细胞增殖论文范文精选

【摘要】目的探讨人乳铁蛋白(hLF)对体外培养细胞生长特性的影响。方法MTT法评定hLF对人鼻咽癌细胞、中国仓鼠卵巢细胞、人肝脏细胞的生长抑制作用。结果乳铁蛋白对人鼻咽癌细胞系CNE的增殖有抑制作用并呈现剂量依赖性，对正常细胞无抑制作用。结论hLF可能是一种效果较好的新的抗肿瘤化学剂。

【关键词】人乳铁蛋白；癌细胞；细胞增殖

人乳铁蛋白(HumanLactoferrin，hLF)是主要存在于人乳清中的球蛋白，乳汁别是初乳中含量最高，具有广谱抗菌、抗病毒、抗肿瘤等作用。国外有学者将其应用于肿瘤患者的治疗，但是对其作用机制的研究较少。目前国内较少有关于hLF作用于细胞的报道，我们选用易早期转移的鼻咽癌(NPC)细胞作为研究对象，以中国仓鼠卵巢细胞(CHO)、人肝脏细胞(L02)作为正常细胞对照，观察hLF在体外是否具有抑制癌细胞生长的作用，探讨hLF抗肿瘤的作用机制，从而为肿瘤的治疗提供研究基础，为临床实验及应用提供新的理论依据。

一、材料与方法

1.1材料人鼻咽癌细胞(CNE)、中国仓鼠卵巢细胞(CHO)、人肝脏细胞(L02)均购自中国科学院上海细胞资源中心。重组hLF(Lot:L0520，溶于PBS中，储存浓度5mg/ml，-20℃储存备用)和噻唑蓝(MTT，Lot:M2128)均购自Sigma公司。RPMI1640、胎牛血清购自HyClone公司。其他试剂均为分析纯。

1.2实验方法

1.2.1细胞培养各细胞系均应用含10%胎牛血清和1%青链霉素的RPMI1640培养基，5%CO2，37℃培养。

1.2.2MTT法检测细胞增殖设空白对照组和hLF干预组。待细胞生长至对数生长期，接种于96孔细胞培养板，接种数为5×104/孔。每组细胞设5个平行孔，各组细胞分别加入不同浓度的hLF(0，1.25×10-3,2.5×10-3，5×10-3，10×10-3，20×10-3，40×10-3g/L)，每孔均为200μl。作用24h后，加入MTT(5g/L，每孔20μl)，继续培养4h，测定A570nm吸光度。

【摘要】本研究以内皮细胞培养液（EndoM）培养小鼠骨髓内皮细胞，探讨粒巨噬系集落刺激因子（rmGMCSF）对骨髓内皮细胞增殖的影响。用EndoM培养小鼠骨髓内皮细胞，通过WrightGiemsa染色计数内皮细胞集落、应用免疫荧光法观察内皮细胞表型；加入不同浓度的GMCSF，通过集落形成率、MTT法和流式细胞术检测内皮细胞生长周期，观察GMCSF对内皮细胞体外扩增的影响。结果表明：EndoM诱导的骨髓细胞可以生成内皮细胞集落，vWF检测呈阳性；集落形成率检测及MTT法测定均证实GMCSF对内皮细胞的增殖具有明显的促进作用；生长周期检测结果显示，GMCSF处理组的细胞进入S期的比率为9.3%，而对照组为2.1%，说明GMCSF可以通过促使内皮细胞进入S期而加快细胞的分裂，促进细胞增殖；比较第1代和第4次传代后细胞的生长曲线，两者无明显差别，说明多次传代后的细胞仍保持传代早期的增殖潜能。结论：GMCSF对内皮细胞的增殖具有促进作用，经多次扩增传代后内皮细胞的增殖潜能无明显改变。

【关键词】骨髓内皮细胞GMCSF细胞增殖

EffectsofGranulocyteMacrophageColonyStimulatingFactoronGrowthofMurineBoneMarrowEndothelialCells

AbstractThepurposeofthisstudywastoinvestigatetheeffectsofgranulocytemacrophagecolonystimulatingfactor(GMCSF)onthegrowthofmousebonemarrowendothelialcells.Endothelialcellculturemedium（EndoM）wasusedtoculturemurinebonemarrowendothelialcells.EndothelialcellcolonieswerecountedundermicroscopebyWrightGiemsastaining.TheeffectofdifferentconcentriationofGMCSFontheproliferationofbonemarrowendothelialcellswasobservedbytheformationofendothelialcellcolonies,MTTandflowcytometry.TheresultsindicatedthattheendothelialspecificmarkervWFwasexpressedbythecolonycells,GMCSFpromotedtheproliferationofbonemarrowendothelialcellcoloniesandMTTconfirmedtheeffectofGMCSFonpromotingtheproliferationofbonemarrowendothelialcells.TheresultofdetectingcellcycleshowedthattherateofcellsenteringintoSphasewas9.3%inGMCSFaddedgroupandtherateofcellsenteringintoSphasewas2.1%incontrol.Therewasnosignificantdifferenceincellgrowthcurvebetweenthefirstpassageandfourthpassage.ItisconcludedthatGMCSFcanpromotetheproliferationofbonemarrowendothelialcells,theproliferationpotentialofbonemarrowendothelialcellsbetweenthefirstandfourthpassagenosignificantlychanges.

Keywordsbonemarrowendothelialcells;GMCSF;proliferation

JExpHematol2007;15(3):622-625

目前，已有许多报道证明内皮细胞（endothelialcells,EC）、内皮祖细胞（endothelialprogenitorcells,EPC）可以用来治疗缺血性心脏病以及各种疾病引起的肢体缺血［1,2］也可以用于组织工程的血管构建［3］，并取得了一定的成果。Kawamoto等［4］报道，EPC对缺血心脏病进行治疗具有良好的效果，一方面减少了缺血组织的面积，同时改善了心脏的功能。Kalka等［5］则报道了利用EPC对肢体缺血的小鼠模型进行治疗，实验结果表明了EPC能显著增加缺血肢体的灌流，而且组织学检查发现缺血部位毛细血管的数目也大大增加。内皮细胞的来源有多种，可以从外周血、脐血及骨髓中获得［6］，而外周血中的内皮祖细胞来源于骨髓。从病人自体的骨髓中获得内皮细胞，一方面来源比较方便，而且也可以避免GVHD的发生。但是由于骨髓基质细胞种类多，难以分离纯化骨髓内皮细胞或内皮祖细胞。本研究用本实验室配制的内皮细胞培养液（EndoM）体外培养小鼠骨髓细胞，分离纯化骨髓内皮细胞及内皮祖细胞，并观察粒巨噬系集落刺激因子（rmGMCSF）对小鼠骨髓内皮细胞体外增殖的影响以及体外增殖后内皮细胞增殖机能的改变，这对临床运用内皮细胞或内皮祖细胞治疗疾病有一定的指导意义。

动物

论文关键词糖尿病足中医证型胫后动脉血管细胞核增殖相关抗原临床研究

论文摘要目的：探讨糖尿病足中医辨证分型与血管细胞核增殖相关抗原的表达差异。方法：对32例截肢的糖尿病足患者按中医辨证分为气血两虚瘀阻证、脉络瘀热证、脉络热毒证和气阴两虚瘀阻证，分别对其截肢肢体的胫后动脉应用免疫组化法对细胞核增殖相关抗原（Ki67）的表达进行观察、分析。结果：Ki67的阳性表达与糖尿病足动脉硬化闭塞程度呈负相关，与血管炎症病变程度呈正相关。结论：炎症在糖尿症的大血管病变的过程中起到了重要的作用。

糠尿病足是糖尿病的严重并发症，据统计1996年全球糖尿病患者1．2亿，预计到2025年，将达到2．5亿以上，而大约15％的糖尿病患者将在其生活的某一时间发生足溃疡或坏疽[1]。目前对于糖尿病足病因及发病机制虽然还不是完全清楚，但大家公认糖尿病合并大血管病变导致动脉粥样硬化是糖尿病足发病的最主要因素。现将2004年10月～2005年5月间我们收治的32例糖尿病足患者的截肢动脉标本的血管细胞核增殖相关抗原(Ki67)与其中医辨证分型的相关性研究情况报告如下。

1临床资料

1．1一般资料：32例均为天津医科大学代谢病医院和天津中医学院第一附属医院2004年10月～2005年5月间的住院患者，其中男性24例，女性8例；年龄50～86岁，平均年龄69．2岁；糖尿病病程最长30年，最短6年，平均18±2．4年。

1．2诊断标准：糖尿病足的诊断标准采用2000年中华医学会糖尿病学会第二届糖尿病足会议所制订的“糖尿病足(肢端坏疽)检查方法及诊断标准”。

1．3截肢标准：参照国际糖尿病足工作组编写的《糖尿病足国际共识》中关于“大截肢的定义、标准和指标”[2]执行。

1．4中医辨证分型标准：参照《中医外科学(第七版)》及《中药新药临床研究指导原则·脱疽》之中医辨证分型方案分为气阴两虚瘀阻证、脉络瘀热证、气血两虚瘀阻证、脉络热毒证四型。

[摘要] 目的 探讨雷帕霉素对乳腺癌多药耐药细胞系MCF-7/ADR的耐药逆转作用。方法 MTT法测定10μM雷帕霉素、阿霉素（10、50、100、500、1000、5000、20000、40000、100000ng/mL）、雷帕霉素联合阿霉素对MCF-7和MCF-7/ADR细胞的增殖率的影响。结果 对于MCF-7细胞的增殖率，10μM雷帕霉素对其无显著影响；500ng/mL及以上浓度的阿霉素显著降低增殖率；联合10μM雷帕霉素后，能降低增殖率的浓度仍是500ng/mL及以上。对于MCF-7/ADR细胞，10μM雷帕霉素对其增殖率无显著影响；40000ng/mL及以上浓度的阿霉素降低其增殖率；联合10μM雷帕霉素后，1000ng/mL及以上浓度的阿霉素能降低其增殖率。结论 雷帕霉素对MCF-7/ADR细胞有耐药逆转作用。

[关键词] 雷帕霉素；乳腺癌；多药耐药；逆转

[中图分类号] R737.9 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2011）24-11-02

The Initial Exploration about Reverse Effect of Rapamycin on Multidrug Resistance of Human Breast Cancer Cell

SHEN Xiangdi QIU Rong FAN Xingli CHEN Jian LIU Dandan

Zhejiang Medical College， Hangzhou 310053， China

[Abstract] Objective To explore the reverse effect of rapamycin on multidrug resistance of human breast cancer cell MCF-7/ADR. Methods MTT was applied for detecting the proliferation rates of MCF-7 cells and MCF-7/ADR cells which treated by rapamycin （10μM）， ADM （10，50，100，500，1000，5000，20000，40000，100000ng/mL），or rapamycin combined with ADM. Results For the proliferation rate of MCF-7 cells，rapamycin （10μM） did not affect it， ADM （500，1000，5000，20000，40000，100000 ng/mL） reduced it，and combined with rapamycin， the concentration of ADM which could reduce it was greater than or equal to 500 ng/mL. For the proliferation rates of MCF-7/ADR，rapamycin （10μM） did not affect it， ADM （40000，100000ng/mL） reduced it，and combined with rapamycin，the concentration of ADM which could reduce it was greater than or equal to 1000ng/mL. Conclusion Rapamycin could reverse the multidrug resistance of MCF-7 cells.

[Key words] Rapamycin； Breast cancer； Multidrug resistance； Reverse

摘要:目的观察甘精、地特和人胰岛素对3T3-L1前脂肪细胞增殖和分化的影响。方法用甘精、地特和人胰岛素干预3T3-L1前脂肪细胞,并用MTT和油红O染色法测定其增殖和分化水平。结果甘精胰岛素(1.013±0.007)可促进前脂肪细胞增殖,地特胰岛素(0.990±0.009)可抑制前脂肪细胞增殖；胰岛素为前脂肪细胞分化的必须成分,促分化作用人胰岛素(0.638±0.006)最强,甘精胰岛素(纯品0.623±0.007，液体0.445±0.006)次之,地特胰岛素(0.412±0.006)最弱。结论不同胰岛素对前脂肪细胞增殖分化的影响不同。

关键词：胰岛素 前脂肪细胞 增殖 分化

中图分类号：R255.4R587.1文献标识码：B文章编号：1672-1349(2011)05-0545-02

糖尿病的发病率呈现快速增长,胰岛素是糖尿病治疗中不可替代的药物。胰岛素的发展经历了动物胰岛素、基因工程人胰岛素和胰岛素类似物三个阶段。甘精胰岛素和地特胰岛素作为胰岛素类似物出现,已广泛应用于临床［1］。脂肪组织是胰岛素的重要靶器官之一,前脂肪细胞具增殖能力,且能分化为脂肪细胞,作用持续于人的一生,其增殖和分化能力影响脂肪组织的构建。本文拟比较甘精、地特和人胰岛素对3T3-L1前脂肪细胞增殖分化的影响,从而指导临床选择不同的胰岛素对糖尿病患者进行个体化治疗。

1资料与方法

1.1主要实验用品及化学试剂DMEM-F12培养基、胰蛋白酶购自Gibco-BRL公司；胎牛血清购自杭州四季青生物有限公司；青霉素、链霉素购自华北制药厂；噻唑兰、二甲基亚砜、人胰岛素、甲状腺素、地塞米松、1-甲基-3-异丁基黄嘌呤均购自Sigma公司；油红O染料购自Amersco公司；地特胰岛素由诺和诺德公司提供；甘精胰岛素液体和纯品由甘李药业有限公司提供。

1.2试验方法

1.2.13T3-L1前脂肪细胞的复苏准备37 ℃的温水,从液氮罐中取出冻存管,迅速投入温水中。在水中来回晃冻存管1 min左右,观察到冻存液基本融化。将冻存管中液体吸入离心管中,1 000/min离心5 min,吸弃上清,加入新的培养基,吹打均匀,使得细胞分散,以104/mL密度接种,放入CO2培养箱中培养。

【摘 要】血管平滑肌细胞是血管中膜的主要成分，血管紧张素Ⅱ可诱导血管平滑肌细胞从血管壁的中膜向内膜层迁移，并且不断增殖和合成细胞外基质蛋白，最终导致高血压等心血管疾病的发生。本文对近年来血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞增殖相关调控因素研究的新进展做了综述。

【关键词】血管平滑肌细胞；血管紧张素Ⅱ；增殖

血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells，VSMCs）的主要功能是通过协调收缩和舒张活动来维持血管张力。VSMCs是许多动脉疾病的细胞水平的根源，其加速生长潜能是血管疾病进展的关键因素。VSMCs表达的蛋白质能促进血管壁的炎症反应，并且与血管疾病的发展有关。人血管平滑肌细胞的体外培养是血管研究中的重要模型，并将对血管疾病的药理学和治疗研究提供大量信息。

血管紧张素Ⅱ（angiotensinII，AngII）是肾素-血管紧张素-醛固酮系统的主要效应因子，是血管紧张素中最重要的组成部分，是由血管紧张素Ⅰ在血管紧张素转化酶的作用下，水解产生的多肽（八肽）物质。人体的血管平滑肌、肾上腺皮质球状带细胞以及脑的一些部位、肾脏器官和心脏的细胞上存在着血管紧张素受体。AngⅡ能与血管紧张素受体结合，作用于血管平滑肌，使全身微动脉收缩，动脉血压升高；而长时间慢性刺激VSMCs可促进其增殖、肥大及衰老[1]。AngⅡ、氧化应激、炎症等因子的共同作用下可导致VSMCs从血管壁的中膜向内膜层迁移，并且不断增殖和合成细胞外基质蛋白，使血管内膜增厚，血管腔变窄，血管弹性降低，最终导致高血压、动脉粥样硬化等心血管疾病的发生。

1 植物活性成分抑制血管平滑肌细胞增殖

李自立[2]等通过体外培养大鼠胸主动脉VSMCs，检测白藜芦醇和血管紧张素对VSMCs增殖能力的影响。得出结论，白藜芦醇对于VSMCs对于Ang II所诱导的增殖有着较强的抑制效果，不同浓度下作用效果有所差异。王琛[3]等发现姜黄素可通过减少一氧化氮合酶诱导的一氧化氮合成，下调P47phox的表达抑制ROS产生、提高SOD和Gpx的活性，进而抑制Ang II诱导的VSMCs内氧化应激反应。从而具有了抑制Ang II诱导VSMCs的增殖及氧化应激作用。胡娜[4]等通过建立大鼠胸主动脉平滑肌细胞增殖模型，研究香青兰总黄酮对Ang II诱导的大鼠主动脉VSMCs增殖与迁移的作用。通过与对照组比较，Ang II组能显著刺激大鼠VSMCs的增殖和迁移，香青兰总黄酮不同剂量组联合Ang II可在一定程度上抑制Ang II诱导的VSMCs增殖，迁移以及细胞内PCNA的表达，且呈现一定的剂量依赖关系趋势。杨冬梅[5]等发现竹节参皂苷Iva甲酯抑制Ang II诱导的VSMCs增殖与迁移，其机制可能与上调PTEN蛋白，降低NF- kB蛋白表达有关。沈嫣婧[6]等采取组织贴块法培养大鼠主动脉VSMC，研究山核桃叶总黄酮及其4种单体化合物球松素查尔酮、松属素、白杨素、汉黄岑素对Ang II诱导的VSMCs增殖和迁移的作用。得出结论，山核桃叶总黄酮能有效抑制Ang II诱导的VSMC增殖和迁移；白杨素、汉黄岑素、松属素和球松素查尔酮对Ang II诱导的VSMC迁移的抑制作用强于对其诱导的VSMC增殖的抑制作用。侯化化[7]等利用组织块贴壁法培养大鼠胸主动脉VSMCs，通过MTT比色法检测VSMCs的增殖，采用流式细胞仪检测细胞周期。探讨吴茱萸碱对Ang II所致大鼠VSMCs增殖周期的影响，并探讨其机制。发现吴茱萸碱可促进NO的合成、释放，通过阻滞VSMCs与G0/G1期是抑制VSMCs增殖的机制之一。郜攀[8]等体外培养大鼠胸主动脉VSMCs，采用细胞计数法检测VSMCs增殖情况，探讨白藜芦醇对Ang II诱导的VSMCs增殖的影响极其可能机制。实验表明，白藜芦醇可抑制Ang II诱导的VSMCs增殖，其机制可能与腺苷酸活化蛋白激酶的激活有关。刘守钾[9]等探讨毛莨总苷对肾性高血压大鼠的血压、血清一氧化氮、血浆和心肾组织中Ang II以及VSMCs内钙的影响。得出结论，毛莨总苷能降低肾性高血压大鼠的血压，其降压作用可能与其能显著的升高大鼠NO水平及拮抗Ang II引起的VSMCs内钙升高有关。张蕴慧[10]等通过激光共聚焦显微镜技术观察到钩藤碱和异钩藤碱对Ang II诱导的VSMCs[Ca2+]i超载有显著抑制作用。汪云开[11]等观察芍药苷对Ang II刺激下离体大鼠胸动脉平滑肌细胞增殖的影响和基质金属蛋白酶-2活性的影响。发现芍药苷可能通过升高NO和NOS水平抑制Ang II诱导的平滑肌细胞增殖。任艳青[12]等通过原代培养大鼠VSMC，建立Ang II诱导VSMC增殖模型，MTT法观察发现淡豆豉异黄酮抑制Ang II诱导的VSMC增殖作用机制可能与阻止细胞由G0/G1期进入S期，进行VSMC细胞周期的调控有关。杨蕾[13]采用Ang II刺激 A7r5细胞建立细胞增殖模型。采用CCK-8法检测细胞增殖，发现天麻钩藤饮对Ang II诱导VSMCs（A7r5）增殖有抑制作用，升高NO和NOS水平可能是其发挥作用的机制。许银燕[14]等应用MTT法，CellTiter-GloAssay法检测细胞增殖，观察不同浓度的大豆异黄酮对Ang II诱导的大鼠胸主动脉VSMCs增殖的影响。得出结论，大豆异黄酮可呈剂量依耐性的抑制Ang II诱导的VSMC增殖，该作用可能通过上调iNOS基因表达、升高NO水平实现的。

2 药物调控血管平滑肌细胞增殖

钟广伟[15]等研究发现平肝潜阳方可抑制Ang II诱导的VSMCs增殖和迁移，可导致基因组DNA高甲基化，其DNA甲基化水平改变可能与DNA甲基转移酶1表达有关。梁瑞峰[16]等采用组织贴块法培养大鼠主动脉平滑肌细胞，结果与模型对照组比较，15%的降压宝蓝片含药血清可抑制Ang II诱导的平滑肌细胞增殖和迁移。张乐[17]等研究油酰乙醇胺对Ang II刺激大鼠主动脉VSMCs增殖的抑制作用以及对P38信号通路的影响。得出结论，油酰乙醇胺对VSMCs的增殖有抑制作用，其机制可能是抑制了p38MAPK信号通路。邱敏[18]等观察萘哌地尔衍生物YM Ⅲ对Ang II诱导的自发性高血压大鼠VSMC增殖的影响，并初探其作用机制。发现YM Ⅲ可明显抑制Ang II诱导的自发性高血压大鼠 VSMC增殖，作用机制可能与其抑制Agt、c-myc mRNA表达，从而抑制细胞DNA合成和细胞周期的进展有关。邓志生[19]等探讨吡哆胺对Ang II诱导的自发性高血压大鼠VSMCs增殖的影响极其作用机制。实验结果表明，吡哆胺可能通过抑制晚期糖基化终产物的形成、降低胞内活性氧簇水平，减少晚期糖基化终产物受体、核因子кBP65、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷磷酸氧化酶P47 phox表达，从而有效抑制Ang II诱导的VSMCs增殖作用。郭玉璜[20]等^察不同类型的降压药物对自发性高血压大鼠（SHR）动脉VSMCs钠泵、钙泵活性及分泌Ang II的影响。发现萘诺普利、伊贝沙坦和氨氯地平能提高SHR动脉VSMCs膜离子泵活性，并影响其分泌Ang II。任利群[21]等探讨罗格列酮对Ang II诱导的VSMCs增殖的影响及可能的机制。得出结论，罗格列酮至少部分通过上调Ang II2型受体表达，阻止VSMCs从G0/G1向S期、G2/M期转化，从而抑制Ang II诱导VSMCs的增殖、迁移，发挥血管保护作用。罗延福[22]等探讨阿托伐他汀钙对Ang II诱导的高血压患者肠系膜动脉平滑肌细胞内NADPH氧化酶-活性氧通路传导和促细胞增殖的干预作用。结果表明，阿托伐他汀钙可以部分抑制高血压患者体内Ang II的促平滑肌细胞增殖及诱导细胞内NADPH氧化酶-活性氧通路。

【摘要】目的 探讨PCNA、凋亡与子宫内膜异位症恶变的关系，并为肿瘤划分良、恶性及判断预后提供指标。方法 本研究应用免疫组化及细胞凋亡原位检测技术（TUNEL法）检测PCNA、凋亡在30例子宫内膜异位症恶变肿瘤中的表达，对异位区与恶变区进行比较。结果 子宫内膜异位症恶变内膜PCNA表达(增殖指数PI=31.7391±20.19395) 及凋亡细胞表达（凋亡指数AI=9.0000±6.27631）均明显高于子宫内膜异位症内膜（PI=13.9130±10.76152;AI=5.2609±2.86431）（p

【关键词】子宫内膜异位症恶变 PCNA 凋亡

中图分类号：R711.71文献标识码：B文章编号：1005-0515（2011）12-078-02

前言

子宫内膜异位症为妇科常见的疾病之一，Sampson(1925年)[1]首次报道子宫内膜异位症恶变病例，进来国内外的文献报道越来越多[2]，虽然子宫内膜异位症是良性病变，但少数呈具有恶性潜能的肿瘤性病变过程[3]。

众多研究表明，肿瘤的发生与细胞的异常增殖及凋亡失调有关。

增殖细胞核抗原(PCNA)又称周期素，是评价细胞增殖活性的良好指标。

细胞凋亡(apoptosis),即程序性细胞死亡，是在生理或病理条件下，由基因调控的细胞主动程序化死亡过程。

【摘要】 目的：观察重组人表皮生长因子(recombinant human epidermal growth factor，rhegf) 对人表皮细胞增殖的变化。方法：运用包皮环切术后收集培养角质细胞，不同浓度的重组人表皮细胞生长因子处理细胞，mtt法测细胞生长率；流式细胞仪检测细胞周期以及蛋白的表达。结果：5～10 ng·ml-1重组人表皮细胞生长因子可促进人表皮细胞细胞生长。流式细胞仪检测10 ng·ml-1重组人表皮细胞生长因子处理后细胞增殖明显, s和g2/m期细胞数明显增加。结论：重组人表皮细胞生长因子可促进细胞生长以及切口愈合。

【关键词】 重组人表皮细胞生长因子；人表皮细胞；增殖

细胞增殖、分化、成熟的调控依赖多种活性蛋白质及多肽，统称为生长因子。目前已发现包括表皮生长因子(epidermal growth factor, egf)在内的多种生长因子。重组人表皮生长因子(recombinant human egf，rhegf)是通过人工合成的表皮生长因子基因片段在大肠杆菌表达系统进行有效表达而获得的可促进多类细胞生长的多肽类物质, 其活性和结构与天然产物高度一致[1]。具有广泛的促进细胞增殖和组织再生的生物学活性，对体表创伤、烧伤和溃疡等创面的治疗具有较大的临床应用价值。在制备过程中不同的提取以及纯化方法对多肽的活性影响较大，本文就应用细菌发酵法获得的rhegf对人表皮细胞的增殖作用进行研究。

1材料及方法

1.1试剂

重组人表皮生长因子，细菌发酵法获得。dmem、prmi?1640培养基为美国gibeo产品，小牛血清、胎牛血清为成都哈里生物工程有限公司；mtt为美国sigma产品。

1.2实验方法及结果

1.2.1表皮细胞取材以及培养包皮环切术后标本，pbs洗涤三次，眼科剪剔除多于皮下组织；25%trypsin冷消化过夜，分离表皮与真皮，并去除真皮，制备细胞悬液；1000 rpm×10 min离心，去上清，培养基重新混悬细胞沉淀，用血细胞计数仪计数，并用台盼兰染色，了解细胞存活率。将上述细胞悬液按一定细胞密度接种于培养皿中，置37 ℃，5%co2孵箱中；2天～3天换液一次；当细胞长满瓶皿70～80%时，根据需要传代或冻存细胞。

关键词 干细胞 生物学本质 五行相生 肾精 中医基础理论 学术争鸣

中医理论中，五行相克的生物学含义就是能量代谢的过程，以此为原则，可以对现有解剖器官进行重新划分（文章待发表）。虽然如此，五行相生的生物学含义还是很模糊。中医五行学说中相生相克是紧密联系的，仅阐明相克而没阐明相生就很难被认为是在遵从中医的理论。中医认为先天之本在于肾，后天之本在于脾。如果分别从肾和脾入手，五行可以被分拆为四个环，即先天相生环、相克环和后天相生环、相克环。后天相克环起点为脾，生物学实质就是能量代谢过程。先天相生环起点为肾，生物学实质没有得到阐述，只有将这个环的生物学本质进行阐明后，中医理论中最核心的问题才能最终得到解决。

1 中医脏腑理论中肾的功能

现代中医理论认为，肾的主要生理功能包括：主藏精，主水，主纳气[1]。肾主水，是指肾具有主持和调节水液代谢的作用，这种功能同西医的泌尿系统没有差异。中医界也把泌尿系统纳入脏腑中的肾，男性生殖系统归为脏腑中的肾后能够部分解决肾藏精的问题，但仍让人感到欠缺。了解肾精的生物学含义是解决中医五行相生的着眼点。

肾藏精是指肾具有封藏和存储人体精气的作用。《素问・六节藏象论》说：“肾者，主蛰，封藏之本，精之处也。”精的含义有广义和狭义之分。狭义之精是指禀受于父母而储藏于肾的具有生殖繁衍作用的精微物质，又称生殖之精。这相当于解剖中的生殖系统，特别是男性生殖系统。广义之精泛指构成人体及维持人体生长发育、生殖和脏腑活动的精微物质，是生命之源，故《素问・金匮真言论》说：“夫精者，身之本也。”精的来源有两种，即先天之精和后天之精。先天之精又称肾本脏之精，是禀受于父母，与生俱来的构成人体原始生命物质；后天之精又称五腑六脏之精，是由脾胃化生并灌溉五腑六脏的水谷精微[1]。

这里五谷之精和西医所指的营养物质几乎没有差别。而先天之精，即肾精的含义远超出了现代西医泌尿生殖系统的功能。中医没有结合现代生物学、生理学等学科来定义肾精的含义，但是也大致描述出肾精的功能特点，这些特点包括：①促进生长发育作用；②主生殖；③化生血液；④抵御外邪[1]。如果能够在现代西医研究成果中找到符合上述特征的解剖结构和细胞系统也就可以被认为是肾精。近些年关于干细胞的研究恰好有利于中医关于肾精的的理解。

2 干细胞研究进展以及与肾精的关系

早在19世纪末，已经有科学家在医学文献中使用“干细胞”这个词。干细胞的研究是在20世纪90年代才不断取得突破、发展，美国《科学》杂志公布的1999年十大科学成果中名列榜首，并于2000年再度入选世界十大科学成果。简单的讲，干细胞是指一类具有无限的或者较长期的自我更新能力而尚未分化的细胞，它能够产生至少一种以上类型的特化细胞。根据这一定义，在个体发育的不同阶段的不同组织均存在着干细胞，只是随着发育过程的延伸，干细胞的数量和分化潜能均逐渐下降[2]。

【摘要】 目的：观察姜黄素对碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）促进人视网膜色素上皮细胞（RPE）增殖的抑制作用。方法：取体外培养的人RPE细胞，分为空白组（加入1%小牛血清培养液）、对照组（加入1%小牛血清及5 ng/ml bFGF的DMEM培养液）和实验组（加入1%小牛血清、5 ng/ml bFGF及加入5、10、20 mg/L姜黄素的DMEM培养液），MTT法检测姜黄素对bFGF促进的RPE细胞表达的影响。结果：10 mg/L处理组48 h和20 mg/L处理组24、48 h均能显著抑制bFGF诱导的RPE增殖（P

【关键词】 姜黄素； 碱性成纤维细胞生长因子； 视网膜色素上皮细胞

中图分类号 R774.1 文献标识码 B 文章编号 1674-6805（2014）7-0148-02

姜黄素具有抗感染、抗氧化、抗增殖作用，还可以抑制肿瘤细胞生长，诱导肿瘤细胞凋亡，可以抑制RPE细胞的增殖。本实验观察姜黄素对碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）促进人RPE增殖的影响，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 RPE细胞

来源于笔者所在医院孕24周以上引产胎儿眼。

1.2 试剂