nm23\Ki-67在原发性胆囊癌中的表达及意义

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摘 要 目的：研究胆囊癌组织中nm23、ki-67的表达水平与胆囊癌临床生物学行为的关系。方法：采用免疫组化SP法检测57例原发性胆囊癌中MMP-2、nm23、Ki-67的表达。结果：nm23在胆囊癌中表达率为64.9%，慢性胆囊炎的腺体中表达率为23.5%；高分化胆囊癌中表达率为69.6%，中分化胆囊癌中表达率为66.7%,低分化胆囊癌中表达率为56.2%，转移组表达率为48.5%，非转移组表达率为87.5%；Ki-67在胆囊癌中表达率为68.4%，慢性胆囊炎的腺体中表达率为11.8%；高分化胆囊癌中表达率为56.5%，中分化胆囊癌中表达率为61.1%,低分化胆囊癌中表达率为93.8%，转移组表达率为81.8%，非转移组表达率为50.0%。结论：nm23、Ki-67的联合检测可作为临床判断胆囊癌转移潜能及治疗预后的参考指标。

关键词 胆囊癌 免疫组化 nm23 Ki-67

doi:10.3969/j.issn.1007-614x.2012.03.199

原发性胆囊癌是一种较少见的消化道恶性肿瘤，早期诊断困难恶性程度高，预后差。癌的过度增殖和转移是影响胆囊癌预后的重要因素，本研究采用免疫组化方法对57例胆囊癌中的nm23、Ki-67的表达情况进行分析，以探讨nm23、Ki-67的表达与胆囊癌的发生及转移的关系。

资料与方法

一般资料：2000年4月～2011年4月收集手术切除的胆囊癌存档蜡块57例，男32例，女25例，年龄36～75岁，平均52.4岁。依据组织学特点，其中高分化23例，中分化18例，低分化16例；依据有无淋巴结或或远处转移分为转移组(Nevin Ⅳ、Ⅴ期)33例，非转移组(Nevin Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期)24例。所有患者均为首次发现，未经化疗或放疗并行手术切除，切除标本均经10%福尔马林液固定，常规石蜡包埋。另选取单纯性慢性胆囊炎的存档蜡块17例作为对照。

方法：所有标本作4μm连续切片，免疫组化染色。用免疫组化SP法检测，兔抗nm23单克隆抗体、鼠抗Ki-67单克隆抗体及SP试剂盒购自福建迈新生物技术有限公司。染色程序严格按照试剂盒内说明书进行，用PBS缓冲液代替nm23单抗和Ki-67单抗做阴性对照。

结果判断标准：nm23蛋白阳性表达为胞浆内见棕黄色颗粒，Ki-67蛋白阳性表达为核内见棕黄色颗粒。随机观察10个高倍镜视野，计数显色细胞所占比例，将表达情况分为阴性(-)即显色细胞数＜10%和阳性(+)即显色细胞数≥10%两级。

统计学处理：应用SPSS13.0统计软件分析，采用X2检验及相关性检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

结 果

nm23蛋白的表达：57例胆囊癌中有37例nm23蛋白阳性(64.9%)，17例慢性胆囊炎的腺体中4例nm23蛋白阳性(23.5%)，两组比较差异有统计学意义(X2=9.076，P=0.03)。23例高分化胆囊癌中16例阳性(69.6%)，18例中分化胆囊癌中12例阳性(66.7%),16例低分化胆囊癌中9例阳性(56.2%)，组间差异无统计学意义(P＞0.05)。转移组33例中16例阳性(48.5%)，非转移组24例中21例阳性(87.5%)，两组间比较，差异有统计学意义(X2=9.286，P=0.02)。

Ki-67蛋白的表达：57例胆囊癌中有39例Ki-67蛋白阳性(68.4%)，17例慢性胆囊炎的腺体中2例Ki-67蛋白阳性(11.8%)，两组比较差异有统计学意义(X2=17.012，P＜0.001)。23例高分化胆囊癌中13例阳性(56.5%)，18例中分化胆囊癌中11例阳性(61.1%),16例低分化胆囊癌中15例阳性(93.8%)，组间比较，差异有统计学意义(X2=6.703，P=0.035)。转移组33例中27例阳性(81.8%)，非转移组24例中12例阳性(50.0%)，两组间比较，差异有统计学意义(X2=6.510，P=0.011)。

nm23与Ki-67蛋白表达的相关性：nm23、Ki-67共阳性21例，共阴性2例；nm23阳性伴Ki-67阴性16例，nm23阴性伴Ki-67阳性18例,；nm23表达与Ki-67表达呈负相关性(C=-0.341，P=0.009)。

讨 论

nm23基因是美国的Steeg等从小鼠黑色素瘤细胞中分离出来并确定的转移抑制基因，其编码的蛋白有H1和H2两个亚型，能抑制肿瘤细胞的转移。该基因的低表达已被证实在多种肿瘤中与高转移潜能呈负相关，有学者认为可以作为判断预后的指标。本研究发现nm23蛋白在胆囊癌和慢性胆囊炎腺体中的表达有差异，说明nm23蛋白的表达与胆囊癌的发生相关。nm23蛋白在不同分化程度的胆囊癌中表达程度不等，但差异无统计学意义，提示nm23蛋白的表达与胆囊腺癌的分化无关。nm23蛋白在发生转移的胆囊癌中表达显著低于未发生转移的胆囊癌中的表达，提示nm23蛋白表达的下调可能与胆囊癌的转移有关，呈负相关性，结果与郑长黎等研究结果相符。因此笔者认为，nm23蛋白的表达可能与胆囊癌的发生相关，表达下调与癌的转移负相关，可作为胆囊癌预后的判定指标之一。

Ki-67蛋白是与增殖细胞相关的核抗原，与细胞的有丝分裂关系密切，不表达处于DNA修复状态的细胞，是检测肿瘤细胞增殖活性的可靠标记。许多研究表明，Ki-67表达与多种恶性肿瘤的分化、浸润及转移密切相关。本研究中Ki-67在胆囊癌中的表达显著高于慢性胆囊炎腺体的表达，差异有统计学意义，与万云乐等的研究结果相符。Ki-67在不同分化程度的胆囊癌中表达差异有统计学意义，说明Ki-67的表达与胆囊癌的分化和发展密切相关。Ki-67在伴有转移和不伴转移的胆囊癌中的表达有显著性差异，Ki-67的表达与胆囊腺癌的转移呈正相关，可作为胆囊癌发生、发展及预后的参考指标之一。

研究中发现，nm23与Ki-67在胆囊癌中的表达呈负相关性，但两者之间的相关性由谁起主导作用尚有待进一步研究。胆囊癌和其他恶性肿瘤一样是多基因序贯异常，相互配合引起的多基因病。本研究认为，若能对手术切除的胆囊癌组织进行nm23和Ki-67联合检测，有利于进行转移的预测，能对患者的治疗及预后给出更客观评价。

参考文献

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