动物行为学研究
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动物行为学研究范文第1篇
【关键词】药物和针刺;大鼠行为学;研究进展
doi:10.3969/j.issn.1006-1959.2010.05.335 文章编号:1006-1959(2010)-05-1330-02
行为医学,顾名思义,可以理解为研究人的行为的医学。具体地说,是研究与动物或者人的行为有关的一切知识和技术,从行为入手,来揭示生物的生命活动、健康与疾病的本质、规律,探索诊断、治疗、预防疾病、增进健康的行为科学技术和方法。有关行为医学的研究已经被广泛开展,本文仅对近一年来以大鼠为实验对象,通过使用药物和针刺等外加刺激来研究其对大鼠一系列行为学治标产生影响的研究进行简要的总结,并对其给予初步的分析。对药物和针刺等外加刺激对于行为学研究的前景作以展望。
1.药物对大鼠行为学的影响
张红岩等[1]使用雌激素作为外加刺激,观察雌激素对于偏头痛模型大鼠发病时其行为学的改变。研究结果表明:雌激素能减少中脑导水管周围灰质区5-羟色胺阳性神经元的激活,减轻偏头痛模型大鼠的行为学改变。张俊慧[2,3]应用复方消疲悦意饮作为刺激,观察了其对实验性慢性疲劳大鼠行为学的影响。结果显示造模组造模后大鼠水平及垂直运动次数明显减少,力竭游泳时间缩短,鼠尾悬挂不动时间延长(P
行为学的变化与各个系统的生理功能密不可分。各个系统的机能受到各种因素的影响发生改变的同时,行为学也会发生变化。各种药物通过不同的途径恢复机体的正常功能的同时,对行为学治标也起到了一定的改善。反过来,正常的行为学体系,也就为机体的正常生理学稳态提供了基本保证。如果机体行为学发生变化,正常的生理功能也很难保持在良好状态。这就为今后各种疾病的预防和治疗提供了新的途径。
2.针刺对大鼠行为学的影响
针刺,作为祖国医学宝库中的一朵奇葩,数千年来一直呗广泛使用,对于各个领域疾病的治疗和预防都起到了不俗的效果。最新研究表明针刺在行为学研究领域也有良好的疗效。
朱书秀[6]采用Meyne核注射微量A131-40制备动物模型,选取百会、太溪、足三里电针治疗,以Morris水迷宫评价大鼠学习记忆能力,免疫组化法观察海马区IL一1p、TNF-Ot的表达。观察电针对阿尔茨海默病大鼠学习记忆及海马区IL一113、TNF-Ot的影响,探讨了电针治疗的作用机理。结果表明模型组海马区IL一1p、TNF-Ot的量增加。学习记忆能力减退。经电针治疗后,IL一113、TNF-Ot的量较模型组减少,学习记忆能力增强。电针可显著改变AD模型大鼠的学习记忆能力,降低海马IL一113、TNF-Ot的含量。罗文舒[7]将大鼠随机分为空白组、模型组、西药组、针刺1组和针刺2组,采用长期不可预见性中等强度应激结合孤养造成大鼠抑郁症模型,分别测定大鼠糖水消耗量以及行为学的改变。借以观察针刺督脉的基础上加用足太阳经穴对抑郁症大鼠的疗效,结果与模型组相比,针刺督脉和足太阳经治疗组的糖水消耗量增加,行为学评分升高。说明针刺督咏和足太阳经可以改变抑郁模型大鼠行为学异常,在治疗抑郁症方面有一定优势。李丽萍[8]采用针刺百会、太冲穴对慢性应激抑郁模型大鼠行为学变化进行了观察研究。结果显示造模21天后各组大鼠的水平运动和垂直运动得分均较正常组明显减少,体重增加减慢,糖水消耗量降低;而针刺治疗组与阿米替林组均可显著增加大鼠水平运动和垂直运动得分,使体重增加,糖水消耗量增加,改善大鼠的抑郁状态,各治疗组间差异不显著。说明针刺可以改善慢性应激抑郁模型大鼠的抑郁状态。倪丽伟[9,10]使用Cnstina Tassore报道的方法并加以改进复制偏头痛大鼠模型,造模成功后分别给予相应针刺或药物处理,采用时间分段计数法观察造模后大鼠的行为症状变化。结果显示针刺和尤舒均能显著改善偏头痛模型大鼠的行为学症状且疗效相似。说明针刺可显著改善偏头痛模型大鼠的行为学症状。
以上报道可以看出,针刺穴位可以对很多疾病起到改善作用。针刺通过调节机体的功能,能够同时改善机体行为学的变化,进而进一步缓解机体功能。针刺作为一种损伤小、副作用小的方法,避免了由于长期药物治疗的副作用,可以作为今后行为学治疗的重要方法。
3.研究展望
世界卫生组织关于健康的定义是:健康不仅指一个人没有疾病或虚弱现象,而是指一个人生理上、心理上和社会上的完好状态。这就是现代关于健康的较为完整的科学概念。现代健康的含义是多元的、广泛的,包括生理、心理和社会适应性3个方面,其中社会适应性归根结底取决于生理和心理的素质状况。心理健康是身体健康的精神支柱,身体健康又是心理健康的物质基础。良好的情绪状态可以使生理功能处于最佳状态,反之则会降低或破坏某种功能而引起疾病。身体状况的改变可能带来相应的心理问题,生理上的缺陷、疾病,特别是痼疾,往往会使人产生烦恼、焦躁、忧虑、抑郁等不良情绪,导致各种不正常的心理状态。作为身心统一体的人,身体和心理是紧密依存的两个方面。而行为学正式研究这一领域的学科,我们通过药物、针刺,以及其他各种疗法的根本目的也就是改善机体的功能,说到底就是改善行为学。所以,对于行为学的研究还只是刚刚开启了大门,今后的研究还有待于进一步的开拓新方法,拓展新领域。相信随着医学的发展,将会有更多的研究成果被报道,更好的为人类真正意义的健康服务。
参考文献
[1] 张红岩.雌激素对于偏头痛大鼠行为学改变及中脑导水管周围灰质5-HT表达的影响.吉林大学学报(医学版)[J],2008,34(1):131-134.
[2] 张俊慧,胡兵,沈思钰.复方消疲悦意饮对实验性慢性疲劳大鼠行为学的影响[J].医学研究生学报,2008,21(8):817-819.
[3] 刘雨桃,石远凯,孙燕.慢性疲劳综合征[J].癌症进展,2007,5(2):209-214.
[4] 刘学,李瑞香.凝血酶对大鼠脑出血后脑水肿和行为学变化的影响[J].中国校医,2008,(22)4:405-407.
[5] 李满生.寿聪胶囊对老年痴呆模型大鼠行为学及过氧化氢酶,单氨氧化酶的影响[J].中国中医药信息,2008,(15)10:34-35.
[6] 朱书秀.电针对阿尔茨海默病模型大鼠行为学及海马区IL一1p、TNF-OL的影响[J].陕西中医学院学报,2008,(31)4:55-57.
[7] 罗文舒.针刺督脉和足太阳经对抑郁模型大鼠行为学的改善作用[J].中医药导报,2008,(14)6:1-3.
[8] 李丽萍.针刺对慢性应激抑郁模型大鼠行为学的影响[J].针灸临床杂志,2008,(24)6:50-52.
动物行为学研究范文第2篇
【关键词】神经病理性疼痛；脊髓背角；P物质
The increase of substance P expression in dorsal horn of spinal cord in rats with chronic constriction nerve injury
ZHANG Rui,WANG Qing-xiu,GUO Hui-qing，et al.Department of Anesthesiology,affiliatedDongfeng Hospital of Shiyan YunYang Medical College,Hubei，442008,China
【Abstract】 Objective To observe the expressive variety of substance P in the dorsal horn of spinal cord on neuropathic pain by chronic constriction injury(CCI).Methods Sixty male Sprague-Dawley rats were randomly divided into two groups:CCI group,control group.Record the responsiveness to mechanical and thermal stimuli before and after sciatic nerve constriction injury.Immuno-histochemistry technique was used to measure the expression of substance P in the dorsal horn of spinal cord at 3th,7th,14th,28th days following sciatic nerve constriction injury.Results The rats’ responsiveness to mechanical and thermal stimuli and pain behavior were significantly increased on postoperative days after sciatic nerve ligation compared with preoperative(P
【Key words】Neuropathic pain；Dorsal horn of spinal cord；Substance P
疼痛性疾患是困扰人类健康的严重问题，其中慢性疼痛是常见的病理痛之一,在慢性疼痛中，神经源性痛(neuropathic pain)的治疗至今仍缺乏有效的治疗手段，其机制也未能完全阐明，是临床面临的一大难题[1] 。P物质(substance P,SP)是速激肽家族中重要一员，广泛分布于中枢神经系统和外周组织中。在脊髓，P物质是公认的与伤害性信息传导密切相关的神经活性物质[2]，本实验旨在观察坐骨神经慢性压迫性损伤(CCI)后大鼠痛行为学改变和脊髓背角SP 含量变化,探讨SP 在CCI后可能的作用。
1 材料与方法
1．1 对象 本实验在郧阳医学院实验中心及动物中心完成。成年雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠60只(郧阳医学院实验动物中心提供)，体质量150~200 g。
1．2 CCI［坐骨神经慢性压迫性损伤］模型的建立 按Bennett 等的方法,SD大鼠水合氯醛腹腔麻醉(30~40 mg/kg)后,常规消毒右下肢,找到坐骨神经主干,用4-0铬制羊肠线松扎四处,间距为1 mm,结扎线以不影响神经外膜的血运为度。术毕立即腹腔注射青霉素20万U。
1．3 动物分组及观察指标 SD雄性大鼠60只,随机分为:A组：CCI组(30只)； B组：对照组(30只)，对照组除坐骨神经不结扎外，其他操作同CCI动物。
观察指标：于术前、术后3、7、14、28 d 测定大鼠热痛阈、机械痛阈值及行为学评分。于术后3、7、14、28 d 每组取3只，麻醉后麻醉后用4%多聚甲醛灌注固定，取L4-6段脊髓，以备免疫组化，测定SP的变化。
1．4 动物疼痛行为学测定
1．4．1 整体行为学评分 参照Attal等的评分方法,通过观察动物行为及损伤侧爪部姿势判断自发性疼痛程度。
1．4．2 机械痛阈的测定 采用YLS-3E 电子压痛仪(正华公司,中国)测定双后肢机械痛阈。设定增量压力10 g/s。大鼠放在有机玻璃框架中,待鼠安静,探针对准大鼠后足掌心，启动开始键，至大鼠嘶叫，记录该刻值，即为机械痛阈阈值。术侧与健侧各测量5次,每次间隔5 min，取平均值。
1．4．3 热痛阈的测定 采用ZH-LUO/B辐射光热测痛仪(正华公司,中国)测定大鼠足底热痛阈。设定辐射热强度：49 I.R；实际照度：180 mW。记录辐射照射开始到抬足的时间，该时间即为热痛阈。单次光照射时间不超过30 s，间隔5 min，术侧与健侧各测定5次，取平均值。
1．5 脊髓背角SP的免疫组织化学测定及分析
①石蜡冠状切片，脱蜡入水，3％H2O2室温孵育10 min，蒸馏水洗3 min×3次；
②微波炉(中档)修复3 min，室温冷却60 min，蒸馏水洗3 min×3次，0．01 mol/L,pH 7．4 PBS漂洗3 min×3次 ；
③滴加 3％H2O2 水溶液，室温15 min，蒸馏水洗3 min×3次，0．01 mol/L,pH 7．4 PBS 漂洗3 min×3次 ；
④滴加30 μl正常羊血清，室温孵育15 min；
⑤甩掉血清，滴加30 μl 1:100 SP抗体，空白对照片加30 μl抗体缓冲稀释夜,湿盒内4℃过夜；
⑥0．01 mol/L,pH 7．4 PBS 漂洗3 min×3次；
⑦滴加链霉卵白素-辣根过氧化物酶(HRP-Streptavidin)，室温孵育15 min；
⑧0．01 mol/L,pH 7．4 PBS 漂洗3 min×3次；
⑨DAB溶液(用前现配)染色3~5 min；
⑩自来水充分冲洗；
B11苏木素复染1~2 min；
B12自来水充分冲洗，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树脂封片；
B13应用Geica QwinV3图像分析系统进行计算机图像分析处理，选用免疫阳性反应物的累积光密度值进行统计分析。
1．6 统计学方法 用Excel和SPSSv13．0软件进行统计学分析，实验结果以均数±标准差”(x±s)表示。组间比较采用成组t检验，组内比较用配对t检验进行分析，P
2 结果
2．1 疼痛整体行为学评分 A组大鼠从术后第3天起,行为学评分明显高于对照B组，第7天最明显，组间差异具有统计学意义(P
2．2 机械痛阈值与热痛阈值变化 机械痛阈值与热痛阈值术后各时间点A组均显著低于对照B组(P
2．3 脊髓背角SP的表达免疫组织化学结果表明，手术侧脊髓后角，A组术后术侧明显高于B组(P
3 讨论
在脊髓，P物质(substance P,SP)是公认的与伤害性信息传导密切相关的神经活性物质[2]，含有它们的初级神经纤维及末梢主要终止于脊髓背角浅层，并与接受伤害性刺激的投射神经元形成直接或间接的联系[3]。SP不仅传递伤害性信息,而且在脊髓痛觉调制中具有重要作用[4]，它与兴奋性氨基酸一起介导伤害性初级传入向脊髓背角的传递[5]，近年来体微电极技术可精确定位刺激引起的SP在脊髓背角释放[6]。Yezierski [7]等证明SP与脊髓损伤后的中枢性疼痛有关。在活体，激活了C纤维后，许多神经肽类物质释放，如SP、CGRP、血管活性肠肽VIP、生长抑素和谷氨酸[8]，这些递质递质作用于受体后，改变疼痛行为。SP作用于突触后膜NK1受体，加强伤害性信号传递。神经激肽NK1与NK2受体是伤害感受中最重要的受体[9],当脊髓内同时注射SP和谷氨酸时，产生显著的，相互增强的致痛反应[10]。神经损伤后，C纤维兴奋性增加，SP大量释放，作用于脊髓背角的NK1受体，NK1受体激活后，激活磷脂酶C，使细胞内的三磷酸肌醇IP3和二酰基甘油DAG的浓度增加。IP3动员内质网内的Ca2+储库，使细胞内游离Ca2+的浓度增加,使NMDA受体激活。在L5、L6脊神经结扎前、后损伤NK1受体表达神经元，能减轻神经源性痛，说明NK1受体神经元参与背角神经元的敏化[11]。
外周神经损伤常引起慢性神经病理性疼痛，表现为持续自发性疼痛和痛觉过敏，外周和中枢的敏化是其病理基础。本研究显示CCI大鼠于术后3 d出现疼痛行为学变化和热刺激痛觉过敏、机械性痛敏，7 d达高峰，在后续较长的时间内维持稳定，表明形成了较为典型的神经病理性痛；在疼痛产生的不同时间点，观察SP的表达变化，本研究发现CCI后术侧脊髓背角SP与对照组比均明显升高，术侧明显高于健侧(P
参考文献
［1］ BridgesD,ThompsonSWN,RiceASC.Mechanisms of neuropathic pain.BritishJ Anaesthesia,2001,87:12-26.
［2］ Kuraishi Y,Hirota N,Soto Y,et al.Evidence that substance P and somatostatin transmit separate information related to pain in the spinal dorsal horn.Brain Res,1985,325:294-298.
［3］ Ruan HZ,LiXC,Cai WQ,et al.Participation of substance P in noxious stimulus-evoked c-fos expression in spinal cord.Chin Sci Bull,1994,39:1725-1729.
［4］ Ruan HZ,Li XC.Effect ofand monoamine neurotransmitters on pain modulation of substance P in spinal cord.Chin Sci Bull,1991,36:682-686.
［5］ Millan MJ.The induction of pain:an integrative review.Prog Neurobiol,1999,57:121461.
［6］ Zhao ZQ,Yang HQ,Zhang KW,et al.Release and dep letion of substance P by cap saicin in substantia gelationosa studeide with the antibody icrop robe technique and immunohistochemistry.Neuropeptides,1992,23:161-1671.
［7］ Yezierski RP,Yu CG,Mantyh PW,et al．Spinal neurous involved in the generation of at-level pain following spinal injury in the rat.Neurosci Lett,2004,361(1-3):232-261.
［8］ Morton CR,Hutchinson WD.Morphine does not reduce the intraspinal release of calcitonin gene-related peptide in the cat.Neuroscience Letters,1990,117:319-324.
［9］ Fleetwood-Walker SM,Hope PJ,Mitchell R,et al.The influence of opioid receptor subtypes on the processing of nociceptive inputs in the spinal dorsal horn of the cat.Brain Research,1988,451:213-226.
动物行为学研究范文第3篇
论文关键词:动物生物学动物行为学教学效果
论文摘要:动物生物学是生物科学和生物技术专业基础课程，知识点多、范围广、发展快，但教材内容相对陈旧，成为动物学教学过程顺利实施和提高学生学习动物学课程兴趣的阻碍，为此，本课程组以动物的系统进化为基础，在讲解动物形态学知识的前提下适当补充动物行为学的知识，既拓宽了动物学的内容，又培养了学生的学习兴趣，收到良好的效果。
《动物生物学》是生物学专业基础课程，学生对该课程的感性认识和学习效果直接影响着后续相关课程的学习。动物生物学涉及的范围广、内容新、发展快，使该门课程教学的难度很大。同时，近几年我国高校着力进行课程改革，不断压缩传统学科的教学时数和教学内容，增加了一些新兴交叉学科课程，使原本内容多课时少的动物生物学教学面临新问题。
当前，动物生物学教学中，教学内容陈旧，仍以形态、结构、分类等传统内容为主，而生理、行为、进化等现代动物学内容少。动物之所以能够引起公众的格外关注而且走进我们的生活，主要在于它们具有千变万化的行为，大熊猫的憨态、金丝猴的敏捷、藏羚羊的轻灵等有趣行为本身就是公众茶余饭后的重要谈资。因此，必须摒弃过去那种单纯的介绍动物形态和结构的“静态”教学方式，而需要以一种“动态”的思维来组织教学，使学生了解和掌握动物真实的生活状态。
为此，河南科技大学动物科技学院动物学课程组在教学过程中，在博采众长的基础上制作了《动物生物学》课件，并在教学过程中不断改进与完善，有针对性地补充动物行为方面的相关内容，在讲授重点章节时通过提供影像资料等丰富教学内容，以增加教学的直观性与趣味性，从而提高教学效果。例如，我们结合学科进展和自己的科研，将诸如蚂蚁的通讯、鱼类的洄游、青蛙的鸣叫、鸟类的繁殖、灵长类的表情等有趣的行为学知识融合到相关章节的教学中，发现学生的学习兴趣高涨，课堂气氛空前活跃。
1 数字
比如，雌舞毒蛾分泌的信息素可把远在400m以外的雄蛾吸引到自己身边来。若将雌性松叶蜂关在笼中置于田间，可招来多达11000只雄性松叶蜂。
原核生物和多数原生生物是通过细胞的直接分裂而实现个体数量的增加，也有的物种通过出芽方式(如水螅)产生新的个体，为什么性和有性生活时如此普遍呢？性的产生对整个生物进化进程的影响是极其深远的，从而导致了有性生殖的出现。大概在6.0亿年前的新元古代晚期，可能就已经出现了性的分化，从而导致有性生殖的产生。动物的求偶行为是指伴随着性活动和作为性活动前奏的所有行为表现，是动物有性生殖过程中的重要行为。求偶行为的表现形式极其多样，复杂的过程可以持续几个小时甚至几天。这种行为非常引人注目，原因在于它常常涉及一些奇特的动作。雄性滑北螈的求偶行为是很独特的，为了使求偶过程最终能够达到受精的目的，雌螈必须捡起雄螈排放在池底的精包。当两性相遇时，雄性一般会排出2、3个精包甚至更多。在雄螈求偶期间，雌螈捡拾精包的积极性是逐渐增加的。因此，其捡拾第三个精包的概率比捡拾第一个精包的概率大很多。因此，数字反映了动物行为的过程或者特点，对于准确地理解动物行为的生物学意义具有非常客观和直接的帮助。
2 听觉
动物体结构十分精巧和复杂，其形态、结构与功能高度统一，这是理解动物生物学知识和原理，发挥动物生物学作为生命科学基础课程作用的关键所在。比如两栖类动物，根据鸣囊的数量有单鸣囊和双鸣囊之分。因此，鸣叫便成了一种发挥重要通讯功能的方式。
蛙类在繁殖季节发出各种鸣叫，进行种内通讯。一般都是雄蛙发出鸣叫，雌蛙根据鸣声判断雄蛙的优异程度。部分种类的雌蛙也能发出鸣叫。崔建国等的研究发现，峨眉弹琴蛙在时，雄性从背部抱住雌性并做前后摩擦运动，以刺激雌蛙排卵。一旦雄蛙停止运动，雌蛙立即发出刺激鸣叫直到雄蛙重新摩擦运动。有趣的是，如果研究者用手阻止雄蛙的运动，雌蛙就一直鸣叫。除此之外，在野外和室内回放这种刺激鸣叫还导致雄性间的竞争甚至打斗行为。繁殖期的雄性弹琴蛙在池塘边缘打洞筑巢，并将洞口用落叶覆盖作为“婚房”。雄蛙在洞内鸣叫吸引雌蛙前来产卵。最有意思的是，当雌蛙来到“婚房”附近，雌雄互相无法看见，这时雌蛙发出刺激鸣叫。雄蛙听到后就会出洞迎接雌蛙，一起返回“婚房”共度良宵。 转贴于
3 视觉
视觉是动物进化过程中发展出来的一种极其中的通讯方式。我们在解释眼球结构的演变过程中，也适当补充关于视觉的行为学实例。
视觉信号具有一定的作用距离，它有确定的方向性并可被光感受器感受。常见的例子有，雄性三刺鱼常常不分青红皂白地攻击小块红色物体，由于红色是雄三刺鱼的标志色。在繁殖季节，雄性孔雀冒着生命危险张开色彩美丽又硕大无比的尾羽以吸引雌性与之等等，这些内容的补充既丰富了学生的知识，又加深其对“动物结构适应于其机能”的理解，把各类群动物执行相应功能的形态结构以系统比较的方式加以说明，从进化的角度比较不同动物相应的器官结构，阐明结构与功能的有机统一，为后续知识的学习和融会贯通做了良好的铺垫。
4 化学通讯
近年来，大量新理论和新成果不断涌现，这就要求教师必须敏锐把握学科发展前沿并及时充实到教学内容中，使学生认识到动物学不是停滞不前的而是一门不断发展的学科。
在动物界，化学通讯是非常普遍也是非常重要的一种通讯方式。动物的很多分泌物是针对同种个体或其他物种的。英国《皇家学会学报B》近日在线发表中科院动物所肖永红等从北京幽灵蛛首次鉴定出首个雄性蜘蛛信息素的研究结果。他们发现(Z)-9-二十三烯是北京幽灵蛛的求偶期雄蛛特有的化合物成分，能够刺激成熟雌蛛步足跗节的化学感受器产生电位反应。行为试验结果显示该物质对期雌蛛没有吸引性，不会激发期雌蛛的捕猎行为，但暴露于该物质环境的雌成蛛与对照组相比更易于与寻偶雄蛛，其配对雄蛛的求偶时间显著缩短。信息素通讯很可能对生活于黑暗环境中的洞穴蜘蛛的生殖行为有及其重要的调节作用，并通过种间特有的信息素保证种间生殖隔离，信息素的分化也可能是蜘蛛物种分化与物种形成的机制之一。
近年来，大量的新知识、新理论、新成果不断涌现，这就要求教师必须敏锐把握动物生物学的另一方面，即只有与人类生产或生活密切相关的知识，才是学生感兴趣的知识，也才能使该课程为社会科学发展发挥更大作用。因此，我们在主要描述动物的形态、结构、分类等知识点的基础上，适当扩充动物行为学的内容，增加了动物生物学的知识点，提高动物生物学教学的趣味性，收到了良好的效果。
参考文献
动物行为学研究范文第4篇
关键词：针灸疗法 抑郁症
抑郁症是一种常见的情绪障碍性疾病，表现为一种持久的抑郁状态，以心境低落、躯体不适和睡眠障碍等为主要症状［1］。是危害全人类身心健康的常见病，其终生患病率为6.1%～9.5%［2］。据专家预测，到2020年，精神疾病在人们的疾病负担中将列首位，而抑郁症则占精神科疾病的47%［3］。抑郁症及其治疗引起内外广大学者的广泛重视。本研究旨在通过观察针刺对抑郁模型大鼠行为学的影响，评定针刺抗抑郁疗效。
1 器材
1.1 药品多虑平：南京白敬宇制药厂产品，批号：20040912。
1.2 动物（200±20）g Wistar雄性大鼠，由山东大学实验动物中心提供，合格证号：鲁动质字：20040816。
1.3 器材“华佗”牌32号1.0寸针灸针，苏州医疗用品厂产品；穿梭箱：山东中医药大学中西医结合基础研究室提供，根据文献介绍制备［4］，大鼠穿梭箱有两室，每室30 cm×30 cm× 20 cm，可人为开闭，箱底为不锈钢栅条，条间距离为1 cm，两室栅条可错时通电，一室与刺激器接通时，另一室为安全室；敞箱：根据文献介绍，自行制备［5］，标准为40 cm×80 cm×80 cm，周壁、底面为黑色，底面以白线划分为面积相等的25块。
2 方法
2.1 模拟临床建立大鼠学习无助模型将大鼠放入穿梭箱，中间通道关闭，通过底部的金属栅条给予220V，0.8 mA的方波刺激，刺激15 s，间隔45 s/次，共60次，总刺激时间15 min，进行不可逃避的电休克即前休克动物（pre-shocked animals）制作［1］。
2.2 分组及给药(200±20)g Wistar雄性大鼠40只，按体重均衡随机分为空白对照组、模型对照组、阳性药多虑平组、针刺组，每组10只。空白组及模型对照组分别给予凉开水1 ml/100 g，ig；多虑平对照组给予多虑平3 mg/kg，生理盐水配成30%水溶液1 ml/100g·ig ；空白对照组大鼠只放入穿梭箱内而不进行电刺激，时间相同。第2天除重复进行前一天实验并开始给药，连续给药14 d。最后一次给药后24 h，采用Open-Field法进行动物行为学敞箱实验及条件回避实验，记录并统计实验数据。
2.3 针刺取穴及操作方法针刺组根据《实验针灸学》［6］大鼠穴位定位方法，选择百会、内关、神庭、三阴交穴，并参照人和动物的穴位解剖结构特点，在动物针灸穴位图谱的基础上，于大鼠前正中线上，额顶骨缝交界线前方处定位神庭穴。其他穴位仿人取穴。针刺方法: 穴位常规消毒，百会穴向前斜刺，神庭穴向上斜刺，进针深度约为0.2 cm。内关直刺0.3 cm，三阴交直刺0.2 cm。每穴行均匀捻转刺激30 s，留针10 min,每日治疗1次,连续14 d。最后一次治疗后24 h，采用Open-Field法进行动物行为学敞箱实验及条件回避实验，记录并统计实验数据。
2.4 敞箱实验将各组大鼠依次放入自制敞箱，以动物穿越底面块数为水平运动（crossing）得分，直立次数为垂直运动（rearing）得分，记录其水平运动、垂直运动次数，每只动物测定1次，测定时间为3 min/次，记录水平运动得分和垂直运动得分情况。
2.5 条件回避实验（conditioned avoidance testing）继敞箱实验后，大鼠放入穿梭箱后适应5 s，进行铃声刺激，非条件刺激为足电休克0.8 mA，在铃声响起3 s后开始方波输出电刺激，当动物逃到安全室后停止铃声和刺激，如未能逃避时刺激达30 s时停止。1次/min，共进行30次，刺激间隔为27 s。测定回避成功次数和逃避潜伏期。 动物在铃声开始3 s内逃到安全室，记录回避成功一次，逃避潜伏期为0；刺激后才逃避的，其潜伏期记录是从刺激开始到逃避完成的时间；到最后未能逃避的，则潜伏期为30 s。
2.6 统计学处理所有实验数据用 ±s表示，计量资料采用t检验、q检验进行差异显著性检验；计数资料采用四格表的确切概率法检验。
3 结果
3.1 针刺对学习无助模型大鼠敞箱实验的影响
3.1.1 水平运动针刺组、多虑平组、空白组均优于模型组。结果见表1。
表1 对大鼠水平运动的影响（略）
为避免统计学上第2类错误，出现假阳性结果，本组数据采用q检验。结果见表2。
表2 q检验结果（略）
由此可见，空白组与模型组有显著性差异，说明此造模方法成功；针刺组及多虑平组与模型组有显著性差异，其差异具有统计学意义；而前两组与空白组的差异及前两组间的差异不具有统计学意义，说明针刺与多虑平均有改善抑郁模型大鼠水平运动状态的作用，且二者作用相似。
3.1.2 垂直运动各处理因素对实验动物垂直运动的影响无显著差异。结果见表3。
表3 对大鼠垂直运动的影响（略）
为避免统计学上第2类错误，出现假阳性结果，本组数据采用q检验。结果见表4。
表4 q检验结果（略）
由此可见，各处理因素对大鼠的垂直运动的影响无统计学意义。
3.2 针刺对学习无助模型大鼠条件回避实验（conditioned avoidance testing）的影响
3.2.1 回避成功空白组、多虑平对照组、针刺组大鼠，回避成功次数较多。结果见表5。
表5 回避成功次数（略）
本组数据采用q检验。结果见表6。
表6 q检验结果（略）
动物行为学研究范文第5篇
关键词：帕金森病；止颤汤；干细胞移植；DA代谢；大鼠
中图分类号：R742.5 R285.5 文献标识码：A 文章编号：1672-1349（2011）08-0975-02
帕金森病（Parkinson’s disease，PD）是由于多种原因导致脑内黑质多巴胺（Dopamine，DA）能神经元退行性病变从而DA分泌减少引起的。干细胞移植是PD的理想治疗方法［1］，通过干细胞中最适合于中枢神经系统细胞替代治疗的神经干细胞（neural stem cell，NSC）移植以期重建PD患者DA能神经元的功能。因此如何促使移植入脑内的NSC存活且定向分化为DA能神经元，并发挥功能成为亟得解决的问题。本实验观察了中药复方止颤汤对NSC移植后PD大鼠尿液中DA及其代谢产物含量的影响，以期为解决NSC移植治疗PD中的疑难问题提供中医药实验依据。
1 材料与方法
1.1 实验动物 Wistar大鼠48只，均为雄性，体重260 g±20 g，由上海斯莱克实验动物中心提供，动物编号：SCXK（沪）2007-0005。
1.2 药品与试剂 止颤汤主要由黄芪、丹参、白芍、升麻、知母、钩藤等8味中药组成。诸药均经鉴定符合药典规定的质量标准。高效液相所用的标准品DA、DOPAC、HVA：美国Sigma公司。
1.3 主要仪器 鼠脑立体定位仪：上海江湾Ⅱ型，液相色谱仪：HPLC Agilent 1200，Agilent Zorbax oligo 80 mm×6.2 mm,5 μm column。
1.4 方法
1.4.1 模型制备 采用大鼠脑立体定位MPTP注射法制模［2］。术后14 d，颈部皮下注射诱导剂阿扑吗啡（Apo）后，测量大鼠30 min内向损毁侧旋转总次数，若大鼠旋转圈数>210 r/30 min（>7 r/min），视为成功PD大鼠模型。
1.4.2 NSC的分离培养及鉴定 参照文献［3］，选取孕14 d的Wistar大鼠胚胎，分离出中脑组织，机械消化成单细胞悬液，种植于塑料培养瓶中，5%二氧化碳，37 ℃环境中培养，待原代克隆出现后（7 d～10 d），离心收集神经球，胰酶消化，吹打成单细胞悬液，1×105 /mL浓度种植于新培液中，每7 d换液传代1次，离心收集形成的神经球，经甩片到多聚赖氨酸包被的玻片上，固定后进行免疫细胞染色，检测NSC特异性蛋白Nestin的表达，鉴定所培养细胞中NSC细胞数量及传代后生长情况。
1.4.3 动物分组及给药 将48只大鼠随机分为4组。NSC移植组：大鼠PD模型制作后，将NSC注射入PD大鼠损毁侧黑质纹状体内，同时用生理盐水4 mL，每天分2次灌胃。正常组：正常大鼠，脑内同一位置注射等量培养基，同时用生理盐水4 mL，每天分2次灌胃。模型组：模型制作后，同正常组处理。止颤汤组：同样方法将NSC移植入PD大鼠模型，同时将止颤汤1.2 mL/100 g用生理盐水稀释为4 mL，每天分2次灌胃。
1.4.4 行为学测试 分别于处理后7 d、14 d、28 d颈部皮下注射阿扑吗啡，诱发其旋转行为，动物旋转时以患侧后肢为支点、身体环曲、首尾相接的原地旋转，伴觅食样动作，旋转360°为一转，30 min内记录大鼠的旋转圈数。
1.4.5 取材及材料处理 动物在处理后第28天末次灌胃后进行行为学测试，次日晨收集尿液置入-80 ℃超低温冰箱保存备用。测样时，室温下解冻，每次进样10 μL。高效液相色谱法检测DA、DOPAC及HVA含量［4］。
1.5 统计学处理 数据以均数±标准差（x±s）表示，组间比较用t检验，采用统计软件中One-Way ANOVA进行单因素方差分析。
2 结 果
2.1 大鼠行为学测试结果（见表1）
表1 各组大鼠行为学测试结果比较（x±s）r/30 min
2.2 PD大鼠尿液中DA、DOPAC、HVA含量及DA/DOPAC、DA/HVA比值比较（见表2）
3 讨 论
止颤汤是本科室李如奎教授多年治疗PD的经验效方，主要有黄芪、当归、丹参等药组成，有益气养阴、清热祛瘀、熄风通络作用，在临床研究中取得较好疗效［5］，实验研究中有发现天麻、当归等中药可以诱导骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞［6］，黄芪和丹参不仅有诱导间质干细胞定向分化为神经元样细胞的作用，且可能对脑内NSC的增殖及向多巴胺能神经元分化有促进的作用［7,8］。本实验结果显示，止颤汤组行为学转数随时间延长较模型组明显减少（P
但是，本实验不能排除中药对脑内损毁DA能神经元本身的修复和残存DA能神经元功能以及内源性NSC分化为DA能神经元的促进作用，对此尚需进一步研究。
参考文献:
［1］ 钱忠明,李琳,王玮,等.干细胞移植治疗帕金森病研究进展［J］.中国神经科学杂志,2002,18（3）:634-638.
［2］ Rubio-Osornio M,Montes S.Copper reduces striatal protein nitration and tyrosine hydroxylaseinactivation induced by MPP+ in rats［J］.Neurochemistry International,2009,54:447-451.
［3］ 李凌松,路艳艳.神经干细胞及帕金森病的细胞治疗［J］.北京大学学报,2002（3）:499.
［4］ 刘师莲.大鼠脑组织单胺类递质及其代谢产物的检测方法研究［J］.山东大学学报,2002,40（5）:472-475.
［5］ 刘毅，李如奎.止颤汤治疗帕金森病31例临床观察［J］.山西中医，2002，18（3）:16-17.
［6］ 刘金保,董晓先,董燕湘,等.多种中药成分诱导大鼠骨髓间质干细胞转变为神经元样细胞［J］.中国药物与临床,2003,3（3）:234-236.
［7］ 余勤,罗依,董勤,等.黄芪对间质干细胞分化为神经元样细胞的定向诱导作用［J］.中华急诊医学杂志,2004,13（12）:826-829.
［8］ 项鹏,夏文杰,王连荣,等.丹参注射液诱导间质干细胞分化为神经元样细胞［J］.中山医科大学学报,2001,22（5）:321-324.
作者简介：宋杰（1985―），男，现为上海中医药大学2009级中医内科学硕士研究生（邮编:200071）；施慧芬（通讯作者），工作于上海中医药大学附属上海市中医医院（邮编:200071）。
动物行为学研究范文第6篇
【摘要】 ：目的 围绕海马结构的形态学研究定志小丸的抗抑郁机制。方法 40只雌性大鼠分为对照组、抑郁症模型组(模型组)、蒸馏水组(DW组)和定志小丸组(中药组)，Open field法检测行为学得分，ELISA法检测血清皮质醇和雌二醇(E2)含量，HE染色和电镜技术观察海马CA3区神经元形态，免疫组化技术检测齿状回神经干细胞(NSC)增殖。结果 与对照组比较，模型组和DW组行为学得分及血清E2含量显著下降，皮质醇水平升高和NSC增殖明显降低，海马CA3区神经元损伤明显；中药组行为学得分和血清E2含量无明显变化，皮质醇明显减少，NSC增殖显著增加，海马CA3区神经元基本正常。结论 定志小丸能够保护海马结构，这可能是其抗抑郁机制之一。
【关键词】 抑郁症 定志小丸 雌二醇 神经干细胞 皮质醇 大鼠
Abstract：Objective To study the anti-depression mechanism of Dingzhixiaowan concerning on histology of hippocampal formation. Methods 40 female rats were pided into control， depression model group (model group)， distilled water group (DW group) and Dingzhixiaowan group (Chinese herb group). Behavior points were measured by open field method. Serum concentrations of cortisol and estradiol (E2) were checked with ELISA. HE staining and electron microscopy were applied to observe the histology of neurons in hippocampal formation. Immunohistochemistry method was employed to detect Nestin expression. Results Compared with the control， behavior points， serum E2 level and Nestin expression decreased obviously and serum cortisol level increased markedly， CA3 neurons were seriously damaged in model and DW groups. While behavior points， serum E2 level did not change， Nestin expression increased obviously and serum cortisol level decreased markedly， CA3 neurons were basically normal in Chinese herb groups. Conclusion Dingzhixiaowan can protect hippocampal formation， which might be one of the anti-depression mechnisms.
Key words：depression；Dingzhixiaowan；estradiol；neural stem cell；cortisol；rat
目前认为，慢性应激刺激造成的海马结构损伤是抑郁症发病的主要原因。对海马结构来说，糖皮质激素是损伤激素，雌激素为保护激素，而女性的雌激素水平变化较大，其保护作用时常减弱，这可能是女性抑郁症发病率较高的原因。本研究以此为出发点，研究定志小丸的抗抑郁机制。
1 材料与方法
1.1 动物及分组
成年Wistar雌性大鼠(230±20)g，辽宁中医药大学动物实验中心提供，合格证号：SCXK(辽)2004-0018。适应性饲养1周后，选择体重和行为学得分相近的40只大鼠，随机分为对照组、模型组、蒸馏水组(DW组)和定志小丸组(中药组)，每组10只。对照组每笼5只饲养，其余3组每笼1只饲养。
1.2 抑郁症模型的建立
除对照组外，其余3组动物均接受慢性应激刺激，复制慢性不可预见性应激模型。其方法是：在21 d内施加电击足底(36 V交流电，5 min)、冰水游泳(4 ℃，5 min)、摇晃(1 min)、夹尾(1 min)、禁水(24 h)、禁食(24 h)等刺激，每种刺激3～4次。
1.3 给药
对照组不给药；模型组只施加灌胃动作；DW组灌服1 mL蒸馏水；中药组灌服定志小丸。定志小丸为人参、茯苓、远志、石菖蒲的标准提取物(购于安徽宣城百草生物有限公司，提纯比例为5∶1)，剂量分别是10、10、6、6 g，溶于适量水中，加热后浓缩为1 kg/L。按成人用量折算成灌胃剂量[1 mL/100(g? d)]，于刺激前1 h灌服。
1.4 大鼠行为学检测
采用Open field法检测，以3 min内大鼠水平穿越方格数作为水平活动得分，以前肢抬起次数为垂直活动得分。检测过程中保证时间、光照、温度及环境噪音的一致性。检测由3人同时完成，1人负责计时，1人负责观察大鼠的水平活动，1人负责计数垂直活动。正式检测前，3人首先熟悉检测标准，并进行多次训练，尽量减少人为误差。
1.5 血清皮质醇和雌二醇检测
在第22天，大鼠腹腔注射20%氨基甲酸乙酯(0.4 mL/100 g)麻醉后，腹主动脉取血，离心后取血清，冻存备用。于总医院内分泌实验室采用ELISA方法检测血清皮质醇和雌二醇(E2)含量。
1.6 海马组织学观察
将取血后的大鼠用150 mL生理盐水经主动脉快速冲洗，取一侧海马行常规HE染色，另一侧于扫描电镜下观察形态学变化。
1.7 齿状回神经干细胞(NSC)增殖检测
采用Nestin免疫组化方法，取经生理盐水快速冲洗后的海马，4%多聚甲醛固定4～6 h，30%蔗糖溶液沉底。冰冻连续切片，片厚25 μm，隔4片取1片。将切片置含新鲜0.5% H2O2的纯甲醇中30 min；0.1% Triton溶液中30 min；正常山羊血清60 min；兔抗鼠Nestin一抗(1∶2000，Sigma)，25 ℃孵育1 h，4 ℃过夜；生物素化山羊抗兔IgG(博士德二抗试剂盒)，室温下60 min；SABC复合物，室温60 min；DAB显色(博士德)。染色对照：用正常山羊血清和PBS代替Nestin一抗作孵育，其余步骤同上。利用BI-2000医学图像分析系统，计数阳性细胞数。
1.8 统计学方法
实验数据以x±s表示，采用SPSS11.5进行统计处理。
2 结果
2.1 各组大鼠海马CA3区神经元的形态学变化
光镜下可见，对照组CA3区有大量致密锥体细胞，排列整齐，细胞完整，边缘清晰，死亡细胞较少；模型组和DW组可见细胞层次减少、紊乱、中断，大量细胞坏死；中药组神经元形态与对照组基本接近。电镜下可见，对照组细胞器丰富，轮廓清晰，细胞核呈圆形，核膜清晰光滑完整，核染色质分布均匀；模型组和DW组细胞器减少，线粒体空泡化，细胞核变小，不规则，且核膜增厚，核周电子密度降低；中药组与对照组基本相同。
2.2 各组大鼠齿状回Nestin表达
镜下可见Nestin免疫阳性反应产物呈棕黄色，环形分布于核膜周围。对照组镜下可见较多的棕黄色反应物，边缘相对清晰，细胞大小相近；模型组和DW组棕黄色反应物较少，边缘不清，细胞大小不一致；中药组镜下可见大量棕黄色反应物，边缘清晰，细胞大小一致。各组Nestin阳性细胞数见表1。表1 各组大鼠Nestin阳性细胞数(略)注：与对照组比较，*P
2.3 各组大鼠行为学得分
(见表2)表2 各组大鼠的行为学得分(略)注：与本组第0天比较，P
2.4 各组大鼠血清皮质醇和雌二醇含量
(见表3)表3 各组大鼠血清皮质醇和雌二醇含量变化(略)
3 讨论
海马结构具有调节内脏功能、情绪和行为的多种作用，主要由海马和齿状回组成。齿状回存在NSC，能够增殖、迁移至海马CA3区，分化形成新的神经细胞。因为抑制齿状回NSC增殖后，许多抗抑郁药物会失效，所以，海马CA3与齿状回的关系在抑郁症发病中的作用逐渐受到重视。抑郁症的发病机制目前认为是慢性应激刺激引起肾上腺皮质过度分泌糖皮质激素，继而损伤海马神经元。本实验也观察到同样现象。由于高水平的糖皮质激素还能抑制齿状回NSC增殖，从而降低了海马结构的自我修复能力[1]，继而导致海马结构出现不可逆损伤。因此，抑郁症的根治应围绕保护海马成熟神经元和齿状回NSC两方面进行。
定志小丸由远志、石菖蒲、茯苓和人参组成，具有祛痰开窍、健脾益智作用，主治心气不定、五脏不足、忧悲不乐等。实验结果表明，该方能够对抗慢性应激对大鼠行为学的影响，具有抗抑郁作用，这可能与其保护海马CA3区神经元和齿状回NSC增殖有关。尽管定志小丸不能抑制皮质醇的过度分泌，但其维持E2水平的作用可能更为重要，因此，该方可能是替代雌激素的一种选择，成为治疗女性抑郁症的备选药物。
动物行为学研究范文第7篇
Inosine is neuroprective against MPTPinduced Parkinsons disease in C57BL mice
【Abstract】 AIM: To study the neuroprotective effects of inosine on 1methyl4phenyl1，2，3，6tetrahydropyridine（MPTP）induced Parkinsons disease（PD） in C57BL mice. METHODS: The PD models were formed with intraperitoneal injections of MPTP. Inosine was administered intraperitoneally to mice 30 min prior to MPTP. The effects of inosine and MPTP on the behavioral exhibition， the number of dopamine (DA) neurons in the substantia nigra and the density of tyrosine hydroxylaseimmunoreactive (THir) nerve fibers in the striatum， and the level of DA in the striatum were studied by behavioral test， immunohistochemical analysis and fluorospectrophotometry. RESULTS: The scores of locomotion， Rotarod and swim test decreased by about 45％ and 43％ and 22％， respectively. The number of DA neurons in the substantia nigra declined by about 58％， the density of THir nerve fibers also decreased， and the level of DA in the striatum declined by about 88％. Inosine， given prior to MPTP， attenuated the effects of MPTP. The scores of locomotion， Rotarod and swim test declined only by about 5％ and 11％ and 12％， respectively， the number of DA neurons in the substantia nigra declined by only about 43％ and the level of DA in the striatum declined only by about 71％. CONCLUSION: Inosine is neuroprective against MPTPinduced lesions in C57BL mice.
【Keywords】 inosine；1Methyl4pheny1，2，3，6tetrahydropyridine；Parkinson disease；nearaprotective agents；mice
【摘要】目的： 观察肌苷对MPTP致帕金森病（PD）小鼠模型的神经保护作用.方法： 用MPTP建立C57BL小鼠PD模型，在MPTP前给予肌苷，通过行为学检测（自主活动计数、Rotarod检测、游泳实验）、免疫组织化学和荧光分光光度法，观察肌苷对PD小鼠模型的行为学表现、黑质多巴胺（DA）神经元和纹状体酪氨酸羟化酶免疫反应阳性（THir）神经纤维以及纹状体DA水平的影响.结果： 给予MPTP后，小鼠行为学计数降低，自主活动计数、Rotarod检测、游泳实验分别降低约45％、43％和22％，黑质DA神经元数目减少约58％，纹状体THir神经纤维密度减低，纹状体DA水平明显降低约88％，提前给予肌苷后降低程度减轻，自主活动计数、Rotarod检测、游泳实验降低程度分别约为5％、11％和12％，黑质DA神经元数目减少约43％，纹状体DA水平降低约71％，两组相比有显著性差异（P＜001）.结论： 肌苷对MPTP所致的C57BL小鼠的神经损伤具有保护作用.
【关键词】 肌苷；1甲基4苯基1，2，3，6四氢吡啶；帕金森病；神经保护药；小鼠
0引言
帕金森病（Parkinsons disease，PD）是一种临床常见的神经系统退变性疾病，是中老年人常见的致残疾患之一.目前所知，其主要是由于黑质多巴胺（Dopamine，DA）能神经元坏死、凋亡，细胞数目减少，使黑质－纹状体通路DA释放减少，出现多巴胺乙酰胆碱失衡，患者出现静止性震颤、肌张力增高、运动减少等一系列症状，严重影响患者的生活质量.研究显示PD的发病与遗传和环境等多种因素相关，1甲基4苯基1、2、3、6四氢吡啶（1methyl4phenyl1，2，3，6tetrahydropyridine，MPTP）可以导致人类及灵长类、小鼠等多种动物产生PD样症状，为PD研究提供了新的途径.肌苷（inosine，INO）是腺嘌呤核苷和核苷酸代谢的中间产物之一，临床上长期作为能量营养剂用于多种疾病如肝脏和心血管疾病的辅助治疗.近期研究发现，肌苷在神经系统的损伤与修复中也具有重要的营养和保护作用.本研究利用常用的MPTP致C57BL小鼠PD模型，探讨肌苷在PD中的神经保护作用.
1材料和方法
11动物和分组8 wk龄雄性C57BL小鼠（第四军医大学实验动物中心提供），体质量25～27 g，安静环境饲养，自由取食饮水，人工昼夜节律（12～12 h）.将动物随机分为3组： 生理盐水组（Saline组）；MPTP组；肌苷+MPTP组（INO+ MPTP组），每组10只.第1~3日INO+MPTP组给予肌苷60 mg/kg ip 1次/d，Saline组、MPTP组给予等量生理盐水ip 1次/d，第4~10日INO+MPTP组给予肌苷60 mg/kg ip，30 min后MPTP 30 mg/kg ip 1次/d，MPTP组给予等量生理盐水ip 30 min后MPTP 30 mg/kg ip 1次/d，Saline组给予等量生理盐水ip 1次/d.
12试剂和仪器MPTP，INO和DA标准品为Sigma公司产品，小鼠抗酪氨酸羟化酶（TH）单克隆抗体，生物素化兔抗小鼠二抗，ABC试剂盒为Calbiochem公司产品，其余试剂为国产分析纯.用001 mol/L盐酸将DA配制成100 mg/L，保存于0～2℃，使用前用001 mol/L盐酸稀释配制成标准应用液2 mg/L.酸化正丁醇： 100 mL正丁醇中加入0085 mL浓盐酸；1/15 mol/L磷酸盐缓冲液（pH 72）： KH2PO4 035 g和Na2HPO4・12H2O 145 g溶于975 mL去离子水中，用10 mol/L NaOH或H3PO4调至pH 72，最后定容到100 mL；01 mol/L碘试剂： KI 1 g溶于重蒸馏水后加入I2 025 g，再加重蒸馏水至20 mL，贮于棕色瓶中，避光保存；碱性亚硫酸钠： 025 g亚硫酸钠（Na2SO3）溶于5 mol/L NaOH 9 mL中，再加水1 mL混匀，临用前配制；01 mol/L EDTA溶液（pH 70）： EDTA2Na.2H2O 0371 g溶于95 mL 乙酸钠（1 mol/L）中，用10 mol/L NaOH调pH 70，最后用乙酸钠（1 mol/L）溶液加到10 mL，贮存于冰箱备用.UGO BASILE 7750型Rotarod仪，岛津RF5000荧光分光光度仪.
13行为学检测在停药后第3日，进行下述行为学检测.
131自主活动计数参照Kawai H［1］的测试方法，自制30 cm×30 cm×15 cm的有机玻璃盒，底部刻出6 cm×6 cm的格子，在安静、光线较暗的环境中检测.小鼠适应环境10 min后，计数5 min内小鼠移动的格子数，连续测5次取平均值.
132Rotarod检测Rotarod实验需要动物在滚轴上保持平衡并连续运动，是广泛采用的检测运动协调性的实验.滚轴直径6 cm，转速20 r/min，连续测20次取平均值.
133游泳实验参照Donnan GA［2］的测试方法，将受试小鼠放入一个20 cm×30 cm×20 cm规格的有机玻璃水箱中，水深10 cm，水温为22～25℃.评分标准如下： 在1 min内能连续不断游泳者记30分；大部分时间游泳仅偶尔漂浮者记25分；漂浮时间占整个受试时间 50％以上者记20分；偶尔游泳者记15分；偶尔用后肢游动并漂浮在水箱一边者记10分.检测5次取平均值.
14黑质及纹状体免疫组织化学检测行为学检测后，每组取5只小鼠行黑质及纹状体免疫组织化学检测.5 g/L戊巴比妥钠1 mL腹腔麻醉后，开胸经主动脉先以9 g/L生理盐水15 mL冲洗血液，再用含40 g/L多聚甲醛的01 mol/L的磷酸缓冲液（PBS，pH 72）100 mL先快后慢灌注固定1 h灌毕立即取脑，在含300 g/L蔗糖的PBS内过夜（4 ℃）至组织沉底.参考小鼠脑图谱，在恒冷箱（－22℃）行中脑黑质和纹状体冠状切片，片厚30 μm，收集于001 mol/L磷酸盐缓冲液（PBS， pH 72）内.免疫组织化学染色步骤如下： 3 mL/L过氧化氢甲醇溶液（300 mL过氧化氢1 mL+甲醇80 mL+ PBS 19 mL）30 min，3 g/LTriton X100的PBS 30 min，浸入小鼠抗TH单克隆抗体（1∶3000）孵育48 h（4℃），浸入生物素化兔抗小鼠二抗（1∶500）孵育2 h（室温），浸入ABC复合物（1∶500）孵育2 h（室温），蒸馏水快速冲洗后硫酸镍胺加强DAB蓝色反应法显色20～30 min，当阳性产物呈深蓝色而背底清晰时蒸馏水冲洗3次终止显色.以上步骤每步后均需001 mol/L PBS清洗3次，每次10 min.其中一抗用含10 mL/L小牛血清和3 g/L的Triton X100的PBS稀释，二抗和ABC复合物用PBS稀释.贴片，脱水，透明，中性树胶封片.每只小鼠黑质取头端、中部、尾端切片3张，取大脑脚中点上方区域，在200×高倍镜下计数TH免疫反应阳性（THir）神经元个数，取平均数.
15纹状体DA水平检测在行为学检测后，每组取5只行纹状体DA水平荧光分光光度法检测.将小鼠迅速断头、取脑，放入预冷的生理盐水中，去除脑膜和血液，滤纸吸干水分，在冰皿上剥离纹状体，称质量后置于含有少量冰冷的酸化正丁醇的匀浆器中，在冰水浴中制成匀浆，转移至具塞刻度离心管内，并用酸化正丁醇补充至3 mL，按以下步骤测DA浓度： 匀浆液振荡1 min，离心（2500 r/min）5 min，上清液15 mL + 1/15 mol/L磷酸盐缓冲液（pH 72）15 mL，振荡1 min，离心5 min，水相05 mL + EDTA溶液04 mL混合，加碘试剂02 mL混合、静置，准确反应2 min，加碱性亚硫酸钠05 mL混合、静置，准确反应2 min，加6 mol/L乙酸06 mL，沸水浴20 min，冷却后检测荧光强度（波长： 激发光320 nm，发射光370 nm）.每批实验均需空白管和标准管.空白管： 取001 mol/L盐酸02 mL，用酸化正丁醇补充至3 mL，其余操作同样品管.标准管： 取标准应用液02 mL，用酸化正丁醇补充至3 mL，其余操作同样品管.
统计学处理： 实验结果采用x±s表示，SPSS100统计软件行单因素方差分析和SNKq组间两两比较，P＜005为有统计学意义.
2结果
21小鼠给予MPTP后的一般表现小鼠在给予MPTP后3～5 min，出现震颤、运动减少、弓背、后肢张开、步态不稳、竖尾、竖毛等改变，个别出现癫痫样发作，约30～60 min后上述症状逐渐减轻，24 h后基本恢复正常，但随着给药次数的增加，急性反应表现反倒减轻，但24 h后其运动减少、肢体僵硬、步态不稳、反应迟缓的表现越来越明显.
22行为学检测结果见Tab 1，MPTP组出现小鼠行为学计数降低，自主活动计数、Rotarod检测、游泳实验分别降低约45％、43％和22％，提前给予肌苷的INO+MPTP组降低程度减轻，自主活动计数、Rotarod检测、游泳实验降低程度分别约为5％、11％和12％，与MPTP组相比，自主活动计数和Rotarod检测（P＜001)以及游泳实验（P＜005）具有显著性差异.
表1MPTP和肌苷对小鼠行为学的影响 略
图1Saline，MPTP和INO+MPTP组小鼠的黑质THir神经元数目 略
图2Saline组、MPTP组和INO+MPTP组小鼠的黑质THir神经元及纹状体THir神经纤维 略
23黑质及纹状体免疫组织化学检测结果见Fig 1，2.MPTP组与Saline组相比，黑质THir神经元数目明显减少约58％，残留神经元皱缩，突起减少或消失，纹状体THir神经纤维密度减低，提前给予肌苷后黑质THir神经元数目减少约43％，与MPTP组相比有显著性差异（P＜001）.
24纹状体DA水平检测结果见Fig 3.MPTP组与Saline组相比，纹状体DA水平明显降低约88％，而INO+MPTP组提前给予肌苷后降低程度约为71％，与MPTP组相比有显著性差异（P＜001）.
图3Saline，MPTP和INO+MPTP组小鼠的纹状体DA水平 略
3讨论
MPTP的神经毒性作用发现于20世纪80年代，它能导致人类及多种动物出现PD样症状.MPTP进入细胞内以后，被位于线粒体外膜的单胺氧化酶B催化生成甲基－苯基吡啶离子（MPP+），释放到细胞外间隙，被临近的DA能神经元轴突末梢通过突触前膜DA转运体摄取，并逆向运输至神经元胞体，被线粒体主动摄取而浓集，特异性抑制氧化呼吸链复合体I和电子传递，减少ATP生成，造成DA能神经元ATP耗竭，并且通过促进反应氧族和过量一氧化氮的生成而发挥毒性作用，对DA能神经元造成选择性的损伤而出现坏死和凋亡.MPTP的神经毒性作用已在多种动物中得到证实，包括灵长类、小鼠、大鼠、猫、猪和金鱼等.在接受MPTP的小鼠和灵长类脑内黑质DA能神经元大量死亡，纹状体TH阳性纤维大量丧失，纹状体DA及其代谢产物DOPAC、HVA水平均明显降低，也有黑质纹状体小胶质细胞和星形细胞的增生和蓝斑、下丘脑等区的损伤，与PD患者的改变基本相同.MPTP对C57BL小鼠作用明确，是目前最常用的PD动物模型之一.
肌苷是临床常用的能量营养剂，在体内肌苷的生成有两条途径： 腺嘌呤核苷酸在腺苷酸酶的催化下生成腺苷，腺苷在腺苷脱氨酶作用下生成肌苷；或者腺嘌呤核苷酸在嘌呤脱氨酶催化下生成次黄嘌呤核苷酸，再经核苷酸酶去磷酸并加一分子水后生成肌苷.肌苷的分解则通过核苷磷酸化酶生成次黄嘌呤和1－磷酸核糖，次黄嘌呤在黄嘌呤氧化酶催化下经黄嘌呤生成代谢终产物尿酸.1－磷酸核糖在磷酸核糖变位酶的作用下转变为5－磷酸核糖，其在磷酸核糖焦磷酸合成酶催化下生成磷酸核糖焦磷酸（PRPP），PRPP参加嘌呤核苷酸的从头合成途径；次黄嘌呤则与PRPP生成次黄嘌呤核苷酸，参加嘌呤核苷酸的补救合成途径.生成5磷酸核糖后，还可以通过磷酸戊糖通路在无氧糖酵解时产生ATP（3分子肌苷可产生8个分子的ATP），由此肌苷可以参加ATP的生成和其他腺嘌呤核苷酸的代谢过程.
研究发现，肌苷不仅仅增加ATP生成，参加能量代谢，而且在神经系统的损伤和修复中也具有重要的营养和调节作用.Litsky ML等使用鱼藤酮抑制呼吸链，对培养的鼠胚脊髓细胞进行损伤，当给予肌苷后发现明显提高神经元的存活率和正常形态细胞比例，并表现出浓度依赖性 ［3］.肌苷对硫酸锌诱导的体外培养PC12细胞的损伤也可以增加细胞存活率，维持细胞正常形态，具有直接的保护作用 ［4］.除了对神经元的直接保护作用之外，肌苷还可以促进神经突起的生长，恢复神经突触的功能.Benowitz LI等人发现肌苷可促进体外培养的金鱼和幼鼠视网膜神经节细胞轴突的生长，伴有促进轴突再生相关基因如生长相关蛋白GAP43，E587Ag，Neurolin，细胞黏附分子L1和Tα1的表达［5，6］.在体内实验中，将成年大鼠锥体交叉平面以上的一侧皮质脊髓束切断，于对侧大脑皮质感觉运动区用微泵将肌苷持续注入，结果发现未损伤侧皮质锥体细胞的轴突侧支大量出芽，并生长到损伤侧已溃变的颈髓白质中，形成新的突触和神经通路，免疫组织化学证明损伤区有大量的GAP43蛋白表达［7］.同样，在阻断一侧大脑中动脉的大鼠半侧脑皮层缺血模型，通过微泵将肌苷持续注入枕大池或者侧脑室，结果发现与Saline组相比，虽然梗死区域大小无差别，但未损伤侧皮质红核束和皮质脊髓束均有明显的再生轴突侧支生长进入损伤侧，伴有高水平的GAP43蛋白表达，同时观察到大鼠瘫痪侧上肢运动功能有明显恢复［8］.最近研究表明，在成年大鼠视神经横断以及移植自体外周神经，给予ip肌苷，则轴突切断的视网膜神经节细胞存活数增加，以及在移植的外周神经内出现明显增加的视网膜神经节细胞再生轴突［9，10］.
本研究结果显示，肌苷对MPTP致帕金森病小鼠模型也具有神经保护作用.肌苷的作用可能通过以下机制： ① 增加ATP的生成，减轻MPTP抑制线粒体呼吸链后造成的能量耗竭，提高黑质DA神经元存活率；② 肌苷可能通过抑制核蛋白聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（PARP）从而减少受损细胞内ATP的消耗，防止能量耗竭，同时PARP的活性被肌苷抑制后还可阻止一氧化氮合酶的作用过程，减少一氧化氮合成，结果使过亚硝酸盐生成减少，保护细胞的膜性结构，减轻MPTP的神经毒性［4］；③ 肌苷可以升高神经元内Bcl2水平，而Bcl2可抑制MPTP诱导的神经元凋亡，阻止细胞的坏死过程［4］.④ 肌苷降解形成尿酸，而尿酸可以保护神经元防止缺氧损伤，清除过亚硝酸盐和氧自由基［11，12］；⑤ 肌苷可以通过细胞膜易化扩散进入神经元内，促进神经细胞突起的生长，恢复损伤的突触功能，可能的机制包括激活胞内的蛋白激酶N；催化生成cAMP，cAMP作为第二信使参与神经突起的生长；抑制多种抑制性因子，如激动Gi蛋白的髓鞘相关糖蛋白等，从而促进细胞突起的生长，保留残存神经元的突触功能［4，5］.本研究中提前给予肌苷后，MPTP对C57BL小鼠黑质DA能神经元的损伤减轻，纹状体的THir神经纤维得以保存，纹状体DA浓度降低程度减轻，是行为学检测反映的PD症状较轻的病理基础.通过本研究证实了肌苷对MPTP致帕金森病小鼠模型的神经保护作用，为肌苷应用于帕金森病的预防提供了实验依据，为进一步深入研究神经组织保护机制和治疗帕金森病奠定了基础.
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动物行为学研究范文第8篇
【摘要】 目的：探讨柴胡疏肝散对慢性应激抑郁模型大鼠行为学及血浆促肾上腺皮质激素释放激素（corticotropin releasing hormone，CRH）和促肾上腺皮质激素（adrenocorticotropic hormone，ACTH）浓度的影响。方法：40只雄性SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、氟西汀组及柴胡疏肝散组。采用慢性轻度不可预见性应激加孤养复制大鼠抑郁模型（4周）。所有大鼠在造模第15天开始灌胃，分别灌服等体积生理盐水（空白对照组、模型组）或氟西汀（1.8 mg/kg）及柴胡疏肝散（5.9 g/kg）药液，连续2周。选用敞箱实验得分和液体消耗量等指标评价各组大鼠行为学改变，采用放射免疫法检测各组血浆CRH和ACTH浓度。结果：与空白对照组比，模型组大鼠体质量增加缓慢，敞箱实验中的水平运动、垂直运动得分、清洁动作次数显著减少，中央格停留时间显著延长，糖水消耗明显下降，纯水消耗显著增多，血浆CRH和ACTH浓度增高， 差异有统计学意义（P＜0.05）。柴胡疏肝散组大鼠抑郁样行为显著改善，血浆CRH和ACTH浓度较模型组显著降低，差异有统计学意义（P＜0.01）。结论：慢性轻度不可预见性应激可使大鼠行为及神经内分泌发生异常改变，引起抑郁；柴胡疏肝散可调节慢性应激引起的HPA轴功能亢进，具有抗抑郁作用。
【关键词】 柴胡疏肝散; 抑郁; 慢性应激; 神经行为学表现; 促肾上腺皮质激素释放激素; 促肾上腺皮质激素; 大鼠
Objective: To investigate the effects of Chaihu Shugan San (CHSGS)， a compound traditional Chinese herbal medicine， on behavior and plasma levels of corticotropin releasing hormone (CRH) and adrenocorticotropic hormone (ACTH) of rats with chronic mild unpredicted stress depression.
Methods: Forty male SpragueDawley rats were randomly pided into 4 groups: normal control group， untreated group， fluoxetine group and CHSGS group. Except the normal control group， rats were singly housed and exposed to an unpredicted sequence of mild stressor for continuous 4 weeks to induce depression. Since the fifteenth day， rats were intragastrically administered with equal volume agents respectively for 2 weeks ［normal saline for the normal control group and the untreated group， fluoxetine (1.8 mg/kg) for the fluoxetine group and CHSGS (5.9 g/kg) for the CHSGS group］. Behavioral scores of rats were detected by openfield test and sucrose preference test， and the plasma levels of CRH and ACTH in different groups were detected by radioimmunoassay.
Results: Compared with the normal control group， body weights of the rats in the untreated group were significantly decreased. Scores of crossing， rears and grooming in openfield test were reduced significantly. Pure water consumption in sucrose preference test was increased significantly. The levels of plasma CRH and ACTH were significantly increased. The depressive behaviors of the rats were improved significantly and the levels of plasma CRH and ACTH were obviously reduced in the CHSGS group.
Conclusion: Chronic mild unpredicted mild stress can affect the neuroendocrine and behavior and cause depression in rats. CHSGS can regulate HPA hyperactivity of rats caused by chronic stress and has antidepressive effects.
Keywords: Chaihu Shugan San; depression; chronic stress; neurobehavioral manifestations; corticotropin releasing hormone; adrenocorticotropic hormone; rats
抑郁症是最常见的心境障碍，普通人群中抑郁症的年发病率约为200/10万，且发病率呈逐年上升趋势。据世界卫生组织估计，2020年抑郁症将成为第二大疾病［1］。抑郁症属中医学郁病范畴，运用中医辨证论治治疗抑郁症具有明显优势。中医证候临床流行病学调查显示，肝郁气滞证为抑郁症最常见的证候类型，居各证之首［2］。柴胡疏肝散是治疗肝郁气滞证最具代表性的经典方之一，全方具有疏肝行气、活血止痛的功效。临床研究表明柴胡疏肝散治疗抑郁症具有良好的效果［3，4］。慢性应激可以引起人类及动物的下丘脑垂体肾上腺皮质（hypothalamicpituitaryadrenocortical，HPA）轴功能亢进，且出现抑郁状态［5］。本实验通过采用慢性轻度不可预见性应激与孤养相结合的方法，研究柴胡疏肝散对慢性应激抑郁模型大鼠行为及促肾上腺皮质激素释放激素（corticotropin releasing hormone，CRH）和促肾上腺皮质激素（adrenocorticotropic hormone，ACTH）的影响，旨在探讨柴胡疏肝散抗抑郁的作用机制。
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 实验动物 筛选行为学指标相近的SD雄性成年大鼠40只，体质量（200±20）g，由中南大学实验动物学部提供，合格证号为SCXX(湘)4343232。自由饮食，光/暗周期为12 h/12 h(光照时间6∶00～18∶00)，背景噪音（40±10）dB，温度（20±3）℃。
1.1.2 主要药物及试剂 柴胡疏肝散处方及方中各组成中药剂量按中华人民共和国药典2005年版一部常规用量（柴胡9 g、陈皮9 g、川芎9 g、香附9 g、枳壳9 g、芍药15 g、甘草5 g），药材均由湘雅医院药剂科统一购买，饮片经专家鉴定，符合药典一部要求。煎煮、浓缩、真空干燥，制成干膏，每克含生药量8 g，用时配制成1.0 g/mL的药液。由湘雅医院药剂科制剂室负责完成。盐酸氟西汀胶囊，由礼来苏州制药有限公司提供，20 mg/粒，批准文号为国药准字J20080016。CRH和ACTH放射免疫分析试剂盒，由上海泛柯生物科技有限公司提供。
1.1.3 主要仪器 低温高速离心机，美国Sigma公司生产；GC911γ放射免疫计数器，中国科技大学实业总公司生产；自制敞箱。
1.2 实验方法
1.2.1 动物分组 实验前用敞箱实验（openfield test， OFT）法对每只大鼠进行行为学评分，选择各项行为学指标得分相近的40只大鼠，适应环境饲养1周后，随机分为空白对照组、模型组、氟西汀组和柴胡疏肝散组，每组10只。组间体质量及OFT评分比较，差异无统计学意义。
1.2.2 模型复制及灌胃 空白对照组大鼠正常条件饲养，其余各组用于造模，参照文献方法［6，7］并加以改进。每笼1只孤养，共接受28 d随机的应激，包括电击足底（电流强度10 mA，每隔1分钟刺激1次，每次持续10 s，共30次）、冰水游泳（4 ℃，5 min）、热应激（45 ℃，5 min）、摇晃（1次/s，15 min）、夹尾（1 min）、禁水（24 h）、禁食（48 h）和昼夜颠倒等刺激，每日给予1种刺激，使大鼠不能预料刺激的发生，以避免发生适应性。空白对照组、模型组灌服等体积蒸馏水，每天1次，连续14 d；柴胡疏肝散组大鼠灌服柴胡疏肝散药液，剂量为生药5.9 g/kg（临床用量按体表面积折算），每天1次，连续14 d；氟西汀组灌服氟西汀药液，剂量为1.8 mg/kg，为70 kg成人常规临床用药的等效量，每天1次，连续14 d治疗。各组灌胃时间均为慢性应激第15天至造模结束当天上午9∶00，连续灌胃14 d。
1.2.3 行为学观察
1.2.3.1 体质量观察 分别于实验第0、15和29天称取大鼠体质量。
1.2.3.2 敞箱实验 参照文献方法［8］并改进，分别于实验第0、15和29天进行3次。实验所用的敞箱装置由木材制成，底面为100 cm×100 cm的正方形且被等分为25个等边方格，周围为高40 cm的木墙，内由黑色漆料涂满。上午7∶00～9∶00之间在安静的房间内进行敞箱实验。将大鼠放入中心方格内，固定数码摄影机于敞箱上方（以排除人为干扰因素），自动记录3 min内大鼠在中央格的停留时间、穿越格数（四爪均进入的方格才记数，为水平运动得分）、后肢直立次数（两前爪腾空或攀附墙壁，为垂直运动得分）、清洁运动记数。彻底清洁敞箱后再进行下一次观察。
1.2.3.3 液体消耗实验 参照文献方法［6］，实验在安静的房间内，在每次敞箱实验前72 h进行。在第一个24 h，每笼同时放置两个水瓶，两瓶均装有1％蔗糖水；第二个24 h，一瓶装1%蔗糖水，一瓶装纯水；禁食禁水24 h后，进行基础消耗和纯水消耗实验，同时给予每只大鼠事先定量好的两瓶水，一瓶1%蔗糖水，一瓶纯水。60 min后，取两瓶水定量，计算大鼠的总液体消耗、糖水消耗和纯水消耗量。
1.2.4 标本采集及指标测定 实验第29天，将所有大鼠颈椎迅速脱臼，然后开胸从左心房抽取5 mL血，2 mL注入含30 μL 10% EDTA·Na2和20 μL抑肽酶的试管中(待测ACTH)，另外3 mL注入含肝素钠40 μL的试管中（待测CRH），混匀，4 ℃下3 000 r/min离心10 min，分离血浆，移至一新Ep管内，置于－70 ℃低温冰箱中保存。测定均严格按照试剂盒说明书进行操作。
1.3 统计学方法 计量资料数据用x±s表示，同一指标不同时间点比较采用重复测量的方差分析，两组间比较用最小显著差异法，所有资料采用SPSS 15.0统计软件完成。检验水准α=0.05。
2 结果
2.1 造模前及治疗前后各组大鼠行为学及体质量 各组动物在造模前行为学指标及体质量组间比较，差异均无统计学意义（P＞0.05），具有可比性，见表1。各组大鼠经过14 d的轻度不可预见性应激后，均有不同程度的抑郁样改变。敞箱实验中模型组、氟西汀组及柴胡疏肝散组水平得分、垂直得分显著降低，中央格停留时间明显增加，糖水消耗减少，体质量增加缓慢，与空白对照组比，差异有统计学意义（P＜0.05，P＜0.01）。各组大鼠经过14 d的灌胃处理后，氟西汀组、柴胡疏肝散组大鼠的抑郁样行为得到显著改善，敞箱实验中氟西汀组及柴胡疏肝散组水平得分、垂直得分显著提高，中央格停留时间明显缩短，糖水消耗增加，体质量增加明显，与模型组相比，差异有统计学意义（P＜0.05，P＜0.01）。
表1 造模前及治疗前后各组大鼠行为学及体质量（略）
Table 1 Behaviors and body weight before duplicating model and pretherapy and posttherapy in rats
GHSGS: Chaihu Shugan San. *P＜0.05， **P＜0.01， vs normal control group; P＜0.01， vs untreated group.
2.2 治疗后各组大鼠血浆CRH及ACTH浓度比较 治疗后各组血浆CRH和ACTH含量比较，差异有统计学意义（P
表2 治疗后各组大鼠血浆CRH和ACTH比较（略）
Table 2 Comparison of the levels of CRH and ACTH in plasma in posttreatment rats
GHSGS: Chaihu Shugan San. **P＜0.01， vs normal control group; P＜0.01， vs untreated group.
3 讨论
抑郁症的年发病率呈逐年上升趋势，已成为威胁人类健康的第四大疾病，属中医“郁证”、“癫”的范畴。多由情志不舒，肝气郁结而引起五脏气机不和。《证治汇补·郁证》说：“郁病虽多，皆因气不周流，法当顺气为先……”指出郁证初病体实，病变以气滞为主，病位多在肝；七情内伤久郁，始而伤气，继必及血；治疗以疏通气机为原则。柴胡疏肝散始载于明·张介宾《景岳全书·古方八阵》卷五十六，是治肝郁气滞证的代表方之一。方中柴胡、枳壳、香附和陈皮疏肝解郁，理气畅中；川芎、白芍和甘草活血定痛，柔肝缓急。肝气郁结日久，由气分累及血分，血行不畅而致血瘀。方中配伍活血化瘀之品，能加强理气药行气解郁之功效。临床研究表明柴胡疏肝散治疗抑郁症具有良好的效果［9］。
慢性轻度不可预见应激模型是目前国内外通用的抑郁动物模型，该模型不仅可模拟抑郁症的核心症状，即兴趣丧失，缺乏，运动能力、探索行为能力及性行为能力等下降；同时存在HPA轴的亢奋，其抑郁状态持续时间长，符合实验研究的要求。该模型目前已被国内外学者广泛应用于抑郁症的发病及抗抑郁药作用机制研究［6，8，10］。本实验选择28 d的慢性应激加孤养复制抑郁大鼠模型，实验中可见模型组大鼠体质量增加减慢，敞箱实验中水平得分、垂直得分及清洁次数均较空白对照组明显减少，中央格停留时间延长，糖水消耗量降低，提示模型组动物食欲减退，活动能力下降，兴趣丧失，缺乏。经过抗抑郁剂氟西汀治疗后上述症状明显改善，证明大鼠抑郁模型复制成功。
应激导致HPA轴被激活，肾上腺分泌的糖皮质激素有利于机体度过短期恶劣环境。但若机体长期处于应激状态，HPA轴功能持续亢进，必将严重影响机体健康，使机体出现抑郁症状［5］。研究显示，抑郁症患者血浆ACTH和CRH浓度均升高，而经抗抑郁治疗后，随着抑郁程度的缓解两者浓度下降［11］。海马是HPA轴应激反应的高位调节中枢，海马内含有较高密度的糖皮质激素受体，长期过量的糖皮质激素使海马神经元萎缩死亡，而海马神经元的损害将打断正常应激反应时海马对HPA轴的抑制作用而形成恶性循环［5］。本实验提示，模型组大鼠血浆CRH和ACTH含量较空白对照组显著升高，表明应激可导致HPA轴功能的紊乱。
针对抑郁症常见病证特征，本研究选用柴胡疏肝散处理慢性应激抑郁模型大鼠，结果显示柴胡疏肝散能够显著增加慢性应激抑郁大鼠体质量，增加其在敞箱实验中的水平运动、垂直运动得分和清洁动作次数，减少中央格停留时间，显著提高糖水消耗，而且使抑郁模型大鼠血浆CRH和ACTH含量趋于正常。这为柴胡疏肝散治疗抑郁症提供了药效学依据，我们将继续研究柴胡疏肝散对抑郁模型大鼠海马神经元的发生及超微结构的影响，从而探讨柴胡疏肝散的抗抑郁作用机制。
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