免疫组化染色范文精选

【摘 要】目的：探讨表面活性剂Tween-20对免疫组化制片的影响。方法：使用加入 Tween-20的PBS缓冲液以及未加入Tween-20的PBS缓冲液分别对免疫组化切片进行冲洗，观察染色结果，并复习相关文献。结果：PBS-Tween-20缓冲液冲洗的免疫组化切片抗体用量偏少，无需用吸水纸擦拭，非特异性染色减少。结论：应用PBS-Tween-20缓冲液冲洗免疫组化切片，不仅节省抗体的用量，节约医疗成本，并且使组织切片清洁得更干净，避免了非特异性染色的发生，值得推广。

【关键词】Tween-20；免疫组化；非特异性染色

表面活性剂Tween-20为聚氧乙烯去水山梨醇单月桂酸酯和一部分聚氧乙烯双去水山梨醇单月桂酸酯的混合物，亲水性强，为一种非离子型去污剂，能增加乳剂的稳定性。也可作 2006―2012年龙里县流行性腮腺炎疫情资料分析 神经阻滞联合甲钴胺注射液治疗带状疱疹后神经痛效果观察 保定市2004～2011年急性弛缓性麻痹病例监测系统运转情况分析 早产儿经下肢置入PICC20例的方法探讨 129例2型糖尿病患者合并恶性消化道肿瘤临床分析 绝经后妇女取宫内节育器92例临床分析 高血压性脑出血156例临床分析 蒙古族老年人慢性房颤（AF）319例抗凝治疗分析 浅谈产后出血的原因及防治措施 80例老年口腔修复临床分析 不育不孕症夫妇生殖道分泌物衣原体和支原体检测结果分析 头静脉修剪高位重建动静脉内瘘11例 老年获得性肺炎的临床特点及预后分析 2012年昆明市五华区居民死亡原因分析 探讨钞票对健康促进的影响 呼吸内科感染常见病原菌与相关因素 南宁市吴圩镇健康人丙氨酸氨基转移酶参考值的制订 老年恶性骨肿瘤54例误诊原因分析 带状疱疹病人的健康教育方式及效果评价 承┮┪锏脑鋈芗痢＞匝榉⑾置庖咦榛讨屑尤肓ween-20的PBS缓冲液冲洗切片，能够使切片更清洁，非特异性染色减少。本文对分别经过PBS-Tween-20缓冲液及PBS缓冲液冲洗的免疫组化切片进行对照，并将应用体会介绍如下。

1 材料与方法

1.1 材料

PBS磷酸盐缓冲液（0.01mol/L，PH7.2-7.4）、Tween-20、500ml容量瓶、

吸水纸，均购自福建迈新试剂有限公司。

1.2 方法

摘要：免疫组织化学染色方法是根据抗原抗体特异性结合，通过荧光或化学显色检测细胞或组织中抗原的含量和分布，具有特异性强、灵敏度高和定位准确等特点。本文主要从抗体孵育条件、设置合理对照、固定液的洗脱、抗原修复和洗片等步骤讨论如何做好免疫组织化学染色。

关键词：免疫组织化学染色；抗体；组织固定；抗原修复

免疫组织化学染色方法是目前生命领域研究最常用的实验方法之一，也是临床病理诊断从细胞形态水平提高到分子水平的关键技术环节。免疫组织化学染色方法主要应用免疫学中抗原抗体结合的实验原理检测特定抗原在细胞或组织中的表达和分布。影响免疫组织化学染色的因素有很多，而抗体孵育条件、设置合理对照、固定液的洗脱、抗原修复和洗片等可能是做好免疫组织化学染色的关键注意点。

1基本原理及特点

免疫组织化学染色方法是根据免疫学中抗原抗体特异性结合，通过荧光或化学显色检测细胞或组织中抗原的含量和分布。免疫组织化学染色法具有特异性强、灵敏度高和定位准确等特点。目前最常用的几种免疫组织化学染色方法主要包括免疫荧光法、免疫酶标法和免疫胶体金技术等。免疫荧光法是将荧光素标记的二抗和一抗结合，可在荧光显微镜下直接观察细胞或组织内相应抗原的表达和分布。免疫酶标法与免疫荧光法不同之处在于二抗的标记方式，它用酶标二抗代替荧光素标记的二抗，然后通过加入酶的底物，生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒，然后通过光镜或电镜，观察细胞或组织内抗原的含量和分布。免疫酶标法包括二步法、ABC法、SP三步法等多种方法，由于其组织形态较为完整，在抗原定位上对免疫荧光法具有更大的优势。

2几个关键注意点

2.1抗体孵育条件 抗体孵育是免疫组织化学染色中最关键的步骤，也是最核心的步骤。一个失败的免疫组化实验结果大部分都与抗体孵育条件不佳有关。抗体孵育条件包括抗体稀释浓度、孵育时间和温度、抗体稀释液等因素。即便是同一个抗原，在不同组织中表达丰度也有很大的差异，因此一定要根据浓度梯度选择合适的抗体稀释浓度。一抗孵育温度包括4℃、室温和37℃，4℃反应较为温和，效果最好。一般可选择4℃过夜，然后37℃复温30min～1h。二抗孵育条件一般室温2h。室温一般定义为25℃，如果在夏天或冬天选择室温孵育，需要注意室温的温度。可以用添加5%二抗来源血清的PBS稀释抗体，如果抗原位于细胞质或细胞核，建议用含5%二抗来源血清的TBST稀释抗体。由于弱碱性条件有利于抗原抗体结合，因此一定要注意抗体稀释液的PH值在7.2～7.4之间。此外，为了防止抗原抗体反应时液体的蒸发，可在擦干组织周围的液体后，使用免疫组化笔在组织周围画圈，使抗体不易流失，抗原抗体的反应过程中不干片，保证结合效率。

2.2设置合理对照 由于免疫组织化学染色中影响抗原和抗体结合的因素很多，因此必须设置对照组才能做出正确的判断。常用的对照包括：阳性对照、阴性对照和空白对照等。阳性对照是用已证实含用待测抗原的组织进行同样操作，结果应为阳性。通过阳性对照可排除染色步骤以及所用的试剂的问题。用确知不存在待检抗原的组织切片染色为阴性对照，可排除在染色过程中由于非特异性染色或交叉反应等因素造成的"假阳性"结果。空白对照是最常用的对照，用不加一抗的缓冲液，如PBS替代一抗，染色结果应为阴性，说明染色方法可靠，可排除组织的的非特异性显色或荧光。

[摘要] 免疫组化染色是临床病理学的重要诊断手段之一，该染色步骤繁琐且每一步都可能影响染色的最终结果，因此保证染色质量是贯穿于免疫组化实验全过程的核心。欲得到一张高质量的免疫组化染色片，必须做好组织固定和制作蜡片的基础工作，准确掌握抗原修复的时间和温度，严格按照染色步骤进行操作。

[关键词] 免疫组化；染色；组织固定；抗原修复

[中图分类号]R446.8 [文献标识码]C [文章编号]1673-7210（2007）09（a）-144-01

免疫组化染色目前已成为临床病理学的重要诊断手段之一，其作用毋庸置疑，同时还可用于鉴别诊断、评估预后、指导化疗等方面。一张良好的免疫组化染色片是正确判断染色结果的基础和前提，但免疫组化染色步骤繁琐且每一步都可能影响染色的最终结果，故保证染色质量是贯穿于免疫组化实验过程的核心。要得到一张高质量的免疫组化染色片，不是一件容易的事。如同苏木精―伊红染色一样，需要病理技术员和病理医生的互相配合、协调、共同努力。尽管如此，工作中我们还是常常遇到各种问题。笔者通过临床工作和实践，总结如下，仅供同行们参考。

1 组织固定

固定的目的之一是最大限度地保存组织细胞内的抗原性。固定液选用10%缓冲福尔马林液。组织离体后，应尽快（最好在30 min内）固定12~24 h。这样做是因为临床实际工作中，手术量往往较大，而且经常是标本送来后的第2天取材。取材后，常常即刻进入全自动脱水机程序化处理，个别标本不能得到及时、充分的固定。因此，我们采取的方法是手术标本送来后，即刻将大标本剖开，及时固定，保持固定液在组织的10倍以上，以免蛋白质变性，抗原丢失。特别是夏季更应慎重。

免疫组化染色过程长，步骤多，且抗原修复时需要加热至95℃以上，虽然经过及时固定组织块和APES胶处理玻片，组织片仍偶有脱落、破碎、不完整或边缘卷起的现象，影响镜下观察。我们发现，边缘卷起的切片一般都有假阳性染色。如何解决这一问题呢？我们的做法是首先做好组织的前期处理，从第一步组织取材开始到包埋结束，每一步都要严格规范化，取材厚度不超过3 mm。控制好固定、脱水、透明、浸蜡每个步骤的时间、温度，真正做到充分、合理。经过这样处理后的优质蜡块，再加上锋利无痕的刀具，娴熟的切片手法，切出一张薄而完整、均匀的切片应该不是一件难事。其次，烤片是一个不容忽视的环节，它较苏木精―伊红染色时间长，一般热修复高压法烤片要3 h以上，温度要求高于包埋蜡2℃。这样就尽量克服了上述的不足，大大减少了医生阅片时的困难。

2 抗原修复

[摘要] 目的 探讨三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响。 方法 选择12例骨组织，随机分为3组。A组用14%硝酸脱钙液进行处理，B、C组分别用EDTA脱钙液、PLANK脱钙液进行处理，同时对CD3、CD68、Ki—67 和TTF—1染色。 结果 室温条件下，硝酸脱钙液的脱钙时间最短，但对组织损伤最大。PLANK脱钙液和EDTA脱钙液脱钙效果较好，组织结构完整，形态清晰，免疫组化染色较好。 结论 室温条件下，三种脱钙液中PLANK脱钙液和EDTA脱钙液对骨组织脱钙及免疫组化染色效果较好。但由于EDTA脱钙液脱钙时间过长，PLANK脱钙液脱钙均匀，速度快，更适合用于临床病理检查。硝酸脱钙液脱钙最快，但是免疫组化染色效果较差。

[关键词] 脱钙液；骨组织；免疫组化染色

[中图分类号] R446.4+1 [文献标识码] B [文章编号] 1673—9701（2012）24—0101—03

骨组织内含有大量无机钙盐，结缔组织坚硬，难以直接制片[1]。如果强制切片，在蓝色钙盐背景下，往往无法看清细胞结构，所以需要选择一种能保持骨组织形态结构和染色后有利于保持细胞结构清晰度和对比度的脱钙液。本文研究14%（体积分数）硝酸脱钙液、EDTA脱钙液、PLANK脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响，以期寻找一种效果比较理想的脱钙液，对病理诊断工作提供帮助。

1 材料与方法

1.1 标本选择

12例骨组织标本均来源于我院，切成1 cm×1 cm×0.3 cm的骨块，在福尔马林中性液内固定24 h，用于脱钙及免疫组化染色实验。

1.2 三种脱钙液

【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】1672－3783(2012)05－0308－01

【摘要】脑组织石蜡切片的染色结果，易出现切片染色不清楚，脱片、假阳性，假阴性出现。免疫组化这些结果的出现，与组织固定，抗原修复，内源性过氧化物酶活性的灭活，抗体质量，显色试剂质量，苏木素质量，时间上的把握及技术人员熟练程度有关，得出了免疫组化的过程的很多细节及各个步骤的主要的注意事项，提高脑组织切片的免疫组化染色操作技术。

【关键词】脑组织；石蜡切片；免疫组化；染色

随着免疫组化技术广泛应用于科学和医学各个领域的研究和诊断中，免疫组化的技术已经成为一种基本的检测技术，如何提高免疫组化的技术，特别是脑组织切片在免疫组化中的检测，是每一个科研人员在检测中最关心的问题，现将近几个月大鼠脑组织切片的免疫组化技术的一些体会和细节概况如下：

1 脑组织固定体会

用4%的多聚甲醛固定，固定之前要保持脑组织的平整和完整，不能被挤压，以免影响细胞的形态，影响电镜下观察。

2 脑组织防脱片的处理 

（1）传统的防脱片的处理方法有延长烤片的时间、提高烤片的温度和重新脱水［2］。免疫组化前，切片在58-60℃的恒温箱中烤2-24 h［1］，在脱蜡和脱水过程中，把切片稍晾干后再行下一步的免疫组化过程。但不能进行高温烤片，在干燥的条件下加热切片可以加速组织中抗原的氧化而破坏组织中的抗原［2］。

[摘要]组织病理学普遍应用的免疫组织化学染色由于方法和过程繁琐复杂，尚无标准化方案，加强日常工作环节中的质量意识，有助于免疫组织化学染色应用质量的提高，本文分析了染色历程中的诸多环节问题，并提出相关提高方案，为更好地应用免疫组织化学染色技术诊断提供了有益的参考，提示专业人员注意加强相关专业知识学习和质量意识。

[关键词]免疫组织化学染色； 质量管理； 标准化； 文献综述

[中图分类号]R818.023[文献标识码]A [文章编号] 1005-0515（2010）-12-030-01

免疫组织化学染色技术的出现和发展给传统病理学带来了一场革命，使纯形态学观察的病理学发展成为形态与免疫信号相结合的现代病理学，免疫组织化学染色在病理诊断中的作用已得到广泛的认同，具有特异性高、敏感性高、程序相对一致等特点，已成为病理诊断中不可缺少的重要辅助技术。免疫组织化学染色的方法与步骤复杂繁琐，在应用中还存在不少问题，直接或间接地影响了最终的病理诊断，而且目前还没有很好的标准化方案。纵观免疫组织化学染色的全过程，重视染色应用中的环节问题，充分发挥病理诊断医生和技术人员不同的质量保障作用，才能有效地利用好免疫组织化学染色这一有力工具。

1 诊断医生涉及的环节问题

1.1 抗体配备的选择：用于病理诊断的抗体种类很多，拥有抗体种类的多少与实验辅助诊断水平有一定相关性。诊断医生在决定科室内实验抗体的选择配备时，要不断学习相关知识并根据科室实际情况选择确定适用的有效抗体种类和数量。

1.2 抗体应用的选择：每一种抗体的特性、适用范围、可能产生的交叉反应等都不相同。决定抗体的实验应用，是诊断医生在形态学诊断的基础上，根据鉴别诊断的需要选择提出的，诊断医生应不断学习掌握相关知识，达到正确选择适用的实验抗体，而且应选择联合抗体配套使用，避免得到片面的结果，造成错误的解释和诊断。

1.3 检测片的选择：很多病例的组织切片不止一张，不同切片中的组织成分常常不完全一样。正确选择检测片是获得正确每一组织化学染色结果的前提，应由诊断医生正确选择用于免疫组织化学染色的检测片，避免由技术人员选择可能出现的差错。

【摘要】 目的 分析儿童幽门螺杆菌（Hp）免疫组化染色检测的诊断价值。方法 103例Hp感染患儿为研究对象， 所有患儿均予以免疫组化染色检测、现症感染条带（CIM）血清学检测、快速尿素酶（RUT）试验以及13C-尿素呼气（13C-UBT）试验， 以13C-UBT检测结果作为黄金判定标准， 比较其他三种检测结果。结果 免疫组化染色检测与RUT试验、CIM血清学检测的敏感性、特异性以及准确性比较， 差异均无统计学意义（P>0.05）。结论 儿童Hp采用免疫组化染色检测的价值较高， 可获取准确、可靠的诊断结果， 可在临床广泛应用。

【关键词】 儿童；幽门螺杆菌；免疫组化；检测；分析

DOI：10.14163/ki.11-5547/r.2015.34.014

Hp为消化性胃溃疡、胃炎及胃癌的主要致病原因之一。目前， 相关临床资料已经证实， 缺铁性贫血以及儿童生长发育较缓等均与儿童Hp之间存在相对紧密的联系， 因此， 采用何种方式提高Hp诊断准确率具有重要意义[1]。由此， 本研究针对儿童Hp免疫组化染色检测的价值进行分析， 现将结果报告如下。

1 资料与方法

1. 1 一般资料 回顾性分析本院2013年12月～2014年12月收治的Hp感染患儿103例， 其中男女比例40：63， 年龄2～12岁， 平均年龄（7.48±1.56）岁；所有患儿在近1个月内均未接受抗生素或者抑酸制剂治疗。

1. 2 方法 所有患儿均予以免疫组化染色检测、CIM血清学检测、RUT试验以及13C-UBT试验。①RUT试验：所有患儿均予以电子胃镜（日本OLMPUS 260）检查， 于距离幽门5 cm处选取黏膜组织， 将此黏膜组织分成3块， 选取1块予以RUT实验， 严格按照说明书进行操作， 深紫色代表阳性， 未变色则为阴性[2]。②13C-UBT试验：口服13C尿素散剂（河北省协和药业有限公司生产）， 于服药前后30 min对呼出气体进行采集， 应用13C 红外光谱仪（北京华亘安邦科技有限公司）检测患儿呼出气体。③免疫组化染色检测：检测试剂均由福州迈新生物技术开发有限公司生产， 检测Hp中的抗原成分， 阳性为棕褐色。④CIM血清学检测：选用Hp快速检测试剂（上海安倍医疗器械贸易有限公司）， 利用免疫层析术对血清中Hp特异抗体进行检测。患儿需要保持空腹， 采取末梢血， 红色条带为阳性。

1. 3 观察指标 将13C-UBT试验检测结果作为黄金判定标准， 对本次检测结果进行判定：RUT试验、细菌培养、13C-UBT试验、单克隆的抗体粪便Hp抗原检测中一项阳性；Hp形态学、基因检测、免疫学两项阳性[3]。

[摘要] 目的 改进用漂片法进行BrdU免疫组织化学染色时的封闭液，以减少组织切片破损。 方法 用5-溴-2-脱氧尿嘧啶核苷（5-bromo-2-deoxyuridine, BrdU）标记大鼠踏转轮运动中所引起增殖细胞，通过 ABC免疫组织化学方法染色。在染色过程中，比较不同的封闭液（羊血清、牛血清白蛋白、胰酶抑制剂）减少脑片破损的效果。 结果 踏转轮运动可使大鼠海马齿状回BrdU阳性细胞数明显多于对照组。加入不同的封闭液后，组织片破损率明显下降，尤其是加入牛血清白蛋白和胰酶抑制剂组，但胰酶抑制剂组有非特异性染色。 结论 牛血清白蛋白是较理想的封闭液。

[关键词] BrdU；免疫组织化学染色；胰酶抑制剂；牛血清白蛋白；漂片法

[中图分类号] R392-33 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2012）02（b）-0016-03

Improvement in technique of BrdU immunohistochemical staining by bleach section

GUO Jingjing1 SHAN Lidong2 WU Gang3

1.Department of General Surgery, Huashan Hospital Baoshan Branch of Fudan University, Shanghai 200431, China;

2.Department of Neurobiology and Medical Psychology, School of Preclinical Medicine and Biological Sciences,Medical School of Suzhou University, Jiangsu Province, Suzhou 215123, China;3.Department of General Surgery, Huashan Hospital Affiliated to Fudan University, Shanghai 200040, China

[Abstract] Objective To reduce the tissue slice breakage, explore the technique of 5-bromo-2-deoxyuridine (BrdU) immunohistochemical staining by blocking buffer in bleach section. Methods BrdU, which was detected by ABC immunohistochemistry on bleach section of brain slides, was used to incorporate the new born cells which were promoted proliferation by motor-driven wheel running. The different blocking effects of Goat serum, trypsin inhibitor and bovine serum albumin were compared in the process of immunohistochemistry. Results In the group of motor-driven wheel running in the dentate gyrus of the hippocampus in rats, the number of BrdU-positive cells was more than the control group. The breaking rate of slides was reduced obviously, especially in the groups with bovine serum albumin and trypsin inhibitor, after being added different blocking reagents. But cells in trypsin inhibitor group were appeared without specific staining. Conclusion Bovine serum albumin is preferable blocking buffer.

【摘要】 目的 分析不同脱钙条件对骨组织免疫组织化学（免疫组化）染色抗原性的影响。方法 用8%硝酸分别于微波、光波及光波+微波组合Ⅰ、光波+微波组合Ⅱ的条件下对骨组织进行脱钙， 并将室温（20℃）条件下脱钙的骨组织作为对照组， 运用链霉菌素卵白素-生物素（LSAB）免疫组化染色技术， 并对其染色效果进行分析比较。结果 微波、光波、光波+微波组合Ⅰ及光波+微波组合Ⅱ的脱钙时间显著低于对照组， 且免疫组化染色效果显著优于对照组（P

【关键词】 脱钙条件；骨组织；免疫组织化学染色；抗原性

【Abstract】 Objective To analyze influence by different decalcification conditions on bone tissue antigenicity in immunohistochemical staining. Methods Decalcification was made through 8% nitric acid under microwave， light wave， light wave + microwave Ⅰ and light wave + microwave Ⅱ in bone tissue. Decalcification under room temperature （20℃） was taken as control group. Labelled streptavidin biotin method （LSAB） immunohistochemical staining was applied to analyze and compare stain effects. Results Decalcification time under microwave， light wave， light wave + microwave Ⅰ and light wave + microwave Ⅱ were all shorter than control group， and their immunohistochemical staining effects were all better than control group （P

【Key words】 Decalcification condition； Bone tissue； Immunohistochemical staining； Antigenicity

目前， 免疫组化染色技术是临床病理鉴别及诊断的重要手段， 骨组织由于含有丰富的钙盐， 因此其免疫组织化学染色自然与常规石蜡切片有所区别， 通常需要先去除钙盐后才可制成比较薄的切片， 然后再进行常规脱水、透明处理等操作[1]。本研究旨在分析探讨不同脱钙条件对骨组织免疫组化染色抗原性的影响， 现报告如下。

1 材料与方法

1. 1 材料 选取2012年4月～2015年8月骨外科送检的人骨组织， 脱钙液为硝酸10 ml+蒸馏水190 ml制成的硝酸液。Panasonic NN-DF382M光波/微波炉1台， 微波额定输入功率为1400 W， 光波额定输入功率为1050 W， 微波额定输出功率为900 W， 额定输出频率为2450 MHz， 输出功能共分为微波、光波及光波+微波组合Ⅰ、光波+微波组合Ⅱ。微波输出功率为5个调节档， 光波输出功率为单一光波管发光， 光波+微波组合Ⅰ为微波输出时间的30%+光波输出时间的70%， 光波+微波组合Ⅱ为微波输出时间的55%+光波输出时间的45%。

1. 2 方法 将1.0 cm×0.5 cm×0.3 cm的骨组织分别用8%硝酸分别于微波、光波及光波+微波组合Ⅰ、光波+微波组合Ⅱ的条件下进行脱钙。将脱钙后的骨组织常规制成切片， 经复合酶消化石蜡切片后， 运用LSAB免疫组化进行免疫酶细胞化学染色。

[摘要] 目的 探讨体腔积液薄层液基细胞涂片最佳免疫组化染色方法。 方法 收集有组织学对照的恶性胸水68例，每例选12张石蜡切片，作为A组，将每例胸水用薄层液基细胞术制片36张，随机平均分成B、C、D三组；B组经苏木精-伊红（HE）染色及柠檬酸或EDTA修复退色，做免疫组化双重染色，C组经HE染色，用盐酸方法退色，做免疫组化染色，D组不经HE染色，直接做免疫组化。将结果与A组组织病理诊断比较并进行统计学分析。 结果 各组别诊断准确率分别为A组100%（68/68），B组98%（67/68），C组92%（62/68），D组90%（61/68）；A组与B组确诊率差异无统计学意义（P > 0.05），A、B组确诊率高于C组及D组（P < 0.05）。 结论 B组方法优于C组和D组，有利于体腔积液中癌细胞鉴别诊断和分类，为临床治疗提供更加可靠的病理诊断。

[关键词] 肺癌；体腔积液；薄层液基细胞学检查；抗原修复；退色；免疫组化

[中图分类号] R734.2 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2013）10（a）-0017-03

薄层液基细胞技术（thin-layer cytology test，TCT）是20世纪90年代兴起的一项新技术，最早应用于妇科宫颈细胞学检查，并获得了良好的效果[1]。随后人们不断将此项技术应用到非妇科细胞学检查[2-4]，并与传统脱落细胞学涂片比较，具有薄层、背景清晰、面积小、血液成分少、利于显微镜观察等优点，但在癌性体腔积液TCT检查中存在癌细胞比较散在或细胞团不如传统涂片立体感强等不足。经苏木精-伊红（hematoxylin-eosin，HE）染色癌细胞与间皮细胞的鉴别有时很困难，对癌细胞来源及分类更一筹莫展。体腔积液多数混有间皮细胞，常常需要免疫组化（immunohistochemistry，IHC）染色与癌细胞加于鉴别，并对癌细胞进行分类。IHC染色如果不先经HE染色，则不清楚TCT涂片中是否存在癌细胞或可疑癌细胞（目标细胞）或者TCT涂片是否合格，如果经HE染色而采取不同退色方法，会造成不同结果。有报道使用盐酸、高锰酸钾及草酸等对传统涂片和组织切片HE染色进行退色[5-6]。笔者曾在组织切片上采用抗原热修复方法退色，效果较好[7]。胸水TCT涂片IHC染色，由于每张TCT涂片中的细胞排列是随机的，常规IHC染色针对性较差，往往造成诊断困难，为了准确鉴别间皮细胞与癌细胞以及对癌细胞进行详细分类从而达到确诊目的，本小组采用双重免疫组化（double immunohistochemistry，DIHC）染色，即在一张TCT涂片上，同时显示两种抗原成分[8]，来弥补一些抗体敏感性虽高而特异性低的不足，收到良好效果，现报道如下：

1 材料与方法

1.1 材料

收集2009年3月～2012年3月秦皇岛市第二医院病理科肺癌伴胸水转移送检病例68例，年龄45～70岁，中位年龄63岁，64排CT均显示肺内占位病变，伴纵隔淋巴结肿大及胸腔积液。其中9例有锁骨上窝淋巴结肿大、质硬。经气管镜、穿刺活检或切取锁骨上肿大淋巴结等手段，获取组织学标本，并及时经10%中性甲醛固定，石蜡切片，经HE染色和IHC染色确定诊断为：鳞状细胞癌13例，腺癌40例，腺鳞癌6例，神经内分泌癌9例；同时获取新鲜胸水每例500 mL，采用TCT制片。TCT制片设备为康柏液基细胞制片机及配套耗材，由湖南长沙康柏恩医疗科技公司提供。免疫组化染色抗体选为：TTF-1，CK7，CK14，CK18，P63，P40，CgA，Syn，CR1（柠檬酸修复），CR2（EDTA修复），Vimentin，CEA和MC，常规IHC染色采用ElivisionTMPlus，DIHC染色采用Dou MaxVision，细胞通透剂为X-100，所选试剂均购于福州迈新公司。

1.2 方法