病毒样本
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病毒样本范文第1篇
天花病毒“死灰复燃”危机？
全球消灭了天花病毒之后，世界各地的一些实验室还保留了一些以研究为目的的天花病毒，用于研究流行性疾病的治疗方法和开发病毒疫苗等。然而在1978年，天花病毒开始出现死灰复燃的危险。伯明翰大学医学院的一位摄影师珍妮特・帕克，一开始感觉头痛和肌肉疼痛，多日后全身出现红点，医生诊断为无害皮疹。然而两个星期后，一些异常症状开始出现，医生再次诊断为天花。虽然她接受了隔离治疗，但两周后仍然不幸去世。她母亲也被感染，但最终活了下来。
帕克之所以被感染，有可能是楼下实验室里研究人员保存的天花病毒样本通过通风管道进入了她的办公室里。伯明翰大学医学微生物学部门的负责人亨利・贝德森为帕克的不幸深感内疚，在帕克去世几天前自杀。
这种令人沉痛的一系列事件的发生，引发了人们对保留天花病毒研究的重新思考。人们意识到，我们需要完全灭绝病毒，而不仅仅只是消灭这种疾病。这一事件让人们认识到保存在实验室试管中和小瓶子里的天花病毒样本是一个严重隐患。
世界卫生组织呼吁要求所有样本病毒，要么摧毁，要么送到两个存放地之一：美国亚特兰大的疾病预防控制中心实验室，或俄罗斯西伯利亚的国家病毒和生物技术研究中心。少量的样品很快从印度、日本、英国和其他地方被送过去。美国疾控中心根除天花计划负责人迈克尔・莱恩说：“显然，没有人希望病毒留在实验室里，他们毅然决然地放弃了这些东西。”
其他地方还有天花病毒吗？
那么，我们又如何知道其他地方还有没有天花病毒残余呢？例如，在的藏身之处是否藏有天花病毒样本？或者，在某个被遗忘的冷库里是否留有天花病毒小瓶子？莱恩说：“我们不知道，我们没有办法证明这些消息的可靠性。”
不过，看起来天花样本已被限制在美国疾控中心和俄罗斯西伯利亚的病毒研究中心了。因为据专家们所知，自20世纪70年代末以来再没有人感染天花，没有站出来声称他们拥有天花病毒，也没有关于天花病毒被保存在一些秘密实验室里的传言。
但是，1992年，叛逃到美国的一名曾任苏联生物战机构副主任的俄罗斯军官称，苏联制造了50吨天花病毒，并有3万人从事天花和其他致病病毒武器的研究制造工作，如埃博拉、炭疽病和瘟疫等。
有人认为，天花病毒被开发成生物武器和进行工业规模生产并非不可能。但其他一些人，包括莱恩在内，对那位俄罗斯军官的指称持怀疑态度。莱恩说：“我们没有充分理由相信这种制造紧张气氛、耸人听闻的消息。”
天花病毒的最终命运会如何？
美国和俄罗斯存留的天花病毒最终的命运将是被彻底消灭。
2014年夏，在世界卫生组织大会上投票表决是否要销毁剩下的天花病毒样本时，俄罗斯代表团投票反对。俄罗斯并不是唯一想保留天花病毒的国家。
一些科学家提出，对复杂的病毒基因做更多的研究，可有助于设计出更有效的抗病毒药物，病毒样本的存在至关重要。
持异议者认为，大部分病毒研究可以用毒性较小的牛痘病毒或其他相关病毒来做。他们担心，如果没有彻底销毁天花病毒，谁又能保证它不会落入坏人之手呢？事实上，即使病毒被彻底销毁，现有的实验室技术也有可能根据已被测序的天花基因组重建天花病毒。
病毒样本范文第2篇
【关键词】手足口病 流行特征
中图分类号：R181.8文献标识码：B文章编号：1005-0515（2011）12-344-01
手、足、口腔部位出现皮疹为特征的大量患者，根据临床表现，流行病学调查及实验室检测结果，证实为手足口病流行，我们对615名患者进行了调查，现将调查情况报告如下：
1 对象与方法
采用统一的个案调查表对所有病例进行流行病学个案调查，同时对临床表现较典型、未用过任何治疗药物的初诊病例进行样品采集。采集静脉血5ml，分离血清-20℃保存备用；用一次性塑料便盒采集新鲜粪便10g左右，做病毒分离；采集咽拭子置于装有3ml 5%肉汤保存液的螺口试管内做病毒分离。病毒分离由疾病预防控制中心完成。
2 结果
2.1 临床表现：通过对615例患者的调查发现，临床症状有低热者占36.50%、手足口同时有皮疹者占67.50%。病程大部分在7-10天左右，所有病例经过对症治疗，均已痊愈，无重症病例。
2.2 流行病学调查
2.2.1 发病地区分布：615例患者中除1例来自陕西府谷县外，其余病例均为本地户籍；其中准旗475例，东胜89例，伊旗33例，达旗9例，杭锦旗7例，鄂旗1例。经过调查，开始发病的几例患儿发病无明显的流行病学关联，病例均无明显的暴露史，整个流行过程历时2个多月，疫情波及到16所学校，18个幼儿园和部分居民。
2.2.2 年龄分布：615例患者中，最小年龄3个月，最大年龄55岁，病例主要分布在1-14岁之间，以5岁以下幼儿发病为主，共计538例，占发病总数的87.48%。见图1
2.2.3 性别分布：615例患者中，男365例，女250例。
2.2.4 职业分布：散居儿童378例，幼托儿童160例，学生67例，农民6例，家务及待业3例，工人1例。
2.2.5 时间分布：该次疫情从2007年5月27日首例病例出现后，病例呈快速上升趋势，流行高峰主要集中在6月中旬，共计发病260例，占病例总数的42.28%。以后呈缓慢下降趋势，通过采取以切断传播途径为主的综合性预防措施后，疫情得到了控制，呈逐渐下降趋势，到2007年7月31日后，再无新病例出现。见图2
2.3 实验室检测：共采集粪便样本23份，咽拭子样本6份，经疾病预防控制中心病毒分离，23份粪便样本中检测出肠道病毒阳性株19株，6份咽拭子样本中检测出肠道病毒阳性株1株，病毒检出率为68.97%。将阳性毒株进一步送国家脊灰实验室做肠道病毒型别鉴定，有9株为肠道病毒71型，8株为埃可病毒6型，1株为柯萨奇A病毒16型，2株为柯萨奇B病毒4型。
3 讨论
手足口病是由肠道病毒引起的一种婴幼儿常见传染病，可引起手足口病的肠道病毒有多种，最常见的为柯萨奇病毒A16型和EV71型。台湾报道的13万例手足口病患者中，EV71和CA16是主要病原。但从本次所采集的29份样本中检测出9株为肠道病毒71型，8株为埃可病毒6型，1株为柯萨奇A病毒16型，2株为柯萨奇B病毒4型，这与以往有关报道不同。
本次调查的615例患者中，手、足及口同时有皮疹者占67.50%,且发病年龄主要集中在2-5岁之间，与其它文献报道一致。
病毒样本范文第3篇
皖南休宁县五城镇，自古以来是有名大镇，依山傍水，商贾繁忙。
34岁的农民许丽枝住在金勾树村，此地离五城镇只有五公里。2005年11月15日，许丽枝头疼发热四天不愈后，前往五城镇的中心卫生院就医。许丽枝和她的家人绝没有想到，她此去再也没有能够回家。
许丽枝的病诊治相当及时。五城中心卫生院获知她食用过病鸡，且临床表现类似重感冒，立即诊断为“不明原因肺炎”，并向县卫生部门上报。11月16日，休宁县和黄山市的医生均来到五城对许丽枝进行诊治。很快，许丽枝的血样和气管分泌物也送到了合肥的安徽省疾控中心，后又送到位于北京的中国疾控中心。
21日，许丽枝被检测出H5N1禽流感病毒核酸阳性，已经得到北京的确认。
22日下午1点，她停止了呼吸。
许丽枝成为中国第三名被确诊的高致病性禽流感患者（下称人禽流感）。
中国正式宣布首例人禽流感患者确诊是在11月16日，当时的确诊患者有两人――湖南湘潭9岁男孩贺俊尧和安徽枞阳24岁的女性周毛娅。
谁是“首例”
11月16日，就在两例高致病性禽流感患者确诊之际，人们难以忘却另一名疑似患者――12岁的湖南女孩贺茵。一个月前的10月17日，家中有大量病禽且曾食用过病鸭的贺茵死于“不明原因肺炎”。她的弟弟随后出现同样的临床症状，不得不入院诊治。贺茵之弟正是贺俊尧。
因为缺乏确切的实验室检测证据，贺茵之死虽很可能是感染了高致病性禽流感，但已经不能确诊。
“没有一个地方愿意成为首例人禽流感病例发现地。”中国疾控中心一位资深研究人员直言，“但总要有第一例，必须面对现实。”
世界上出现人禽流感早在2003年，至今确诊患者已逾百人，死亡人数高达60多人。不过，在今年10月以前，人禽流感对中国人来说还只是“域外新闻”。尽管早有禽流感发生且在2004年有大量禽流感爆发，中国并没有确诊的人禽流感病例。
在10月下旬湖南湘潭禽流感疫情公之于众之后，贺茵和贺俊尧的病源曾一度成为媒体关注焦点。《财经》还在10月下旬的现场采访中发现了另一名可疑病例，即湖南湘潭县易俗河镇山塘村教师宋湘波（参见《财经》2005年第22期“湖南疫区：贺茵之死”）。
贺家姐弟是否感染了人禽流感？最初的答案是否定的。卫生部应急办公室主任陈贤义10月28日宣布，贺家姐弟“实验室检测结果为阴性”，因此中国“没有出现人感染高致病性禽流感的病例”。
或许只有以严格的医学语言辨析，才能听出陈贤义言中所留出的余地。因为尽管检测结果为阴性，但陈并未明言贺家姐弟已经排除禽流感。在这里，“排除”是关键性用语。
一周以后的11月6日，一个星期日，卫生部发言人宣布三例病例“不能排除人感染H5N1禽流感的可能”。三例之中，包括了贺家姐弟之外的另一名可疑病人宋湘波。
11月15日，卫生部疾病控制司司长齐小秋表示，从临床和流行病学方面看，湖南肺炎病人与禽流感病例“相当地相关”。
16日晚10时，卫生部正式宣布了中国湖南和安徽的两例人禽流感患者，并对贺茵之死做出进一步解释。“第一步”跨出来了。
科学无情
有一个事实令局外人一直不解――何以贺家姐弟的检测如此一波三折？
时下坊间充满了关于当局曾有意“隐瞒”的推测。不过据《财经》了解，实际情况要复杂得多。确诊禽流感具有高度敏感性，也是一个科学严谨的过程。国家卫生部门科学工作者和主管官员的责任感与实事求是的态度，最终起了决定性作用。
根据国家流感中心检测标准，对人禽流感确诊实验方法有四种，即禽H5 病毒核酸检测、病毒分离及鉴定、疑似病例的血清学检测、微量中和试验；其所需样本、实验条件及操作方法均不相同（参见“人禽流感确诊的实验室过程”）。
通常情况下，病毒核酸检测（也称病毒检测）可以较快确定阳性病例，但该项检测对样本的要求非常高，所需咽、鼻拭子或含漱液要求在发病的开始几天采集，采集部位也非常重要；使用急性期血清也可行，但样本必须在发病后七天内采集。
“然后你必须在抵达实验室之前保持样本冷冻。”世界卫生组织传染病预警与反应协调员霍居里（Julie Hall）说，而且“必须尽快做实验”；“如果在到达实验室前的任何环节出现问题，样本都有可能失去病毒介质（viral material），从而使可能是阳性的病人漏诊。”
据了解，贺茵只有10月16日采集的血清样本一份；贺俊尧及宋湘波则各有咽拭子（即气管分泌物）及血清样本一份。这些样本被分作两批，递交给湖南省疾控中心和国家CDC。知情人士透露，当时样本的质量很不理想，例如，贺茵的血清样本还不到5毫升，根本不敷使用；而贺俊尧与宋湘波咽拭子的抽取时间和部位都有问题。卫生部齐小秋司长后来在谈到相关样本时，也承认提取时间和方式的遗憾。
样本一旦缺憾，则最初的检测出现阴性可能性很大。但此时的阴性不意味着排除人禽流感。进一步检测是必须的。
然而，贺茵在死亡后立即被火化，未及取出肺组织样本；而对贺俊尧进行进一步检测需要时间。事实上，正是进一步检测显示贺俊尧的血清出现“可疑阳性”。最后的可靠的办法是微量中和实验，亦即将病人在发病初和痊愈后的双份血清进行对比，以了解其中抗体有否大量增加。双血清的时距应为两到四周。这一切，当然就使确诊大大推迟了。
无论如何，所有的当事人还是选择了尊重科学。11月11日，贺俊尧的微量中和实验有了结果，H5N1阳性得到确认。
因为提高了警觉而且有了更严谨的方式，周毛娅的诊断过程较为简单。据《财经》了解，周发病于11月1日，11月7日因重症肺炎入住铜陵市人民医院，当天医院便采集了呼吸道分泌物。样本提取后被分为两份，一份交由安徽省疾病预防控制中心（下称安徽省疾控中心），一份交由中国疾控中心。因样本质量非常好，早在省里即检测出阳性结果。最后的确诊任务落在中国疾控中心身上。
11月10日，中国疾控中心病毒病预防控制所（下称中国疾控中心病毒所）对周的样本PCR检测同样给出阳性结论。随后，以国家流感中心主任舒跃龙为首的专家排列出病毒的部分基因序列，同时在病毒所内的P3实验室进行了病毒分离培养实验。24小时后，病毒分离培养实验完成，用于实验的鸡胚上出现大量H5N1病毒，显示结果阳性。
11月11傍晚，病毒所专家又用分离培养出来的大量病毒，测试得出病毒全部基因序列，与H5N1病毒基因序列完全吻合。
与此同时，中国疾控中心病毒所专家与北京大学医学院专家于11月11日赴铜陵，对周毛娅进行了尸检，并提取了肺组织样本。回京后，专家针对周肺组织样本再次进行了PCR实验及病毒分离实验，得出完全相同的结果。
“肺组织标本的结果是最铁证如山的。”一位病毒研究专家向《财经》表示。
诊断标准
然而，两次实验的确诊结果并未在11月12日对外公布。个中原因相当微妙。
11月11日前后，经中国卫生部邀请，两队世卫专家人员陆续抵京。一队流行病学专家将前去湖南实地考察，一队病毒研究专家则在京协助中国卫生部确认实验结果。后者由美国CDC首席流感专家南希考克斯、香港卫生署病毒研究专家Wilima Lim组成。
按照世界卫生组织标准，有流行病学接触史和临床表现，经任何一种实验方法检测呈阳性，便可确诊为人禽流感。
但中国公布的人禽流感确诊标准更为严格。根据卫生部于今年8月公布的《人禽流感诊断方案（2005版）》，有流行病学接触史和临床表现，从患者呼吸道分泌物标本中分离出特定病毒或采用PCR法检测到禽流感H亚型病毒，且发病初期和康复期双份血清抗禽流感病毒抗体滴度四倍或以上升高者，方可确诊。
如果恪守这一标准，在急性期死亡的贺茵和周毛娅无法提取到恢复期血清，也就无法进行确诊所必须的抗体实验。此外，由于安徽枞阳并无家禽出现H5N1禽流感的疫情报告，周毛娅的流行病学接触史亦成疑问。
知情人告诉《财经》，11月15日晚，农业部、卫生部与世界卫生组织专家就最终确诊一事讨论至深夜。其间，有官员甚至提出，可将已发现病例确定为“高度疑似禽流感病例”。
最后，仍然是科学求实精神占了上风，世卫专家和中国卫生部门的一些专家均认为，以程序严格的实验室检查结果进行确诊，应是确切无疑。
最终，贺茵未被列为确诊病例，周毛娅与贺俊尧则被宣布中国内地首次发现的人感染禽流感病例。宋湘波的情况则未提及。
卫生部发言人11月6日表示，宋湘波的H5N1禽流感相关检测结果为阴性，但不排除禽流感。接近CDC病毒所的有关专家告诉《财经》，此后该所曾对宋湘波做过一次病毒检测，结果为可疑阳性。具有决定意义的微量中和试验也在进行中。但由于宋湘波发病较晚，提取其恢复期最佳血清样本的时间也较晚。目前，宋氏的这一实验结果尚未正式公布。
11月23日，卫生部和国家中医药管理局对《人禽流感诊疗方案（2005版）》重新修订，相应放宽了诊断标准（参见“人禽流感诊断标准”）。
人禽两条线
确诊结果相继公布。安徽两名女子先后因禽流感死亡，引起人们极大困惑。
这是因为，无论周毛娅所在的安徽枞阳周潭镇永兴村严潭庄，还是许丽枝所在的安徽休宁山斗乡金勾树村，都没有确诊家禽中的禽流感。
更有甚者，枞阳属安庆市，休宁属黄山市，两地以山水相隔，距离有百余公里。这两个地区历史上均未出现过禽流感，而且距此次爆出疫情的安徽淮南与天长也相距甚远。
周毛娅确诊禽流感后，数十名记者云集长江之滨的枞阳县，探究的重点之一，就是当地究竟是否发生过禽流感疫情。枞阳当地坚决否认，并指出周毛娅所在的村庄虽曾有死禽，但总数字不足3％，远逊于“高致病”禽流感引起大片死亡的惨状。事后的检测，也并未在当地家禽中发现H5N1疫情。
枞阳官方曾据此推断，周毛娅的传染病接触史或源于外出打工，或源于候鸟。但因周打工返家已有20多天才发病，而候鸟直接感染一位农妇的几率无论如何较漏诊病鸡为低，则是专家们的普遍看法。
至11月23日，卫生部通报安徽休宁出现另一例人禽流感病例。人们在查看了休宁县所在地理位置后，不无疑惑地问：“难道又是候鸟？”
休宁患者许丽枝所在的金勾树村距公路不过两三公里。该村只有20多户人家，养家禽232只。在许丽枝病故前，死鸡仅10只，不包括村民自行宰杀的3只。有关当局已认定休宁并未出现禽流感疫情。《财经》在采访时发现，当地农民对于许丽枝的不幸已经家喻户晓，但并不感到惊慌。24日晚守卫在金勾树村外防止外人进入的乡镇干部未穿防护衣，地面上也没有石灰线。与记者去过的湖北、安徽其他禽流感疫区大不相同。
世卫组织与疾控专家将前往安徽，准备对两起传染源不明的人禽流感病例进行流行病学调查。
尽管现在有媒体渲染周、许“感染之谜”，但专家们认为其传染源不会过于神秘。专家们普遍认为，周毛娅与许丽枝的染病与其生前密切接触携有H5N1的家禽相关，其死前曾宰杀准备食用的病禽即是证明。相关家禽在感染后并未立即毒发身亡，传染各方，形成具杀伤力的爆发性疫情，只表明高致病性禽流感疫情从感染、流行到爆发是个过程，因外部条件不同或病毒的基因差异，可能有不同的表现形式，出现漏诊。同时，周、许一者正在怀孕，一者体质较弱，遂在接触中感染了禽流感。
周、许两病例只是表明，人禽流感发生与禽流感疫情的大规模爆发未必同步发生，人禽疫情由于不同的监测报告系统，并不一定按逻辑先后而显现。
事实上，在其他国家也发生过类似的情况。去年2月18日，泰国疾控中心公布20名疑似病例，其中一名两岁的女孩所在的省份过往并无禽流感相关疾病发生，仅女孩家少量鸡只在女孩发病前七天死去。泰国农业部在接获通知后，方始对该地区的动物疾病展开调查。
世卫组织驻泰国代表处负责接待媒体的官员阿帕拉告诉《财经》记者，泰国所有的确诊病人最终都能追溯到和病禽的接触史。而越南更是首先发现报告了人感染可疑不明原因肺炎（后确诊为H5N1病毒感染），后证实动物首发疫情。
专家们提出，现实挑战显示，公共卫生防控部门监控人禽流感的难度已经增加，责任也更加重大。事实上，安徽的两个病例的确诊之所以比较快，主要原因是当地医院警觉性高，及时上报，病人无论治疗和取样检验都更为及时。此外，现阶段人禽流感主要在农村发生，相应的防治条件和卫生水平都较差。政府构建基层卫生防疫体系、推进农村医疗卫生事业发展的任务也更迫切了。
“提高农村养鸡卫生水平非常重要。人禽流感目前毕竟是偶发。而综合分析世界上已有的一百多例病人，人禽流感主要还是接触传染，特别是接触病鸡的粪、毛、血和内脏。应当在这方面特别注意。”中国工程院院士、著名流行病专家庄辉说，他并不主张农民吃病鸡，但同时认为，因食用煮熟的鸡患病的可能性很小。
有限人传人
三名确诊人禽流感的出现，使中国成为继越南、泰国、印尼之后第四个出现人禽流感的国家。
到目前为止，这三例病人系属“偶发”。因为H5N1主要是感染禽类，其H5基因在理论上并不能为人体细胞所吸收，H5N1感染人都属于偶然现象。退一步说，纵使由于禽流感的普遍，这种“偶然”的概率增大，人与人之间的横向传染目前还不存在。科学家虽然推断H5N1的基因通过变异，最终会成为威胁人类的致命病毒,但这种变异目前尚未完成。
然而，国际科研人员的调查研究显示，形势并不容乐观。
美国CDC在最近一期“急性传染病”（Emerging Infectious Disease）月刊（11月号）上刊登了一封由该中心、世界卫生组织及东南亚等国家的有关专家共同调研撰写的致编辑的信――“H5N1禽流感的家庭聚发”（Family Clustering of Avian Influenza A (H5N1)），显示人传人事实上已经在小范围内发生。
科学家将家庭聚发定义为家庭成员中有两人以上被实验室确诊为感染H5N1，或是两人以上出现严重肺炎或因呼吸道疾病死亡，其中至少有一人确诊。
研究人员调查了自去年1月至今年7月东南亚主要禽流感爆发国家的病例，这期间共有109名病例报告给世界卫生组织。研究人员对这些病例的研究发现，共有15起符合定义的家庭聚发，其中11起在越南，聚发的规模在2至5人之间；有9 起出现在同一个家庭中，2人以上为实验室确诊。
对这些家庭聚发的研究还很有限。科研人员认为，出现这些家庭聚发应该还不是人际间相互传播的结果，而是可能共同接触了病死家禽；或是在某些国家，有食用未经烹煮的禽类血的习惯。
研究人员还发现，2004年12月至2005年7月发生的家庭聚发，比之前一年发生的日均比例略有上升，但并没有和病例总数同比例上升。但是，死亡比例有明显的下降――2003年12月至2004年11月，死亡率为73％；而在2004年12月至2005年7月之间，死亡率降至35％，至少回落了50％。
这个情况被研究人员认为是一个值得担忧和仔细监控的流行病学变化，因为它可能暗示病毒正在朝着适应人体的方向变异，导致死亡率降低。国内一位不愿透露姓名的病毒专家向《财经》表示，如果病毒在短时间内将人杀死，其人际传播能力就非常有限。周和许的病例都是急性死亡。
家庭聚发的研究人员指出，到目前为止，尚无H5N1和人流感病毒发生重组的证据。但建议从确诊病人身上分离出的病毒应尽快测出其基因序列，以与之前分离出的病毒进行比较，看是否发生了变异。
11月23日，新华社援引越南中央卫生与流行病研究院公布的一项最新研究报告称，H5N1型禽流感病毒基因出现了轻微变异，虽然其毒性有所下降，但变得更易向人类传播。
至于中国确诊病例身上测出的病毒基因序列与越南、泰国等地的病毒相比，是否有较大的差异或变异，世卫组织驻华代表贝汉卫说，由于中国实验结果出来未久，目前尚未进行相关的研究对比，而且也有待于中国提供样本的共享。
科学的探索还在继续中。无论如何，H5N1的威胁已经逼近，成为中国和世界必须共同面对的严酷现实了。
本刊记者凌华薇对此文亦有贡献
人禽流感确诊的实验室过程
根据中国流感中心检测标准，对人禽流感确诊实验方法有四种：禽H5 病毒核酸检测；病毒分离及鉴定；疑似病例的血清学检测，亦即血凝抑制；微量中和试验，亦即双份血清对比实验。四种方法所需样本、实验条件及操作方法均不相同。
禽H5病毒核酸检测法使用PCR检测技术。PCR是最快捷、最有效的检测方法，可在24小时内得出检测报告。在PCR检测呈阳性前提下，运用基因技术，还可迅速检测出H5N1病毒的基因序列，为确诊人禽流感提供充足的实验室证据。
对患者急性期样本的另一种常用检测方法，是病毒分离及鉴定实验。这一实验方法是从病体咽拭子样本中分离病毒并植入鸡胚中（即未完全孵化但已成形的小鸡）或进行细胞培养。由于鸡胚对H5N1病毒具有特殊敏感性，病毒会在鸡胚内迅速繁殖。
血凝抑制相对基因技术是一种比较传统的实验方法。它可以通过检测病体样本中的抗原体，测试到禽流感病毒。这一测试的最佳取样时间为发病后的两到四周。血凝抑制方法一般只能确定病毒的H亚型，无法检测到N亚型，通常需要三四天的时间。
微量中和试验与血凝抑制实验的原理基本相同，都是针对抗体的检测。但微量中和试验，主要是双份血清的对比；即患者发病初期的血清与恢复期血清进行对比，如果后者出现高于四倍的H5N1抗体，则表明患者得了高致病性禽流感。
鉴于微量中和试验需要病毒培养和双份血清，故所需时间也较长。专家表示，微量中和试验是国际公认的最后一种权威检测。如果前述几种实验都未查出阳性，微量中和试验是最后一道关。当然，因为双份血清的要求，这种检测只适用于能够治愈的病人。
除上述外，对怀疑因禽流感死亡的患者，肺组织样本检验也相当可靠。
本刊记者根据专家采访整理
人禽流感诊断标准异同
11月23日，卫生部和国家中医药管理局对《人禽流感诊疗方案（2005版）》进行了重新修订。
在修订版中，对人禽流感的确诊标准为：“流行病学接触史和临床表现，从患者呼吸道分泌物标本或相关组织标本中分离出特定病毒，或采用其它方法，禽流感病毒亚型特异抗原或核酸检查阳性，或发病初期和恢复期双份血清禽流感病毒亚型毒株抗体滴度4倍或以上升高者。”
这一标准与原标准最大的不同，在于将几种实验方法之间的“且”字改为了“或”字。这意味着，在流行病学接触史和临床表现的前提下，通过任何一种实验方法呈阳性便可确诊人禽流感。
除却放宽了确诊标准，新标准还补充规定，在“流行病学史不详的情况下，根据临床表现、辅助检查和实验室检查结果，特别是从患者呼吸道分泌物或相关组织标本中分离出特定病毒，或采用其它方法，禽流感病毒亚型特异抗原或核酸检查阳性，或发病初期和恢复期双份血清禽流感病毒亚型毒株抗体滴度四倍或以上升高，可以诊断确诊病例。”
这一标准的修改与补充，显然与周毛娅病例的确诊过程关系密切。一方面，如按原标准，对急性期死亡的周毛娅，不可能再提取到恢复期血清，也无法进行抗体实验，是无法确诊的。但是实际上，PCR和病毒分离实验提供的实验室证据，已充分证明周毛娅感染了H5N1禽流感病毒。修改后的确诊标准解决了这一矛盾，并与WHO的诊断标准接轨。另一方面，补充标准特别规定，流行病学史不详的情况下也可以根据临床表现和实验室证据确诊。
但是，修订后的诊疗方案在对疑似病例的定义上并没有实质性的变化，除了要有流行病学接触史和临床表现，仍要有呼吸道分泌物或相关组织标本甲型流感病毒M1或NP抗原检测阳性或编码它们的核酸检测阳性者。对相关组织标本甲型流感病毒M1或NP抗原的检测，实质上是针对病毒所进行的蛋白检测方法。
蛋白的检测法是一种常见的针对普通流感病毒的检测法。它可初步确诊感染流感病毒，却无法确诊禽流感。而编码它们的核酸检测，指的就是确诊禽流感的方法之一――PCR核算检测法。如是，比照世界卫生组织及其他一些国家，如泰国、越南的标准，中国的疑似标准属偏严。
另外，修订版本的人禽流感诊断标准中，在疑似病例和确诊病例增加了一个新项：“临床诊断病例”。这项内容规定：“被诊断为疑似病例，但无法进一步取得临床检验标本或实验室检查证据，而与其有共同接触史的人被诊断为确诊病例，并能够排除其它诊断者。”按照新的诊断标准，12岁女孩贺茵可被定性为“临床诊断病例”。当然，这与确诊病例仍有不同。
病毒样本范文第4篇
【关键词】丙型肝炎病毒；核心抗原；核酸检测
【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484（2013）03-0595-01
丙型肝炎主要经过血液传播，是一种严重的经血传播疾病，目前没有较好的预防和治疗方法。我国是丙型肝炎感染大国，在一般人群中，丙型肝炎病毒感染率达3.2%。我国献血法规定，对献血者必须进行HCV检测，目前多数血站筛查献血者是否感染HCV采用不同厂家试剂两遍检测抗-HCV。酶免疫法检测抗-HCV窗口期长（大约70天），而HCV感染者在发病前12天即可具有传染性[1]。酶免法检测HCV C抗原可缩短HCV窗口期至15天[2]，是否适合献血者大量筛查，我们对此进行了分析。
1 材料和方法
1.1 样本 从本血站2012年6月至12月无偿献血者中抽选酶免法抗-HCV初检、复检均阳性样本56份，抗-HCV初检、复检均为阴性样本780份，仅抗-HCV初检或仅复检阳性样本11份，灰区样本（初检或复检有一次灰区或初复检均灰区，灰区=cut off×0.8）17份，共计864份样本。
1.2 试剂和仪器 抗-HCV初检试剂为上海科华生物工程股份有限公司提供，批号201207041等；抗-HCV复检试剂，英科新创（厦门）科技有限公司提供，批号2012065815等；HCV CAg检测试剂，湖南康润药业有限公司提供，批号20121001；深圳爱康Uranus AE200全自动酶标仪；美国ABI7300型基因扩增仪，试剂由深圳凯杰生物工程有限公司提供，批号20121101。
1.3 方法 献血者血清标本经抗-HCV ELISA试剂初、复检后，将所需标本分装并置-80℃条件下存放，确保被检标本仅冻融一次。864份样本均检测HCV C抗原。将抗-HCV初检、复检均阳性和仅初检或复检阳性及灰区血清标本共84份样本同时进行HCV C抗原和HCV RT-PCR检测。具体操作方法和结果判断，严格按照说明书要求进行，记录检测结果。
2 结果
2.1 780份抗-HCV初检、复检均合格的献血者样本中，ELISA检测HCV C抗原结果均为阴性（780/780）。
2.2 56份抗-HCV初检、复检均阳性的献血者样本中，HCV c抗原检测阳性样本16份，HCV PCR检测阳性样本17份。仅抗-HCV初检或仅复检阳性11份样本中，HCV c抗原检测阳性样本1份，HCV PCR检测阳性样本1份。抗-HCV检测结果灰区样本17份中，HCV c抗原检测阳性样本3份，HCV PCR检测阳性样本4份。见附表1。
检测结果采用x2检验，P>0.05，84份样本中HCV C抗原酶免疫法检出阳性率与HCV PCR方法阳性检出率无显著性差别。两种方法检出阳性符合率达90%以上。
3 讨论
卫生部的《血站技术操作规程》【2012】中明确要求，献血者丙型肝炎病毒（HCV）感染标志物及其检测方法有2种选择，可任选其中1种：1）采用2个不同生产厂家的ELISA试剂检测HCV抗体或联合检测HCV抗原和抗体；2）采用1种ELISA试剂检测HCV抗体或联合检测HCV抗原和抗体，采用1种试剂检测HCV核酸。大多数血站目前广泛选用的检测方法是采用2个不同生产厂家的ELISA试剂检测HCV抗体，抗HCV试剂因不同生产厂家所用抗原片段及抗原质量不同，试剂的灵敏度和特异性存在一定差异，从而导致抗-HCV检测结果的不一致。ELISA检测抗-HCV窗口期长，可出现漏检和假阳性情况[3]。应用PCR方法检测HCV特异性强，灵敏度高，是HCV感染辅助确证技术之一，但该方法要求条件高，操作复杂，需具备较高的设备、设施及技术条件，检测费用也高，易出现假阳性和假阴性，并不适合基层血站对献血者大规模筛查。本实验结果显示与检测抗HCV相比，ELISA方法检测HCV C抗原具有较高的特异性（780/780）；对抗-HCV初检和复检均阳性、仅初检或复检阳性、检测结果灰区等84份血清标本，ELISA方法检测HCV C抗原的检测结果（20/84）与HCV PCR方法结果（22/84）相比，阳性检出率无显著性差异，具有较好的灵敏度。
HCV核心抗原是HCV感染者体内早期标志物，几乎与HCV-RNA同时出现，在感染早期15天即可检出。比较而言，基层血站目前已具备ELISA检测设备、技术条件，不需要更多投入，适合采用ELISA法抗HCV和HCV C抗原联合检测。ELISA方法检测HCV C抗原快速、便捷，方法上适合基层血站开展对献血者样本大规模筛查，可提高献血者HCV感染检出率。
另外，ELISA HCV C抗原检测有利于HCV感染者早期发现，特别是对免疫低下患者。由于输血后丙肝引起的医疗纠纷不断增多，已引起各级医院的关注[4]，基层医院对输血患者开展输血前HCV C抗原检测有利于HCV感染者的早期发现，减少输血纠纷。
参考文献：
[1] 田庚善.病毒性疾病[A].见：方昕.现代内科学[M]，上卷.北京：人民军医出版社，1996.761-783
[2] 龙润乡，等.丙型肝炎病毒三种标志物的稳定性[J].中国生物制品学杂志，2009，22（5）：468-469
病毒样本范文第5篇
【关键词】FQ-PCR；HBV DNA；乳汁
【中图分类号】R446.62 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484（2014）02-0760-01
我国是乙型肝炎的高流行区，人群乙型肝炎病毒（HBV）携带率高达10%～20%，超过1.2亿，其中40%～50%通过母婴传播[1-2]，母乳含有丰富的营养成分和免疫物质.是婴儿成长最理想的营养品。若母乳HBV-DNA阳性.采取退乳及人工喂养已成为共识[3]。然而，乳汁组成复杂，富含脂肪、蛋白质及乳糖[4]，且乳汁为浑浊非匀相液体，与血清不同，因而适用于血清标本中HBV-DNA检测的方法是否适用于乳汁标本有待探讨。目前国内尚无标准化的乳汁中HBV-DNA检测程序，各学者采用的研究方法和结果不尽相同。建立标准化的乳汁中HBV-DNA检测方法势在必行。本研究仅从乳汁成分对实时荧光定量检测HBV-DNA的影响及HBV-DNA在乳汁中分布情况着手，以期为乳汁中HBV-DNA检测标准方法的建立提供依据。
1 材料与方法
1.1材料
1.1.1 材料收集 分娩24h内的初乳采自2013年1月1日至12月31日在本院产科病房分娩的产妇，其血清HBsAg阳性，血清中HBV DNA拷贝数大于1.0×103IU/mL，谷草转氨酶及谷丙转氨酶均小于40U/L，共52例，平均年龄25.6岁，平均孕龄38周。用温水清洗，然后轻轻挤出初乳约1.5～2.5mL，置于无菌塑料管中，-20℃保存。标本的采集与保存按照本实验室相应标准操作程序（SOP）进行。患者没有失代偿的肝病或肝癌，未检测到HAV、HCV、HDV、HEV和HIV，并已排除酒精性、药物性、中毒性肝炎、脂肪肝、自身免疫性肝病、代谢性肝病。每份标本同时用两种提取法提取HBV DNA模板后，进行HBV DNA实时荧光定量PCR （ FQ - PCR）检测。
1.1.2 仪器及试剂 仪器为美国ABI公司7500 Real Time PCR System检测仪。运行计算机软件为Roche Molecular Biochemicals Light-Cycler Software（Version 3.5.3）。血清HBV DNA检测试剂盒来自上海克隆生物高技术有限公司[国食药监械（准）字2009第3400437号]，生产批号20130501，试剂盒的检出限为5×102IU/ml。DNA标准品为试剂盒中所带的定量标准品，室内质控血清由卫生部临床检验中心提供。本实验室为卫生部临床检验中心技术认可的临床基因扩增检验实验室。
1.2 方法
1.2.1 DNA模板制备
方法I（上清液） 先取冰箱过夜后的乳汁800μL于一个无菌Eppendorf离心管（Ep管）中；然后4℃，15 000 r/min离心10 min，去除脂肪层，取中问层上清液100μL，加入100μL DNA提取液。
方法II（上清液浓缩） 取经过方法I处理的中间层上清液100μL，接着加等量试剂盒自带浓缩液，充分混合，然后4℃。15 000 r/min离心10 min，弃上清液，最后加入100μLDNA提取液。
方法Ⅲ（沉淀） 去除冰箱过夜后的乳汁上层的乳酪，取中层乳汁100μL于一个无菌Ep管中，4℃，15 000 r/min离心10 min。弃上清液，加入100μL DNA提取液。
1.2.2 扩增 扩增反应条件为50℃反应2分钟，然后94℃保温5分钟，再按93℃30秒60℃90秒（循环40次）。60℃采集FAM荧光通道的信号。
1.2.3 检测结果的解释 扩增运行程序完成后，按仪器及软件要求进行结果保存和数据分析。除检测标本外，本实验设有阳性血清对照、弱阳性血清对照、阴性对照、室内质控品以及4 个定量校准品。定量检测线性范围为103～107IU/ ml，如果增长曲线不呈S型曲线或Ct值=40，则判定样品的HBV DNA含量小于检测极限。
1.3 数据统计与分析 采用SPSS 17.0软件进行数据处理，统计学方法采用χ2检验，经分析，差异有统计学意义（P
2 结果
3种前处理方法对52份乳汁标本检测结果比较见表1。统计分析表明，方法Ⅲ与其他2种方法比较，其检测阳性率差异有统计学意义（均P
3 讨论
母乳中适于婴儿生长发育的各种营养物质及多种抗病物质是其他人工配方食品不可比拟的，应该大力倡导母乳喂养。然而由于许多传染病可通过哺乳传播，有报道30% ～50%慢性乙肝携带者是由母婴传播的，其原因也包含了哺乳途径，通常新生儿在接种乙肝疫苗6个月后体内的抗体才能达到有效浓度，12个月后乙肝表面抗体的阳转率才达到85%以上，仍有9% ～10%的婴幼儿对疫苗不产生抗体，对乙肝病毒无免疫力，消化道若有黏膜损伤，在母乳喂养期间极易导致感染，因而母乳的安全性是一个不容忽视的问题[5] 。目前，国内外大多临床实验室均采用实时荧光定量PCR检测HBV DNA，所用试剂对血清样本检测结果稳定可靠，但对乳汁样本检测重复性较差。主要是乳汁样本含大量脂肪颗粒，乳液均一性差，使得HBV DNA分布不均匀，由于产妇每天饮食的差异，故每次检测所取样本脂肪颗粒含量不可能完全一致，导致乳汁样本的病毒DNA检测结果不稳定。为提高乳汁样本病毒DNA检测稳定性和重复性，必须对乳汁样本进行合理的前处理，使得经处理的样本检测结果重复性、精密度都能提高到满足实验室质控需要，同时检测结果尽可能地接近真实值。乳汁样本不同的前处理方法，其可靠性、可操作性、经济性、实用性差别较大，因此有必要进行优化筛选[6，7]。
本研究对比了乳清和沉淀的DNA检测结果，发现沉淀的阳性率及DNA浓度均明显高于乳清，而乳清和浓缩乳清的结果没有显著差异。因此，对于乳汁的HBV DNA检测还是应该取沉淀进行检测，因为乳汁中病毒的存在形式可能不同于血清，病毒可能会存在于淋巴细胞内，或附着在细胞、大分子上，检测上清液可能会降低敏感性。通过以上实验研究，我们发现，对乳汁样本病毒DNA检测，样本处理很关键，样本前处理方法不同，检测结果相差很大，甚至有可能出现假阴性结果。因此，在进行乳汁样本检测病毒DNA时，一定要选择合适的前处理方法。
参考文献：
[1] 刘敏，钟清华，钟水娇.乙肝携带孕妇与新生儿乙肝标志物的表达形式及其胎儿宫内染感率分析[J].实验与检验医学，2012，30（5）：515-517.
[2] 曾艳梅，张思泉，娄国强，等.替比夫定阻断乙肝病毒官内感染的临床研究[J].中国I临床药理学与诊断学，2012，15（4）：443-445.
[3] 马庆海，杨文东.王秀艳.HBsAg阳性产妇血清与乳汁HBV-DNA载量分析[J].中华全科医学， 2011，9（10）：1616-1617.
[4] 韩立强，庞坤，刘爱清，等.郑州市妇女乳汁中营养及活性成分的测定[J].郑州大学学报（医学版），2010，45（1）：59-61.
[5] 刘晓红，宋来涛，杨 惠，等.某部队皮肤病情况调查[J].实用医药杂志，2010，27（1）：72 -73.
病毒样本范文第6篇
关键词：互联网；恶意流量；安全检测
全球规模最大的宽带互联网就是China Net，拥有超过40Tbit/s的骨干网流量，互联网每年都以60%速度增长，越来越重视互联网安全问题，逐渐凸显恶意流量网络安全问题，2013年，持续增加移动互联网恶意程序，传播恶意程序的互联网已经达到1296万次，互联网环境逐渐恶化，不完善的审核机制和能力差的检测技术，使恶意程序扩散，导致污染移动互联网上游环节，加速恶意程序发展速度，为了有效解决上述问题，本文主要分析了网络恶意流量检测技术。
1互联网恶意流量安全检测技术研究
1.1高效“僵木蠕”流量高速识别技术
1.1.1提取文件特征
分析的基本案例就是Android程序，一般来说，会对Android程序内部权限构成文件的特征向量进行提取，如，应用Android程序权限的时候，主要就是依据Android程序提出了134个划分权限列表特征，例如，读取手机短信、手机状态、读取通讯录、读取地理位置、读取通话记录、拦截普通短信、发送短信、修改系统设置、访问网络、结束后台程序、获得IMEI密码等。
1.1.2构造特征向量空间
构造特征向量空间的时候，可以把特征提出的Android程序描述串合理变为{0，1）取值向量。计算特征向量的时候，因为会占据很大空间，主要应用的形式是索引向量，如，依据特征索引方式来合理提取高危权限网络恶意程序特征。假设已知样本A，B以及病毒X提出特征数据结果分别是文件带有病毒X的提出特征描述串：
{READ_SMS，ACCESS_NETWORK_STATE，READ_CONTACTS，CALL_PHONE，WRITE_SMS）：
提出B文件样本特征描述串：
{WRITE_EXTERNAL_STORAGE，READ_MSM，ACCESS_NETWORK_STATE，READ_CONTACTS，CALL_PHONE，WRITE_SMS）；
提出A文件样本特征描述串：
{READ_PHONE_STATE，SEND_SMS，WRITE_EXTERNAL_STORAGE，READ_MSM，，WRITE_SMS）。病毒X和样本A，B向量基本形式为X00011111，B00111111，A11110001。病毒X以及样本A，B索引基本形式是X{3，4，5，6，7}，B{2，3，4，5，6，7），A{0，1，2，3，7}。
1.1.3快速聚类分析
最邻近样本特征向量以及每个样本特征向量之间具备比较大概率的同类文件，所以，需要在已知聚类样本中对新增样本邻近查询，合理计算最近邻近样本和新增样本之间距离，如果具备超过定阀值的最短距离会在邻近聚类中归纳新增样本，反之就建立新聚类。构造特征向量空间的时候，一般都是对原始向量取值为{0，1），所以，建立快速聚类分析的时候主要应用臭氧散列函数，是随机选择的一组D维向量特征中K维自向量，依据实际索引情况进行适当索引，原始向量对应的结果中适当选取0或1，形成子向量。每次计算一种随机向量结果的时候，就会出现与之对应的子向量K，如果具备相同的2个向量结果，属于同一聚类。依据上述实际情况对病毒X和样本A，B随机选择L为4的索引作为子向量，索引{4，5，7，8}，可以得到向量子集X是1111，向量子集B是1111，向量子集A是1001，可以发现X的最邻近是B，而不是A。因此，不再检测正常A文件，二次确认检查疑似恶意程序的B样本。
1.2自适应动态沙箱智能研判技术
国内外运行商首先提出处理网络疑似病毒的模型基于平行沙箱的智能研判模型，可以在一定程度上安全检测流量环境中的程序应用情况。基于此模型，建立了自然对数危险函数序列的深度等级量化智能研判技术，也就是说可以对安全等级进行判断，智能化分析未知恶意程序，计算未知恶意程序等级基本公式为：
K=Roundl{In[d×eα+w×eβ+j×eγ+a×eδ+m×eε]）
其中，α是多维度特征运算扫描结果，γ是自适应动态沙箱运算结果；β是扫描未知病毒结果，ε是扫描敏感字结果，δ是动态沙箱Android运算结果。上述值都属于[0，10]，四舍五入处理是Round{），保留1位小数。特征库映射以及计算恶意程危险函数序列之间关系如表1所示。
2互联网恶意流量安全检测技术应用
2.1系统设计架构
网络恶意流量检测系统包括集中管理模块、恶意程序处置模块、恶意程序分析模块、流量采集模块。设计系统结构的基本理念就是依据监测恶意程序引擎的方式来适当监测网络恶意流量，并以智能方式多重过滤和研究检测引擎依据上报恶意未知程序，健全网络流量恶意程序特征库，依据特征库实际情况建立恶意程序处理模块，CE路由器网络需要主动拦截以及预防恶意程序，系统可以研制和捕获典型网络恶意程序，统一和管理封堵，集中角度封堵资源等。设计此系统的时候，采集原始流量利用PI口，访问镜像用户互联网和流量数据的还原文件、重组报文等，检测恶意程序的时候合理应用恶意程序搜索引擎，对集中管理模块提供检测结果，系统核心就是集中管理模块，可以达到运行管理、恶意URL管理、警告管理、报表展示、管理特征库等功能，并且对处置模块输送合理的封堵策略。
2.2流量采集模块
流量采集模块根本作用就是可以收集网络中类似恶意程序的软件样本、传播地址源、行为特征以及受害用户信息，可以分析恶意软件。流量采集模块可以存在多种实现形式，包括检测业务平台异动方式、检测蜜罐被动方式、光路器选择方式、镜像方式、分光方式等。
2.3恶意程序分析模块
恶意程序分析模块应用根本作用实际上就是可以对镜像用户网络流量进行流量分析，获得RADIUS流量数据以及访问网络数据，合理连接集中管理模块，可以对结果进行上报，并且集中分配管理配置策略。
2.4恶意程序处置模块
恶意程序处置模块根本作用就是能够达到处置恶意程序的目的，依据查杀恶意执行程序的软件、阻断网络恶意软件传播源等方式阻断网络恶意传播行为和上下行流量网络恶意程序。处置恶意程序的时候需要单独应用物理接口，可以对管理信息进行传递。
2.5集中管理模块
集中管理模块根本作用就是可以为集中数据和分析数据提供基础，为系统运行提供分析和检测未知恶意程序基本功能，对下发病毒数据库和病毒统计信息进行收集，依据收集的实际信息来认定恶意软件，以此发现新软件，对恶意软件进行查杀，并且提出同步特征信息，为系统管理系统和分析报表等提供依据，为进一步研究和管理网络流量提供基础和保证。
病毒样本范文第7篇
【关键词】甲型H1N1流感病毒 暴发 输入性病例 二代病例
中图分类号：R181.8；511.7 文献标识码：A 文章编号：1005-0515（2012）3-330-03
流感病毒分为：甲型（A）、乙型（B）和丙型（C），甲型症状较严重，容易造成大流行；乙型症状较不严重，可造成大流行；丙型症状轻微，较少造成大流行。本次流感为一种新型呼吸道传染病，其病原为新甲型H1N1流感病毒，病毒基因中包含有猪流感，禽流感，人流感三种流感病毒的基因片段。甲型H1N1流感病毒属于正粘病毒科，甲型流感病毒属。典型病毒颗粒成球状，直径为80-120nm，有囊膜，囊膜上有许多放射状排列的突起糖蛋白，分别是红细胞血凝素（HA），神经氨酸酶（NA）和基质蛋白M2，病毒颗粒内为核衣壳，呈螺旋状对称，直径为10nm，为单股负链RNA病毒，基因组约为13.6kb，由大小不等的8个独立片段组成。病毒对乙醇，碘伏，碘酊等敏感，对热敏感，56℃ 30分钟可灭活。甲型H1N1流感潜伏期一般为1-7天，多为1-4天，通常表现为流感样症状，包括：发热，咳嗽，咽痛，咯痰，流涕，鼻塞，头痛，全身酸痛，乏力，部分病例出现呕吐和腹泻，可伴有眼部充血和扁桃体肿大，可发生肺炎等并发症，少数病例病情进展迅速，出现呼吸衰竭，多脏器功能不全或衰竭，患者原有的基础疾病亦可被诱发加重，呈现相应的临床表现，病情严重者可导致死亡。甲型H1N1流感患者为主要传染源，无症状感染者也具有传染性。甲型H1N1流感主要通过飞沫经呼吸道传播，也可通过口腔，鼻腔，眼睛等处粘膜直接或间接接触传播，接触患者的呼吸道分泌物，体液和被病毒污染的物品亦可能引起感染[1]。由于甲型H1N1流感病毒属于一种新型呼吸道传染病毒，人体不具有保护性抗体，因此人群普遍易感。本病传播迅速，常呈地方性流行或大流行。
1 对象与方法
1.1 研究对象
从2009年9月15日至10月15日某大学某学院发生的112名疑似甲型H1N1流感病例中随机抽取的35例疑似病例作为研究对象。
2 研究方法
2.1 抽样方法―分层抽样
分层抽样是指先将总体按某种特征分为若干次级总体(层)，然后再从每一层内进行单纯随机抽样，组成一个样本。该院分A、B、C、D四个系，从每个系中根据单纯随机抽样的方法抽取共35例疑似病例进行采样，获取标本并进行实验室检测。
2.2 实验室检测方法
按照国家卫生部出台的《甲型H1N1流感病毒实验室检测技术方案（试行）》[2]，应用real-time RT-PCR方法、RT-PCR方法、鸡胚分离方法等实验室检测方法对35例疑似病例的标本进行检测。
2.2.1 标本的采集
采集35例疑似病例的咽拭子标本，置于无菌采样夜2~3ml中，立即用冰块或冰排保存或置于4℃（冰箱），并马上送至实验室进行甲型H1N1流感病毒的病原学检测，避免反复冻融。将原始标本分为三份，一份用于核酸检测，一份用于病毒分离，一份保存待复核。如不能立即试验应保存在-70℃或-70℃以下，不应保存在-20℃。
2.2.2 核酸检测的材料及仪器
2.3 材料
RNA 提取试剂盒：QIAGen RNeasy Mini Kit
逆转录试剂盒：QIAGEN One step RT-PCR Kit
real-time RT-PCR试剂盒：Super ScriptIMⅢ Platirum One step Quantitative
RT-PCR System
RT-PCR试剂盒：QIAGEN One step RT-PCR Kit
2.4 仪器。
冷冻高速离心机、漩涡振荡器、实时荧光定量PCR仪、PCR仪、凝胶成像仪、电子天平（1/1000）
2.5 甲型H1N1流感病毒的核酸检测
基于PCR原理的核酸检测方法是一种快速有效的诊断方法，在突发传染病应急工作中发挥了巨大作用。PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物，PCR由变性、退火、延伸三个基本反应步骤构成。RT-PCR原理是以RNA 为模板经逆转录产生cDNA，再以cDNA为模板进行PCR 扩增以检测目的基因的表达情况。甲型H1N1流感病毒的核酸检测方法包括real-time RT-PCR方法和RT-PCR方法。
2.6 病毒RNA的提取
取咽拭子标本100ul置于1.5ml灭菌离心管中，采用QIAGen RNeasy Mini Kit操作说明提取RNA。取5ul总RNA进行逆转录，其余保存于-70℃。
2.7 real-time RT-PCR检测方法
real-time RT-PCR检测方法检测甲型H1N1流感是用一组寡核苷酸引物和双重标记的TaqMan®探针，对呼吸道样本或体外培养的甲型H1N1流感病毒进行定性检测鉴定。引物和探针序列为美国CDC设计，引物和探针序列如下表：
本实验在BSL―2实验室内进行，所有样本操作均在生物安全柜（BSC）内进行，遵循生物安全三级个人防护。
2.8 RT-PCR检测方法
RT-PCR检测方法的引物序列为国家流感中心设计，引物如下表：
RT-PCR产物的检测采用琼脂糖凝胶电泳技术，用2%的琼脂糖凝胶进行电泳，时间40min，用凝胶成像分析系统分析相应PCR产物的条带。本实验在BSL―2实验室内进行，所有样本操作均在生物安全柜（BSC）内进行，遵循生物安全三级个人防护。
2.9 甲型H1N1流感病毒的鸡胚分离法
甲型H1N1流感病毒的鸡胚分离方法的实验室生物安全级别为BSL-2，实验操作人员进行BSL-3级防护。
网络实验室在收到标本后24h内进行病毒接种。鸡胚分离方法是流感病毒分离方法之一。该方法是将100ul临床标本注入鸡胚羊膜腔，再取100ul临床标本注入鸡胚尿囊腔，在35℃下，进行甲型H1N1流感病毒的培养，2～3天后，获取鸡胚尿囊液和羊水，然后进行红细胞凝集实验和血凝抑制实验鉴定分离物。分离出的病毒株放于-70℃保存。
2.10 结果分析方法
配对设计资料的卡方检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。
3 结果
在35例甲型H1N1流感疑似病例中，利用real-time RT-PCR方法检测阳性26例，阳性率为74.29%；利用RT-PCR方法检测阳性24例，阳性率为68.57%；利用鸡胚分离法检出19例，检出率为54.29%；甲型H1N1流感确诊病例共27例（其中一例应用real-time RT-PCR方法检测为阴性，但应用鸡胚分离法可分离出病毒，所以应该是两种方法并联的结果），阳性率为77.14%；（见表1）
表1 三种检测方法的检测情况
利用样本检测资料对real-time RT-PCR检测方法与鸡胚分离法对确诊疾病的灵敏度有无差别进行统计学推断（见表2）。
表2 两种检验方法检验结果的比较
X2=4, P＜0.05，差异有统计学意义，可以认为两种检验方法的灵敏度有差别，鉴于real-time RT-PCR方法阳性率为74.29%，鸡胚分离法检出率为54.29%，可以认为real-time RT-PCR方法灵敏度高于鸡胚分离法灵敏度。
4 讨论
某大学某学院共有学生206名，2009年9月15日至10月15日该大学该学院发生112例甲型H1N1流感疑似病例，均表现有发热，咳嗽，咽痛，流涕，头痛，全身酸痛等症状。从112名甲型H1N1流感疑似病例中采用分层抽样的方法抽取35例，采集其咽拭子送往网络实验室分别运用real-time RT-PCR方法、RT-PCR方法、鸡胚分离法三种方法进行实验室检测。本次检测的35例标本中，运用real-time RT-PCR方法检测阳性26例，阳性率为74.29%；RT-PCR方法检测阳性24例，阳性率为68.57%，因此可知real-time RT-PCR方法比RT-PCR方法灵敏性稍高，可以检测出少量病毒RNA。利用样本检测资料（表2）对real-time RT-PCR检测方法与鸡胚分离法对确诊疾病的灵敏度有无差别进行统计学推断，检验方法为配对设计资料的X2检验，结果为X2=4, P＜0.05，差异有统计学意义，可以认为两种检验方法的灵敏度有差别，鉴于real-time RT-PCR方法阳性率为74.29%，鸡胚分离法检出率为54.29%，可以认为real-time RT-PCR方法灵敏度高于鸡胚分离法灵敏度。出现此现象的原因可能是由于：鸡胚分离法分离病毒可能对样本的要求较高，如样本保存过程中出现失误，造成样本中病毒死亡。病毒分离法可以诊断感染，但由于其耗时长，成本高，因此无法为临床诊断及时提供结果，在突发传染病应急工作中不常用，应用病毒分离法分离出的病毒常常为病例的确诊提供确切证据，病毒分离阴性并不能排除感。
甲型H1N1流感爆发是指1周内，在同一学校(或同一校区、高校同一学院)发现10例及以上聚集性急性呼吸道感染症状者，且其中至少有2例为甲型H1N1流感确诊病例，即判定学校出现甲型H1N1流感暴发疫情[3]。因此，可以判定此次甲型H1N1流感的发生属于暴发流行。本次疫情的暴发历时16天，传播较快，究其原因可能是与学生开学返校，集体生活引起聚集性群体性发病且无保护性抗体有关。此次甲型H1N1流感小范围暴发的首发病例是从Ⅹ市返校的ⅩⅩ同学，ⅩⅩ同学于9月13日返校，9月15日便出现发热（39.2℃），咳嗽，咽痛，头痛，全身酸痛等症状。在此二十多天内，同院便有112名同学有相同症状出现，多有明确接触史。
输入病例指在外地感染，回到本地后发病的病例。本起某大学甲型H1N1流感的首发病例ⅩⅩ为一例输入性病例。二代病例，指在一个家庭、病房、集体宿舍、托儿所、幼儿班组中第一个病例发生后，在该传染病最短潜伏期到最长潜伏期之间，易感接触者中因受其感染而发病的病例。由此可知，本次甲流爆发的大部分病例属于二代病例，反映此次甲型H1N1流感传染性较强。
本次甲型H1N1流感传播如此之快，究其原因可能与学校控制措施不力，造成病例不断成为传染源有关。在甲型H1N1流感流行期间，为控制流感进一步扩散，高校应加强流感的健康教育工作，在学校实行晨、午检，对因病缺课者进行登记追踪，以及适时采取停课隔离等控制措施。由于人群对甲型H1N1流感普遍易感，主要通过飞沫或气溶胶经呼吸道传播，也可通过口腔、鼻腔、眼睛等处粘膜直接或间接传播，所以甲型H1N1流感病毒的生物安全十分重要，即甲型H1N1流感病毒及其样本的采集和储存应遵照世界卫生组织的《实验室检测指南》[4]进行。甲型H1N1流感病毒及其样本的运输，实验室活动及风险评估应按照世界卫生组织手册及《引起当前全球疫情的甲型H1N1流感疑似或确诊样本操作实验室生物安全风险管理》推荐技术指南[5]进行，其中样本检测活动应在生物安全二级实验室进行，病毒分离和培养活动应在生物安全三级实验室进行[6]。实验工作人员采取与实验活动相适应的个人安全防护措施，并对其进行必要的健康检查。相关的网络实验室须储备足够的个人防护用品，实验室消毒用品及适量的预防和治疗药物。对实验室产生的相关废弃物的处理必须严格按照我国生物安全管理规定进行。
参考文献
[1] The ministry of health. Circular on issuing “Diagnosis and treatment scheme of pandemic influenza A (H1N1) (The1th edition for pilot use , 2009)” by general office of the ministry of health [EB/OL].
[2] 中华人民共和国卫生部.甲型H1N1流感病毒实验室检测技术方案（试行） [EBS/OL].http//baike baidu com/view/2565527.htm.
[3] 中华人民共和国卫生部.教育部.《学校甲型H1N1流感防控工作方案》.
[4] 中华人民共和国卫生部.甲型H1N1流感诊疗方案试行[S]2009.
病毒样本范文第8篇
平顶山市疾病预防控制中心检验科，河南平顶山 467001
[摘要] 目的对平顶山市2011年手足口病实验室检查结果进行分析, 了解2011年平顶山市手足口病病原学特征, 为实验室诊断手足口病提供参考。方法采集2011年平顶山市各地送检的499例手足口病患者的粪便、肛拭子、咽拭子、疱疹液和脑脊液等标本507份，应用RT-PCR技术检测样本中的肠道病毒、肠道病毒71型( EV71) 、柯萨奇病毒A组16型( CA16)。结果499例手足口病患者的507份各类样本中, 检测到肠道病毒（PE）阳性84份，EV71病毒特异性基因片段阳性167份, CA16特异性基因片段阳性125份。499例手足口病病例中, 阳性376例，阳性率75.35%；其中EV71阳性167例，占阳性人数44.41%，CA16阳性共125例，占阳性人数33.24%， EV71的检出率较CA16高。已检验499例中，重症患者133例， 阳性109例，阳性率81.95%；其中EV71共91例,占阳性人数83.49%，CA16共9例，占阳性人数8.26%。结论EV71是2011年平顶山市手足口病的优势病原体；同时EV71是引起手足口病重症病例的主要毒株类型。
[
关键词 ] 手足口病;逆转录-多聚酶链反应;肠道病毒属;肠道病毒71型；柯萨奇病毒A组16型
[中图分类号] R725.1 [文献标识码] A [文章编号] 1672-5654（2014）06（b）-0036-02
[作者简介] 王轶（1980- ），女，研究生，汉族，河南平顶山人，检验主管技师，主要从事微生物研究方面的工作，Email:378962445@qq.com。
手足口病（Hand-foot-mouth disease, HFMD）是全球性传染病，世界大部分地区均有此病流行的报道，此病流行无明显的地区性，一年四季均可发病，以夏秋季多见，由多种肠道病毒引起， 以肠道病毒71型（Human enterovirus 71 ，EV71 ）和A组柯萨奇病毒16型（ Coxsackievirus A16 ，CA16）为主要病原引起的丙类传染病。大多数患者症状轻微，主要症状为手、足、口腔等部位的斑丘疹、疱疹，少数病例可出现脑膜炎、脑炎（以脑干脑炎最为凶险）、脑脊髓炎、肺水肿、循环衰竭等，个别重症患儿病情进展快，可导致死亡[1]。多发于学龄前儿童，尤以3岁以下年龄组发病率最高。病人和隐性感染者均为传染源，主要通过消化道、呼吸道和密切接触等途径传播。为了解平顶山市手足口病的流行特征，对平顶山市手足口病的综合防治提供参考依据，现将2011年平顶山市手足口病病原学监测结果进行总结分析。
1材料与方法
1.1材料
1.1.1样本来源各县、区疾控中心及各医院在2011年送检的可疑病例，聚集性感染病例和所有重症病例样本，其来源有肛拭子和咽拭子、疱疹液等，样本采集后用冰盒运送至实验室。
1.1.2检测试剂用于RNA提取的试剂盒是Mag MaxTM-96viral RNA Isolation kit（Ambion公司），用于核酸扩增的试剂盒是荧光PCR法核酸测定试剂盒（上海之江生物科技有限公司）。
1.2试验方法
将采集的样本按照Ambion公司试剂盒的说明用核酸自动纯化仪提取RNA；采用实时荧光PCR仪对柯萨奇病毒A16型、肠道病毒71型和其他肠道病毒通用的特异性核酸片段进行荧光PCR检测。
1.3统计学分析
采用spss 16.0软件进行统计学分析。
2结果
2.1实时荧光定量PCR检测阳性率
平顶山市2011年共采集499例手足口病患者的507份各类样本, 检测到84份肠道病毒阳性，167份EV71病毒特异性基因片段阳性和125份CA16特异性基因片段阳性，EV71病毒、CAl6病毒以及肠道病毒的阳性构成比分别为：44.41%、33.24%和22.34%，以肠道病毒EV71型为主。粪便肠道病毒阳性率为83.90%，咽拭子肠道病毒阳性率为78.33%，疱疹液肠道病毒阳性率为53.33%，脑脊液肠道病毒阳性率为38.16%。见表1。
表1不同类型样本检测结果
2.2手足口与性别的关系
从性别来看，499例手足口病病例中，发病男性患儿315例多于女性184例， 男女比例为1.71:1,男性肠道病毒阳性率远高于女性(χ2＝8.436，P＝0.004＜0.05)，差异具有统计学意义。
表2手足口与性别的关系
2.3阳性肠道病毒患儿的年龄分布
从年龄看手足口病发病年龄主要集中在5岁以下，其中以0~4岁散居或幼托儿童发病最高，占总数的80.56%（402/499）。
表3阳性肠道病毒患儿的年龄分布
2.4手足口重症患者肠道病毒检测情况
在已检验的499人中，重症患者133人， 阳性109人，阳性率81.95%；其中EV71共91人,占阳性人数83.49%，CA16共9人，占阳性人数8.26%。
表4手足口重症患者肠道病毒检测情况
3讨论
手足口病常常由多种肠道病毒共同引起，而EV71和CA16往往是手足口病暴发流行的最主要病原，二者在遗传学上密切相关[2-3]。2011年平顶山市共检测出手足口病阳性数为376份，167份EV71病毒特异性基因片段阳性，125份CA16特异性基因片段阳性，84份肠道病毒阳性，这说明平顶山市手足口病流行的优势病原是EV71，但同时也存在着CA16和其它肠道病毒。根据我国山安徽、山东、上海和北京报道，EV71 与CA16 交替流行，并且不同地域同一时间流行的型别也不一定相同[4]。因此病原学监测对掌握手足口病的流行规律，更加有效进行防控意义重大；从不同类型的样本检测结果看，粪便和咽拭子肠道病毒的检出率较高，均大于70%；从性别来看，499例手足口病病例中，发病男性患儿315例多于女性184例， 男女比例为1.71:1，与男孩喜动的天性有关，这与蒋静等[5]、秦利平等[6]、金祝平等[7]、杜志忠等[8]的男性报告发病数多于女性的结果相同；从年龄看手足口病发病年龄主要集中在5岁以下，其中以0~4岁散居或幼托儿童发病最高，占总数的80.56%（402/499），这符合手足口病的年龄特征，其它文献也有类似报道[9-10] , 可能与婴幼儿自身免疫机制尚未发育完善、免疫力低下有关；从月份看平顶山市3~12月均检测出肠道病毒，7月阳性率缓慢上升，8月出现第一个高峰，到9月份开始下降，以后发病趋于平缓，病例主要集中于每年的7、8月，这个时期平顶山市正值雨季，气候条件适合肠道病毒的生存与传播。
总之，手足口病传染性强，传播速度快，对0~4岁儿童危害严重，至今无特异性治疗方法，亦无疫苗预防。为遏制疫情蔓延，各地要加强疫情监测，将防控工作的重点放在托幼机构。各托幼机构广泛开展卫生教育宣传，养成良好卫生习惯，做到饭前便后洗手、不喝生水、不吃生冷食物、勤晒衣被、多通风。托幼机构和家长发现可疑患儿，要及时到医疗机构就诊，并及时向卫生和教育部门报告，及时采取控制措施。轻症患儿不必住院，可在家中治疗、休息，避免交叉感染。各级卫生部门要做好教育部门手足口病防制工作的技术指导，切实做到早预防、早发现、早诊断、早治疗，一旦发现疫情要采取果断措施，同时做好疫点、疫区卫生处理和传染源管理工作，遏制疫情蔓延。
[
参考文献]
[1]郭雪，郑焕英，莫艳玲，等．2008年广东省儿童手足口病病原学监测[J].中华疾病控制杂志，2009，13（3）:270-272.
[2]Zhu M，Zheng JX，Cheng XF，et al ．Analysis of two EV71 genotypesin Maanshan Area[J]．Chin J Health Lab Technol，2009，19（10）：2348－2350．
[3]廖惠贞，朱小洁.惠州地区2010年手足口病实验室检测分析[J].中国热带医学,2012,12（2）: 224-225.
[4]周帅锋，张帆，黄威，等．2009年湖南省哨点医院手足口病病原学检测与分析[J].南华大学学报，2010，38（4）: 479-483.
[5]蒋静，杨小兵，程德明，等．2009 年湖北省宜昌市手足口病流行病学分析[J].疾病监测，2010，25(2):136－138．
[6]秦利平，徐蓉芳，张静敏．乐山市2009 年手足口病流行病学及报告质量分析[J].现代预防医学，2011，38(8):1539－1540．
[7]金祝平，庞志峰．2009 年浙江省金华市手足口病流行病学特征分析[J]．疾病监测，2010，25(5) : 374－376．
[8]杜志忠，刘志强．北京市平谷区2009年手足口病疫情分析[J].职业与健康，2010，26(20):2339－2340．
[9]何展,松梅,黄友志,等.茂名市2008年手足口病流行病学分析[J].职业与健康,2009,25(18):1960-1961.