛活动，诱发阵发性咳嗽[5]。有试验在MPP患儿的血液、脑脊液、皮肤水泡、胸水中分离出了MP，但是目前尚没有权威资料证实MP侵入和MPP发病之间存在直接因果关系[6]。丛玲等[7]认为，细胞免疫与体液免疫在MPP的发病过程中担任了非常重要的角色，其作用发挥方式包括激活B细胞和T细胞，激活NK细胞、细胞毒性T细胞以及巨噬细胞的溶细胞活力，激活免疫活性细胞并使其产生细胞白介素（如IL-2、IL-4、IL-6等）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）等，在炎性细胞因子的浸润作用下，肺泡壁会逐渐增厚，导致组织损伤。有研究结果显示，处于急性感染期的MPP患儿会出现明显的细胞免疫功能抑制，表现为淋巴细胞对MP的反应显著降低，对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等生物抗原的反应性下降[8]。综合上述分析可知，MPP患儿存在免疫系统平衡遭到破坏情况，T淋巴细胞遭到抑制，尤其是CD8+T细胞、B淋巴细胞被激活，导致体液免疫功能失调。尽管目前MPP的发病机制尚不明确，但有一点有非常明确的，MPP是多种因素综合作用的结果，单一病因无法解释肺外所有症状，MP对呼吸组织的直接侵犯作用不足以诱发MPP，而宿主免疫反应改变在MPP发病过程中显得更加重要。因此，临床上普遍以免疫指标的变化情况作为MPP临床诊断、轻重判定、治疗和预后的重要依据。

免疫球蛋白M（IgM）分子质量最大的免疫球蛋白，广泛分布于体液中，占血清Ig的5%～10%，能够有效抵御菌血症的发生，在机体的早期免疫应答中作用明显[9]。IgM在胚胎发育晚期的胎儿即可以产生，是个体发育过程中最早合成和分泌的抗体；同时，IgM在初次体液免疫应答中出现抗体的时机也最早，是机体抗感染的先锋。如果血液检测结果提示检出IgM，则表明机体近期有感染，因此，IgM在临床上通常用于感染疾病的早期诊断。IgM具有较强的溶血、溶菌功能，抗原结合能力和补体激活能力也较强。血液中的免疫复合物质在其他器官当中也可沉积并使其受损，重症MPP患儿多会伴发一种或多种肺外并发症，如脑炎、心肌炎、肾小球肾炎以及溶血性贫血等。临床经验显示，抗体量和MPP的病情轻重存在高度相关性，也表明肺炎支原体肺炎患者存在着体液免疫功能紊乱情况。周岳年[10]研究认为，MPP的病程越长，MP-IgM抗体的阳性率越高，患儿的感染程度、免疫功能均会影响肺炎支原体抗体的检出率；另外，由于婴幼儿的免疫系统尚未完全发挥作用，出现MP感染时，患儿有可能会发生不出现抗体的情况，对MP-IgM抗体的阳性率产生影响，最终影响检查的准确性[11]。MP-IgM检查的优点在于操作简单、检测费用低，大约1 h内便可以获得检测结果，有利于临床的早期诊断；加之检测时不需要特殊仪器，适于在基层医院中广泛推广使用。在本研究中，MP-IgM抗体检测结果与MP-DNA检测、金标准培养法检测结果均保持了较高的一致性，证实MP-IgM抗体检测结果具有良好的准确性。

核酸是生命的最基本物质之一，根据化学组成不同，核酸可分为核糖核酸（RNA）和脱氧核糖核酸（DNA）。相对于血清免疫学检测方法，聚合酶链反应（PCR）法检测MP-DNA检出率的准确性要更高、特异性要更强、敏感性要更高。采用诱导痰检测肺炎支原体DNA，样本获得简便，且检测时间短、特异性强、灵敏度高，抗体水平对检测结果基本上没有影响，只要标本中含有残存的DN段，便可以检出[12]。这在很大程度上弥补了肺炎支原体IgM高峰时间出现较晚，患儿免疫系统发育尚不成熟，无法对MP做出正确免疫应答等不足。虽然该方法的检出准确率高，检出结果时间较短（低于3 h），但是由于该方法需要特殊的检测仪器，在推广方面具有一定难度[13]。由于优秀的第三方检测机构也能够提供良好的MP-DNA检测服务，可以在一定程度上解决上述问题。综合来看，MP-IgM抗体检测所需时间更短、费用更低，但是漏诊率更高，适合于病程较长的患儿；MP-DNA检测能够了解MP在患儿体内的感染与复制情况，对于早期诊断、疾病复发判定均有较大帮助。

在本研究中，MP-DNA检测结果与金标准培养法检测结果均保持了很好的一致性，表明MP-DNA检测结果准确性很好，能够为MPP的临床诊断提供有益参考。另外，根据临床经验，肺炎支原体IgM阳性的患儿的平均病程约为1周，所以，对于临床上高度怀疑MPP患儿，可以在患儿1周病程内采集诱导痰样本进行肺炎支原体DNA检测，而待患儿病程超过1周后再进行肺炎支原体IgM检测，以提高诊断的可靠性，也能够提高病情和预后判断的科学性。对于免疫系统尚未发育完善的年龄低于2周岁的患儿，可以采用同样方法进行肺炎支原体DNA检测，并对肺炎支原体IgM进行动态观察，将两种检测方法进行有效结合，大幅度提高MP的检出率，利于MPP的早期诊断和早期治疗。综上所述，笔者认为肺炎支原体核酸的检测结果准确性较好，能够为肺炎支原体肺炎的早期诊断提供一定参考，如两种方法在临床上相互结合使用能够发挥最佳效果。

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（收稿日期：2015-05-14） （本文编辑：王宇）