奥硝唑血药浓度的高效液相色谱法测定
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【摘要】目的：研究奥硝唑血药浓度的测定及该药在人体的药动学。方法：采用反相色谱柱Hypersil ODS C18，流动相为甲醇：0.02 mol/L KH2PO4(30:70)，流速0.9 ml/min，检测波长318 nm，柱温30 ℃。结果：奥硝唑在2.5～50 μg/ml范围内呈良好线性关系，r=0.9999。回收率为97.4%～109.3%，RSD 0.2%。结论：该方法灵敏、准确、简单、快速，可用于临床奥硝唑血药浓度监测。
【关键词】奥硝唑；高效液相色谱法；血药浓度
文章编号：1009-5519（2008）05-0655-02 中图分类号：R9 文献标识码：A
Determination of ornidazole in plasma by HPLC
CAI Zhen
（Department of Internal Medicine，The Fifth Affiliated Hospital，Guangxi Medical University，Liuzhou 545001，China）
【Abstract】Objective：To establish HPLC method to determine the serum concentration of ornidazole.Methods：The ornidazole was extracted form serum and the applied column was Diamonsil C18.The mobile phase was methanol -0.02 mol/L KH2PO4(30:70)；the folw rate was 0.9 ml•min-1，the detection wavelength was set at 318 nm.Results：The standard curve was linear in the range of 2.5～50 ug•ml-1，r=0.9999.The average recovery was 97.4%～109.3%，RSD 0.2%.Conclusion：The method is simple，accurate，specific and could be used in the pharmacokinetic study of ornidazole.
【Key words】Ornidazole；HPLC；Blood concentration
奥硝唑(ornidazole，ONZ)是继甲硝唑、替硝唑之后的第三代新型硝基咪唑类衍生物，ONZ具有良好的抗厌氧菌和抗原生质(如滴虫)感染作用，通过分子中的硝基在无氧环境中还原成氨基或通过自由基的形成，与细胞分子相互作用而导致微生物死亡。可广泛用于治疗由厌氧菌、阿米巴原虫、贾滴虫、毛滴虫等感染引起的各种疾病。本实验建立了奥硝噢血浆浓度测定的反相高效液相色谱法，并用此法研究了该药在健康人体的药动学。结果表明，该方法具有操作简捷，回收率高，重复性好等特点，可以满足临床快速测定的需要[1]。
1 仪器与试药
岛津LC-10AT泵，岛津SPD-10AVP紫外检测器，反向色谱柱Hypersil ODS C18（4.6mm×150mm，5μm，大连依利特科学仪器有限公司）；微量注射泵(浙江医科大学医用仪器厂)，BP211D型电子天平（德国塞多利斯股份公司）。奥硝唑对照品(山西普德药业有限公司050301)，甲醇为色谱纯，冰醋酸为分析纯，水为灭菌注射用水，其余试剂均为分析纯。
2 色谱条件
色谱柱：色谱柱Hypersil ODS C18（4.6 mm×150 mm，5 μm）流动相为甲醇：0.02 mol/L KH2PO4(30:70)，流速0.9 ml/min，检测波长318nm，柱温30℃，进样体积20 μl。
3 方法与结果
3.1 标准溶液的配制：精密量取奥硝唑对照品1 ml，配制成0.5 mg/ml的甲醇液作为标准溶液，置4℃冰箱中保存备用，用时以水稀释成不同浓度的奥硝唑系列溶液。
3.2 血清样品处理：取待测血样200 ul于1.5 ml塑料离心管中，加入乙腈溶液400 ul，震荡60s后，10 000 r/min离心10min后，取上清液20 ul注入色谱柱进行分析。奥硝唑保留时间为7.06 min。
3.3 标准曲线的制备：取0.5 mg/ml的奥硝唑储备液，分别在6支1.5 ml塑料离心管中各加入不同浓度奥硝唑溶液使成2.5、5、10、20、25、50 ug/ml，在试管中加入空白血清200 ul，然后按血样处理方法处理。经HPLC分析，测得奥硝唑峰面积(F)作横坐标，以血清药物浓度(C)为纵坐标，得到2.5～50 ug/ml范围的血清奥硝唑浓度标准曲线。直线方程为：Y=11685.11X－13920.61 r=0.9999（n=6）。奥硝唑的保留时间为7.06min。
3.5 加样回收率与精密度测定：空白血清加入不同浓度奥硝唑储备液，使其浓度分别为2.5、20、50 ug/ml，每次进样20 ul，按标准曲线所述方法处理，进样测定奥硝唑峰面积，结果代入回归方程，计算得加样回收率。以上3种浓度样品在同日内测定5次，连续测定5天，计算日内及日间精密度（RSD）。见表1。
4 讨论
4.1 据文献报道，奥硝唑在318 nm处有最大吸收值，故选择318 nm为检测波长[2]。
4.2 本研究选用乙腈沉淀处理血样，提高了效率简化了步骤，达到了生物样品分析的要求。采用一次提取后，直接取上清液进样进行紫外色谱分析，所取血清仅为0.2 ml，且进样量仅为20 μl便达到实验要求，既提高了灵敏度又减少了样品杂质，保证色谱柱能进行大量样品的连续分析。实验操作过程简单、快速、检测结果准确、灵敏度高、重复性好，可以作为临床的奥硝唑血药浓度监测使用。
4.3 本法简便、灵敏、快速，单管仅需7.06 min。
参考文献：
[2] 戴景发，陈新峰，郭文献. 奥硝唑的临床应用[J].海峡药学，2005，17（6）：143.
[2] 汝 玲，陈 汇，庞雪冰，等.人血中奥硝唑浓度高效液相色谱法测定的改进[J].中国新药杂志，2004，13（11）：1027.
收稿日期：2007-10-21