HBsAg弱阳性结果的检测分析

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【关键词】乙型肝炎表面抗原;酶联免疫吸附试验;灰区

酶联免疫吸附试验(ELISA)是检测乙肝表面抗原和乙肝两对半较常用的检测方法,实验中弱反应性结果在不同实验室、不同试剂和方法学之间往往有较大的差异。我们按照样本的吸光度(A)值高低将弱反应区分为可疑、弱阳性两个部分进行研究,为正确了解弱反应结果实质提供可靠的依据。

1 材料与方法

1.1 样本来源2009年1～12月本院住院、门诊患者及体检者血清样本5400份。

1.2 仪器深圳雷杜RT-6000酶联仪;雷杜RF-3000洗板机、Abbotti2000SR免疫荧光分析仪。

1.3 试剂科华公司hbsagELISA定性检测试剂、Abbott公司HBV定性检测试剂HBsAgELISA定性检测试剂购自金豪公司;1ng/ml HBsAg定值参比血清由卫生部临床检验中心提供。

1.4 方法和检测流程先用科华公司的检测HBV血清标志物(HBVM)再用Abbott试剂对弱反应性样本进行定量的检测;定性和定量的结果不符合者采用金豪公司定性试剂进行验证,二种定性试剂均有反应者判断为有反应性,反之阴性。将1ng/ml定值参比血清稀释成0.5、0.1、0.05、0.01ng/ml系列浓度,分别采用科华公司的试剂和Abbott试剂重复检测5次,取平均值作为其最终检测的结果。

1.5 判断标准

1.5.1 HBsAg定性可疑的标准将 ELISA定性检测A值为0.063～0.126(s/co0.6～1.2)范围定义为灰区(以“0”表示),对该范围标本进行2份的复检,其中至少有一份为灰区者为可疑,反之为阴性(试剂阴性对照要求A≤0.05,A=0.065是因洗板不充分造成半颜色反应的最低吸光度值)。

1.5.2 HBsAg定性弱阳性标准将ELISA定性检测A值为0.142～0.2(s/co1.2～1.9)范围的标本进行2份复检,2份检测A值均在该范围弱阳性(以“±”表示)。其中一份在该范围为可疑,2份均无反应则报告为阴性。

1.5.3 HBsAg定量的阳性标准≥0.05IU/ml 有反应性,HBsAg含量在1.0IU/ml以下者2份进行复检,如只有一份有反应性须根据中和实验的结果确定阴阳性,2份均无反应则报告阴性。

1.5.4 HBsAg中和试验确定阳性标准测定同一份标本加入和未加中和抗体的HBsAgA值,其中和率(%)≥50%为HBsAg确定实验阳性。

2 结 果

2.1 科华公司ELISA定性试剂检测结果 5400份样本中HBsAg可疑者48份(0.89%),弱阳性41份(0.76%)。

2.2 弱反应样本经Abbott试剂定量检测结果对48份可疑样本和41份弱阳性样本进行定量检测,结果阳性者分别为38份和32份,符合率为79.17%和78.05%,其HBsAg含量x(s)分别为2.18 IU/ml和2.56IU/ml。

2.3 HBsAg定性和定量结果不一致样本分析 对5份HBsAg定性弱阳性而定量阴性标本,采用金豪公司试剂进行验证,结果有2份呈弱阳性,其中1份样本可疑,建议做HBV-DNA定量检测。

2.4 HBsAg中和试验结果上述41份HBsAg定性弱阳性标本中,有3份标本含量在1.0IU/ml以下呈反应性,2份标本为阳性,其1份样本一周后复查仍为阳性。

3 讨 论

HBV普遍将导致常规试剂检测A值降低[1],同时有部分血清HBsAg呈低水平状态存在,因此忽视弱反应性结果尤其是阳性判断值以下的结果将造成该人群的漏检,其次检测试剂阳性判断值的设立方法决定了灰区的客观存在;不同试剂由于使用材料纯度、组合、来源、方法学的不同,以及国产定性试剂检测存在变异系数大[2]等因素均会造成结果差异,也影响到弱反应结果的报告。因此除选择质量较好的试剂、订购长批号试剂,对定性检测过程进行标准化以减少变异系数外,还应根据实验结果设立本实验室合适的灰区和弱阳性标准,并对弱反应样本及少见模式样本进行严格复查,并对结果的解释应结合临床及其实验数据进行综合分析,以免绝对化。

【参考文献】

[1] 田拥军,覃莉,刘慎沛,等.8种国产HBsAg试剂盒检测变异HBsAg效果评价.临床检验杂志,2007,25(4):250-252.

[2] 陈伟华,吴朝梅,冯志山.七家三级甲等医院HBV标志物测定结果可比性的调查.临床检验杂志,2007,25(2):157.