细胞骨架范文精选

DOI：10.3760/cma.j.issn.1671-0282.2014.08.008

基金项目：全军医学科学技术研究“十二五”发展计划重点项目（BWS12J018）；国家自然科学基金（81071529，81101467，81101406）

作者单位：510010 广州，广州总医院重症医学科 全军热区创伤救治与组织修复重点实验室

通信作者：苏磊，Email：

【摘要】目的 研究热打击对培养人骨骼肌细胞（HSKMC）通透性、细胞骨架及细胞周期影响。

访法 流式细胞仪钙离子内流检测热打击对HSKMC细胞膜通透性的影响，考马斯亮蓝R-250染色法检测热打击对HSKMC细胞骨架影响，流式细胞仪检测热打击对HSKMC细胞周期改变。结果 给予培养人HSKMC细胞不同温度梯度热打击1 h后， 43 ℃热打击组钙离子流式检测的中位数为91.63，37 ℃对照组中位数为22.98。同对照组相比，随着热打击程度加强，显微镜高倍镜下可见骨骼肌细胞骨架逐渐出现变粗、变短、出现明显的应力纤维。骨骼肌细胞在热打击情况下，各组G0/G1期DNA含量在44.13～62.98之间，与正常对照组对比，当细胞离开热打击环境后培养18 h前G0/G1期DNA含量明显高于对照组，培养第18 小时恢复才同对照组基本相同。

结论 热打击的情况下造成细胞钙离子内流效应，导致细胞内钙超载。可改变HSKMC骨架结构，使骨架失去正常的网状有序排列结构，间隙增大。细胞周期出现阻滞，细胞被阻滞在G0/G1期。

【关键词】热打击；骨骼肌细胞；通透性；钙超载；细胞骨架；细胞周期；考马斯亮蓝染色；流式检测

[摘要]目的探讨周期性的机械应力对大鼠的关节软骨细胞的形态与骨架的刺激作用，为软骨细胞的内力学信号传导机制的临床研究提供参考。方法将体外培养传代至第三代的大鼠软骨细胞置于四点弯曲加力装置周期性机械应力体系中（4000u strain）培养30min，连续3d。对照组静态培养。3d后检测细胞基质合成情况以及微管、微丝、中间纤维的免疫荧光染色，用Western Blot及RT-PCR方法测量cofilin蛋白基因含量。结果加载应力组软骨细胞氨基多聚糖和蛋白多糖的合成与对照组无明显差异（P>0.05）；但细胞微管、微丝及中间纤维发生重排，细胞形态和取向趋于一致。实验组cofilin蛋白含量明显高于对照组（P

[关键词]软骨细胞；细胞骨架；细胞形态

关节软骨处在一个具有压应力、张应力、流体剪切力等机械应力作用的复杂力学环境中，而机械应力在调节关节软骨细胞生物学行为中具有十分重要的作用，能够对软骨细胞新陈代谢进行调控，是保证软骨基质正常状态的必要条件。可调控软骨细胞的新陈代谢，是维持正常软骨基质必不可少的条件。关节软骨组织缺乏血液供应、细胞代谢缓慢、自我修复能力较差，即使较小的软骨损伤也会引起严重的后果。我们的前期动物实验表明，中等强度的炮台运动能促进大鼠软骨缺损的修复重塑，但其作用机制尚不清楚。

本研究拟通过体外实验对大鼠关节软骨加载周期性压应力，观察应力下的软骨细胞形态和细胞骨架的变化，为软骨细胞内力一生物信号转化研究提供基础，为适度应力促进关节软骨缺损修复重塑的机制研究提供依据。

1.资料与方法

1.1一般资料

主要包括大鼠来源及所用试剂的来源。本研究中所用大鼠为7d龄，且身体健康，均由南方医科大学实验动物中心提供。主要试剂：鼠抗人Tubulin B单克隆抗体（北京中杉金桥生物进口分装）；Dulbecco改良DMEM/Ham F12混合培养基（HyClone公司）；0.01mol/L磷酸缓冲液PBS（博士德公司）；碘化丙啶（Salarbio公司）；链菌蛋白酶（Gibco公司）；胎牛血清（FBS，杭州四季青公司）；番红（Salarbio公司）；胰蛋白酶（Gibco公司）；双乙酸荧光素（Salarbio公司）；甲苯胺蓝（Salarbio公司）；4%多聚甲醛（Salarbio公司）；II型胶原酶（Gibco公司）；山羊抗小鼠IgG/FITC思牵ū本猩冀鹎派物进口分装）；I型胶原蛋白裱衬的6孔培养板（Flexercell公司）。

1.2仪器设备

[摘要] 目的 研究微弧氧化钛表面对成骨细胞形态及细胞骨架的影响。方法 将直径15 mm、厚度1 mm的纯钛片根据表面处理方法不同分为4组：机械打磨（G）组、喷砂（SB）组、打磨微弧氧化（GMAO）组和喷砂微弧氧化（SBMAO）组。采用扫描电子显微镜（SEM）、激光共聚焦显微镜（LSCM）研究钛片表面成骨细胞生长情况及细胞骨架的改变。结果 成骨细胞接种12 h后，各组细胞均沿钛片表面铺展开，且GMAO组和SBMAO组细胞覆盖于火山口状微孔上。各组肌动蛋白纤维清晰可见，GMAO组和SBMAO组肌动蛋白纤维平行排列，汇聚成束伸向微孔内。结论 微弧氧化后的钛表面可以影响成骨细胞铺展的形态及细胞骨架的排列。

[关键词] 微弧氧化； 激光共聚焦显微镜； 成骨细胞； 细胞骨架

[中图分类号] R 783.2 [文献标志码] A [doi] 10.7518/hxkq.2013.05.006

种植体成功的关键在于形成良好的骨结合，而成骨细胞是骨结合的关键。种植体植入后，成骨细胞首先在种植体表面黏附、丛集，然后分泌骨基质，启动新骨生成。新骨从种植体表面逐渐向骨创面生长、延伸，最终形成种植体与骨组织的骨结合。由此可见，提高成骨细胞的成骨活性是提高种植成功率的有效途径。目前种植体表面改性的主要方法有表面形貌改性、表面化学成分改性及表面功能涂层改性。微弧氧化是目前研究中的热点。有研究[1-3]报道，微弧氧化表面对成骨细胞的黏附、增殖、分化均有促进作用。本实验在打磨和喷砂基础上，采用微弧氧化法处理钛片，研究微弧氧化钛表面对成骨细胞形态及细胞骨架（cytoskeleton，CSK）的影响。

1 材料和方法

1.1 钛片的表面处理和分组

将直径为15 mm、厚度为1 mm的钛片，按处理方法不同分为4组：机械打磨（G）组、喷砂（SB）组、打磨微弧氧化（GMAO）组和喷砂微弧氧化（SBMAO）组。

G组采用机械打磨方法，依次用防水砂纸240、360、600、800目同向打磨钛片，使表面光滑，呈金属光泽，肉眼观划痕一致。SB组在机械打磨的基础上，使用40～60目的二氧化钛砂在6.5 kPa、10 cm距离条件下均匀喷砂。GMAO组为将经过机械打磨的钛片用丙酮在超声波清洗机中清洗，干燥后进行微弧氧化。微弧氧化电解液的基本组成成分为20 g·L-1 Ca（CH3COO）2·H2O、9.3 g·L-1 Na5P3O10和Na2SiO3·9H2O，去离子水为溶剂，试剂均为分析纯。将钛片作为阳极，不锈钢电解槽为阴极进行微弧氧化。实验所用的电参数为：正向电压350 V，负向电压160 V，频率800 Hz，处理时间20 min，电解液通过冷却水循环系统进行冷却，微弧氧化过程中温度控制为15～

【摘要】 目的 建立动物心肌缺血模型，探讨心肌缺血时细胞骨架的改变。方法 15只清洁级健康成年雄性Wistar大白鼠，采用左冠状动脉结扎术造成部分心肌缺血，分别于缺血30min、60min、120min时取缺血心肌组织用免疫组织化学方法观察心肌细胞骨架蛋白肌动蛋白（α-actin）、波形蛋白（vimentin）、肌球蛋白（myosin）、结蛋白（desmin）的变化，与未缺血部分心肌对比，并用计算机图像模拟分析系统计算细胞骨架蛋白量的变化。结果 心肌缺血时30min时即有骨架蛋白actin、myosin的损伤，随后见desmin、vimentin受损。结论 心肌缺血时可以早期导致心肌细胞的细胞骨架损伤。

【关键词】 心肌缺血；细胞骨架

The myocytoskeleton damaging in ischemic myocardium

【Abstract】 Objective To study the damaging of several cytoskeleton proteins in ischemic myocardium in animal model.Methods 15 Wistar white mouse，all male，weighing approximately 160g，are selected for study.Ischemia model are made by tie up the left coronary artery，after 30min，60min，120 min，the ischemic tissue is taken out for study，the samples are investigated by immunohistochemistry using monoclonal antibodies against actin，vinculin，desmin and myosin.Results Ischemia can induce disruption of the cytoskeleton in myocardium，early in 30 minuses actin，myosin，may be injuryed，desmin and vinculin is a little endurable to anoxia，but also showed damaged after 120 minutes of ischemia（anoxia）.Conclusion Ischemia can cause the injury of cytoskeleton in myocardium，which is in response to the irreversible injury to myocardium.

【Key words】 myocardial ischemia;cytoskeleton

心肌缺血的病理生理改变一直是心脏科学研究的热点，近年研究发现，心肌细胞骨架在心肌缺血时的改变具有其独立的特点，对心肌缺血时心肌细胞的不可逆损伤具有极为重要的意义［1］。心肌缺血的保护与临床有密切的联系，尤其为临床研究所关注。心肌缺血时细胞骨架发生变化的一些特点，国外有所研究，并通过药物干预，解释了一部分可能的机制［2，3］，国内较少有相关研究。

1 对象与方法

1.1 实验动物与分组 15只清洁级健康Wistar大白鼠，均为雄性。体重138～165g，由同济医科大学动物实验中心提供。分为3小组，每组5只，分别为缺血30min、60min、120min组。对照组：未缺血区心肌。

(山东省潍坊市人民医院口腔颌面外科 山东潍坊 261041)

［中图分类号］ R730.2［文献标识码］ A［文章编号］ 1672-4208(2008)21-0048-03

细胞骨架是真核细胞质内蛋白质丝组成的复杂网状结构，它一方面决定和维持着细胞的形态，另一方面也参与细胞的运动、分裂、胞浆运输，对信号传递有重要意义。近年来的研究进一步证实，细胞骨架系统与癌变等生命现象密切相关。本文对细胞骨架与癌的转移方面作一综述。

1 细胞骨架概述

细胞骨架是横越在真核细胞细胞核和细胞膜内侧面的一种纤维状蛋白基质，它由微丝、微管及中间纤维组成，三者高度协调分布，与胞核、质膜、细胞器相连，构成了细胞形态骨架和运动协调系统，以保持细胞的形态和行使运动功能，并对信号传递有重要意义。

1．1 微管的结构与特征

1．1．1 微管蛋白 微管(microtubule，MT)是由许多亚单位聚合成的长管，直径约15 nm，呈中空圆柱状管状纤维，是真核细胞所特有的结构。微管对细胞形状、运动、极性、胞质内运输都起了很大作用，在细胞分裂时微管会解聚并重新形成纺锤体。微管基本化学单位为微管蛋白，一般以异二聚体的形式存在。如果将异二聚体用变性剂处理，可以产生两个稍有不同的亚单位分别叫做α微管蛋白和β微管蛋白。

1.1.2 微管结合蛋白 研究发现，有些蛋白总是与微管蛋白共存，参与微管组成，故称之为微管结合蛋白。一是微管相关蛋白质(microtubule-associated protein，MAP)，主要有MAP-1、MAP-2等。另一是Tau蛋白质。它们与调节微管聚合范围及速率有关。 MAP参与微管的组装及结构的稳定。当MAP被磷酸化后失去结合微管的能力，从而使微管处于不稳定状态。对人或牛来说，Tau被PKA磷酸化后可以减弱它与微管蛋白的结合，从而使微管聚合减弱。微管结合蛋白与微管运动的产生、聚合和解聚的调节或微管和其他细胞组成之间的连接均有关。因此，它们同微管蛋白一道构成了完整的系统。

作者：郭三萍，石勇，李晓红，宋玮 【关键词】 成骨细胞；重组人生长激素；细胞周期;细胞骨架

【Abstract】 AIM: To observe the changes of the cell cycle and cytoskeleton of rat calvarial osteoblasts after stimulated by recombinant human growth hormone　(rhgh ). METHODS: Osteoblastic cells from rats were incubated in the medium supplemented wiht rhgh at different doses (10, 200 μg/L), and then the changes of cytoskeleton and cell cycle were detected. RESULTS: Quantitative analysis showed that osteoblasts were arrested in S phase and G2/M phase, however, green fluorescent density and red fluorescent density (nuclei) were not significantly changed. The filamentous Factin distributed in bunches and was stained strongly and evenly. The outline of nucleus was clear. CONCLUSION: Rhgh exerts a direct anabolic effect on osteoblasts, but no obvious effect on cytoskeleton of rat osteoblasts.

【Keywords】 osteoblasts; recombinant human growth hormone; cell cycle; cytoskeleton

【摘要】目的： 观察重组人生长激素（rhgh ）对体外成骨细胞（OB）细胞周期及细胞骨架Factin的影响. 方法：用浓度为10和200 μg/L的重组人生长激素加入大鼠OB培养体系，观察对大鼠OB的细胞周期及细胞骨架的影响. 结果： 定量分析表明，在rhgh 作用下，成骨细胞S期、G2/M期细胞百分比增加,OB的绿色荧光强度、红色荧光强度无显著变化. Factin纤维呈束状平行排列，荧光染色强，分布均匀. 结论：重组人生长激素对OB的合成代谢有直接影响,但对细胞骨架无显著影响.

【关键词】 成骨细胞；重组人生长激素；细胞周期;细胞骨架

口腔颌骨、牙槽骨骨量丢失是影响牙齿留存、义齿及种植体修复效果的重要因素. 骨质疏松症(osteoporosis, OP）患者的颌骨具有不同程度的骨量丧失,OP与牙齿脱落之间也有密切的相关性［1］. 生长激素在人体生长发育中起着重要的作用，能促进蛋白质合成，影响脂肪和矿物质代谢，促进内脏、骨骼和全身生长. 基因重组人生长激素（recombinant human growth hormone, rhgh ）与人体生长激素具有同等的作用. rhgh 影响骨代谢的作用机制一般有直接和间接两种方式. 直接方式是指rhgh通过成骨细胞（osteoblast,　OB）的相关受体发挥作用［2］；间接方式是可以通过促进胰岛素样生长因子(IGFI)的合成促进骨形成［3］. 我们观察不同浓度的rhgh 对体外培养OB细胞周期及细胞骨架的影响，以期对颌骨骨质疏松的防治提供实验依据.

1材料和方法

1.1材料rhgh(长春金赛药业有限责任公司）；出生2 d的SD大鼠（第四军医大学实验动物研究中心）；FITC标记的鬼笔环肽（Phalloidin）（Sigma） ；碘化丙啶（PI）（Sigma）; Triton X100(华美生物工程公司)；流式细胞仪（美国）；激光共聚焦显微镜 BioRad MRC1024 （美国）.

作者：郑世英 曾强成 刘洪玲

摘要细胞骨架在调控向重力性反应早期的信号感受和传导过程中起重要作用。阐述了植物根系材料的力学特性,介绍了植物感受重力的2种假说,分析了细胞骨架蛋白在重力信号传导链中的作用及细胞骨架与高等植物向重性的关系,以期为细胞骨架和植物向重性的研究提供依据。

关键词微重力;植物;细胞骨架;影响

向重力性反应是植物适应地球重力场环境的一个重要生理过程,是植物能够正常生长发育不可缺少的反应机制。高等植物根的向重力性使其能够充分吸收土壤中的水分和矿质营养,茎的负向重性使其能够充分接受光照。研究表明,植物感受重力与信号传递之间的精确调控可能是通过不同细胞器之间的相互作用来实现的。细胞骨架被认为是与植物向重性有关的重要细胞器之一。细胞骨架(cytoskeleton)是指真核细胞中的蛋白质纤维网架体系[1]。细胞骨架不仅在维持细胞形态、保持细胞内部结构的有序性方面起重要作用,而且还与细胞运动、物质输运、能量转化、信息传递、细胞分裂和分化、细胞凋亡、细胞的癌变、基因表达等生命活动密切相关。

1植物根系材料的力学特性

植物根系材料不同于一般的工程材料,研究其力学特性,最大的困难在于它参与代谢活动,具有多相、非均匀、各向异性等特点,其应力不仅与应变有关,还与流动因素有关。在不同生理和生长环境下,其力学性质存在很大差异[2]。许多国内外专家学者对木本植物、草本植物、农作物的根系进行了大量的拉伸、压缩、弯曲、冲击、应力松弛、糯变试验等研究,得到了少数根系的拉伸最大载荷、应力、应变、弹性模量、弯曲应力等参数,得到了个别根系的冲击韧性、应力松弛、糯变试验数据和曲线,推得了本构方程、应力松弛方程和糯变方程等。尽管这些研究成果是初步的、不全面的,但它们已在防风治沙、防水土流失等生态环境建设工程中发挥了重要作用,为植物根系力学的进一步发展奠定了基础。

2植物感受重力的2种假说

植物重力信号感受机制一直是生物学界争论不休的话题。截至目前对于重力信号感受的解释主要有2种,即淀粉平衡石假说与原生质体压力假说。

摘要：目的 应用组织工程和生物制造工程原理，采用增材制造技术，探索一种制造喉关节软骨支架的新途径。方法 利用明胶和海藻酸钠作为材料，通过CCA-II细胞受控组装机制备喉软骨支架，然后对所制备支架进行性能的表征。结果 制取出了粘度合适、降解率合适、高孔隙率和含水量的三维支架，类似喉软骨外基质成分。结论 增材制造技术与组织工程技术和生物制造技术的结合为未来修复喉功能提供一种潜在的手段。

关键词：人工喉软骨；增材制造；细胞受控组装；生物3D打印

1喉软骨支架制备方案

所谓组织工程就是运用工程科学和生命科学的原理和方法，从根本上认识正常和病理的组织结构--功能关系，研究和开发一套具有生物相容性、组织相容性和生物活性的组织器官[1-3]，用以替代或修复已损伤的人体组织和器官，或进一步改进受损组织器官的生理功能。具体做法是：首先制备具有良好生物相容性和良好机械性能的生物材料支架，然后将种子细胞与生物材料支架混合培养，植入受损部位，待细胞生长、增殖、分化形成与原来组织器官具有相同形态，并且具有和原来组织器官相一致的生理功能的具有生物活性的组织器官替代物，同时生物材料支架也按照细胞生长、增殖、分化相匹配的速率降解，从而达到组织器官损伤修复和恢复其生理功能的目的[4-7]。

通过组织工程和生物3D打印技术原理，本文研究过程主要为以下内容：喉软骨支架的生物材料的选择和喉软骨支架的制取。其中主要为降解率合适、孔隙率高、含水率高且生物相容性好的喉软骨支架。支架组装过程如图1所示，支架制取实验在CCA-II细胞受控组装机中完成。

2喉软骨组织工程支架材料的选取

2.1喉的组成成分 成人的软骨，根据软骨组织内所含纤维的成分不同，可分为三种类型，即透明软骨、弹性软骨和纤维软骨。而喉的软骨属于透明软骨，是一种自身没有血管，没有神经，没有淋巴组织的特殊结构。在透明软骨中软骨细胞仅占软骨组织体积的1～5%。软骨细胞的营养都是由软骨基质来提供的。软骨细胞是一群比较特殊的细胞同时自身能够合成和维持软骨基质的底层结构[8]。因此，如何选取合适的支架材料对整个喉软骨的作用至关重要。

2.2材料的选取 根据喉软骨组织的组成成分以及其结构特点，理想的喉软骨组织工程支架应该具备以下特征：①良好的生物相容性，对细胞和机体无毒害；②良好的生物降解特性，可完全被机体降解吸收或排出体外；③良好的机械特性，具备一定的力学强度和可塑性，结构长时间保持稳定，具有较高的孔隙率；④良好的表面相容性，利于细胞在材料表面黏附与生长[9]。目前可作为喉软骨组织工程支架的材料具体可分为三类，分别为天然高分子材料、人工合成高分子材料以及复合材料。天然高分子材料如胶原、壳聚糖等均取自天然动植物体，其都是软骨细胞外基质成分或类似基质构成物，所以此类材料能够很好的与生物体相容，有良好的仿生性和组织亲和性，并能够促进细胞的增殖，且大多来源丰富，价格低，但也有质地相对较软，机械强度不足的缺点。而合成材料则是在天然材料的基础上发展起来的，虽然在机械强度上能够满足需求，但其亲水性差、细胞吸附力弱则是其与天然高分子材料相比不足之处。而复合材料的出现则改变了上述两种材料的不完美，它即具备了天然材料组织相容性和亲和性好的优点，又提高了材料的机械强度，使得喉软骨组织工程支架的材料变得更具可行性。

[摘要]目的：研究骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）在羟基磷灰石（HA）/壳聚糖（CS）复合支架材料中的生长和增殖情况，探讨复合材料与细胞的相容性。方法：穿刺法抽取新西兰大耳白兔骨髓3ml，通过密度梯度离心法获取MSCs，体外贴壁培养，倒置显微镜下观察原代及传代细胞形态、数量生长情况，描绘生长曲线。将第2代细胞以高密度接种到支架材料中体外三维培养，观察其细胞相容性。结果：经密度梯度离心结合贴壁筛选得到纯化的间充质干细胞， 细胞能够连续传至9代以上，第2、5代细胞增殖能力最强。细胞进行体外三维培养时，可在HA/CS复合支架材料上良好的附着、生长和增殖。结论：兔骨髓间充质干细胞能在体外成功培养， HA/CS复合支架与MSCs具有良好的细胞相容性。

[关键词]骨髓间充质干细胞；体外培养；HA/CS支架

[中图分类号]Q813.1 [文献标识码]A [文章编号]1008-6455（2014）03-0213-04

骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）是一种具有多向分化潜能的干细胞，其在特定条件下可向成骨细胞、成软骨细胞、肌键细胞等多种细胞分化，是一种重要的组织工程种子细胞[1]。但骨髓中MSC的含量极低，仅占单个核细胞的0.001%～0.01%[2]。在体外培养条件下对其进行分离、纯化和扩增是MSCs研究和应用的前提条件。本实验采用贴壁筛选的方法从骨髓中分离MSCs并对其纯化，对其在整个生命周期的形态、传代、增殖状态进行研究，探讨体外分离培养MSCs的生长规律，为大规模地获得生物学性状良好的骨髓MSC应用于骨和软骨损伤的临床应用奠定基础。同时研究三维培养条件下，羟基磷灰石（HA）/壳聚糖（CS）复合支架材料对骨髓间充质细胞粘附、生长、增殖等功能的影响，寻找适宜的干细胞载体，作为移植修复组织缺损的供体材料。

1 材料和方法

1.1 实验材料：新西兰纯种大耳白兔一只，2月龄，体重2.0～2.5kg， HA支架从四川大学生物材料中心购买，CS粉由上海其胜生物公司购买， 人淋巴细胞分离液，PBS（中山金桥公司），肝素，DMEM低糖培养液（Gibco），小牛血清（中国军事科学院），胰蛋白酶（Sigma）， EDTA（Sigma）， 超净工作台（苏州净化仪器公司），CO2孵育箱（美国NAPCO），倒置显微镜（尼康）。

1.2 MSC的取材、培养

1.2.1 取材：用麻醉剂速眠新注射液肌肉注射动物（0.3ml/kg），将兔麻醉后，侧卧手术台上，于后股骨下段处剪毛备皮，体积分数0.01活力碘消毒，铺无菌洞巾， 12号骨髓穿刺针接10ml注射器，穿刺进入骨髓腔，含稀释（500U/L）的肝素钠湿润针管后，抽取骨髓液约2～4.0ml，注入无菌离心管中。

【关键词】抑制性消减杂交技术；哮喘；嗜酸细胞；细胞支架蛋白质类

Differentiallyexpressionofgenesassociatedwithcytoskeletalremodelingofperipheralbloodeosinophilsduringasthmaticattack

【Abstract】AIM:Todeterminethedifferentiallyexpressedgenesassociatedwithcytoskeletalremodelingofperipheralbloodeosinophils(EOS)inpatientsduringasthmaticattack.METHODS:DoublestrandedcDNAwasamplifiedfromtotalRNAofEOSatthetimeofasthmaticattackandafterimprovementrespectivelybySuperSMARTcDNASynthesistechology,Suppressionsubtractivehybridization(SSH)andPCRselectdifferentialscreeningtechnologywereusedtodetectdifferentiallyexpressedgenesandthendifferentiallyexpressedgenesweresequenced.HomologyanalysiswasconductedbycomparingthesegenesequencesbasedonGenBankdatabase.RESULTS:HighefficientlyupregulatedanddownregulatedsubtractivecDNAlibrarieswereconstructedsuccessfully;differentialscreeningandhomologyanalysisidentified6differentiallyexpressedgenesassociatedwithcytoskeletalremodeling,includingslingshot2L(SSH2L),PP1catalyticsubunit,betaisoform(PP1Cβ),dedicatorofcytokinesis8(DOCK8),Homosapiensproteintyrosinephosphatasenonreceptortype6and12(PTPN6,PTPN12),myosinregulatorylightchaininteractingprotein(MIR).CONCLUSION:Thedifferentiallyexpressedgenesassociatedwithcytoskeletalremodelingmayparticipateinexacerbationofasthma.Furtherstudyonthegenesfunctionmayprovidenewgenetargetforasthmatreatment.

【Keywords】suppressionsubtractivehybridization;asthma;eosinophils;cytoskeletalproteins

【摘要】目的：研究外周血嗜酸性粒细胞(EOS)在哮喘发作时与细胞骨架相关基因的差异表达.方法：应用SuperSMARTcDNAsynthesis技术从总RNA合成足量的双链cDNA.经液相杂交消减两组共同序列，以抑制性PCR方式扩增差异表达序列.构建上调与下调cDNA文库，菌落PCR扩增差异片段，应用差异筛选技术进一步鉴定差异表达基因并测序，结果通过核酸数据库进行同源性比较.结果：构建了高效的上调与下调消减cDNA文库，经鉴定及同源性分析有6个与细胞骨架重建有关，包括上调基因slingshot磷酸酶(SSH2L)，蛋白磷酸酶1β亚型(PP1Cβ)，无功能糖基转移酶样蛋白(DOCK8)，蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型6(PTPN6)与非受体型12(PTPN12)；下调基因，肌凝蛋白调节轻链结合蛋白(MIR).结论：这些骨架重建相关基因的差异表达可能参与了哮喘发作，进一步进行功能研究可能为哮喘治疗提供新的作用靶点.

【关键词】抑制性消减杂交技术；哮喘；嗜酸细胞；细胞支架蛋白质类

0引言

哮喘是一种复杂的多基因遗传病，病理上是以伴随淋巴细胞与嗜酸性粒细胞（eosinophils,EOS）浸润为主的慢性炎症性疾病.有证据表明外周血EOS数目与哮喘的症状，一秒用力呼气量（Forcedexpiratoryvolumeinonesecond,FEV1）及气道反应性相关，尤其在持续性及重症哮喘，外周血EOS增多与持续性气流阻塞显著、独立相关［1-2］.细胞骨架重建在细胞黏附，伸展，运动及细胞内众多信号转导调控等过程中发挥重要作用［3］.哮喘患者外周血EOS已经被激活或活化，但其真正分子机制远未清楚，因此我们利用SSH技术研究哮喘患者在发作与缓解时外周血EOS与细胞骨架重建相关基因差异表达，探索其调控分子本质，为哮喘诊治提供帮助.