蛋白酶抑制剂
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蛋白酶抑制剂范文第1篇
【摘要】 目的 探讨TIMP-1在胃癌中的表达与肿瘤浸润、转移及预后的关系。方法采用免疫组织化学技术（SP法）对63例胃癌组织的TIMP-1进行检测，结合临床资料进行分析。结果 胃癌组织的TIMP-1的阳性表达率为52.4%（33/63）。TIMP-1的表达强度随着分化程度的升高而增加;在早癌组中表达良好，而在进展期癌组中表达差;在无淋巴结转移组中表达较有淋巴结转移组中表达好。结论 TIMP-1可作为判断胃癌恶的重要生物学指标，亦是判断预后的重要指标。
Expression of tissue inhibitor of metalloproteinases in human gastric cancer and its invasion and metastasis .
【Abstract】 Objective The aim of this study was to investigate the relationship between presence of TIMP-1and invasion，metastasis，prognosis of gastric cancer.Methods Sixty-three specimens of gastric cancer as control were assessed by
immunohistological method（SP method）.Results The rate of positive expressions of TIMP-1was52.4%（33/63）.The more high expression of TIMP-1in gastric cancer，the more deeply staining of histologic clasˉsification;The expression of TIMP-1
in early gastric carcinoma had strong staining，but weak staining in advanced gastric carcinoma.The positive expression of TIMP-1in no metastatic lymph nodes was higher than that in cancer of metastatic lymph nodes.Conclusion TIMP-1was negative regulator of invasion and metastasis of gastric cancer，and was new sign of biological behavior in gastric cancer.It was a sign in predicting.
Key words Gastric Cancer Invasion and Metastasis Tissue Inhibitor of Metalloproteinases
胃癌是最常见的恶性肿瘤之一，其浸润转移是导致胃癌患者死亡的主要原因。恶性肿瘤浸润是转移的前提，而肿瘤的浸润是一个极其复杂的过程，Liotta提出肿瘤浸润的三步学说，即粘附、降解和移动，其中降解过程是关键，即肿瘤细胞降解破坏细胞外其质引起的浸润是肿瘤转移这一复杂机制的最主要过程。目前已经证明基质金属蛋白酶（Matrix Metalloproteinases，MMPs）在这一过程中起着极为重要的作用。本实验应用免疫组织化学检测人体胃癌及相应淋巴结转移癌中TIMP-1和TIMP-2的表达情况，以探讨二者在胃癌侵袭和转移过程中的意义。
1 资料与方法
1.1 一般资料 选取1994年4月～2000年9月间，我院经病理诊断为胃癌（随诊资料完整），并行胃癌根治术的福尔马林固定石蜡包埋标本63例，术前均未行放疗、化疗。男42例，女21例，男女比2:1;患者年龄31～76岁，平均57.6岁;随诊时间至2003年9月，生存时间5～69个月，平均37个月。病理诊断按我国胃癌协作组:胃癌的组织学分型，分为状腺癌、管状腺癌、低分化腺癌、黏液细胞癌、黏液腺癌。另外按分化程度分高、中、低分化三组。按有无淋巴结转移分淋巴结阴性组、淋巴结阳性组。按照病期:分为早、中、晚三期胃癌 ［1］ ，后两者为进展期癌，本实验亦按此分期分为两组:早癌组和进展期癌组。首先将胃癌术后大体标本的石蜡切片行HE染色，并在显微镜下观察。确定早期胃癌27例，进展期胃癌36例;高分化胃癌17例，中分化胃癌9例，低分化胃癌37例;有淋巴结转移者22例，无淋巴结转移者41例。
1.2 免疫组化方法 免疫组化采用链霉菌过氧化物酶法（SP法），一抗鼠抗人TIMP-1单克隆抗体及SP免疫试剂盒（福建迈新公司产品）。用已知乳腺癌阳性切片作阳性对照，用正常胃组织作为正常对照。
1.3 结果判断 ［2］ 根据肿瘤细胞胞浆染色的程度及染色细胞百分率进行评分:基本不着色者为0分，着色淡黄色为1分，棕色为2分，深棕色为3分。着色细胞占计数细胞百分率≤5%为0分，6%～25%为1分，26%～50%为2分，≥51%为3分。将每张切片着色程度得分与着色细胞百分率得分相乘，为其最后得分。0～1分为阴性（-），得2～3分为弱阳性（+），得4～6分为中等阳性（++），6分以上为强阳性（+++）。
1.4 统计学方法 应用SPSS10.0统计软件包，等级资料用秩和检验，P<0.05表示差异有显著性，P<0.01表示差异有非常显著性。
2 结果
2.1 TIMP-1与胃癌各临床病理指标的关系 在63例胃癌组织中，TIMP-1在33例中有表达（+～+++），其阳性率为52.4%。其中高分化组的表达为（-）2例，（+）3例，（++）3例，（+++）9例;中分化组的表达为（-）4例，（+）0例，（++）2例，（+++）3例;低分化组（-）24例，（+）3例，（++）3例，（+++）7例。应用非参数检验中的秩和检验可见TIMP-1的表达在三组不同的分化程度中差异有非常显著性（P=0.01），且其表达在高分化组良好，而在低分化组较差，其与分化程度呈正相关。
2.2 临床分期 早期癌中（-）4例，（+）11例，（++）10例，（+++）2例;进展期癌（-）25例，（+）8例，（++）2例，（+++）1例。TIMP-1的表达在两组临床分期中差异有非常显著性（P<0.00），早期癌组中TIMP-1表达良好，而在进展期癌中TIMP-1表达差，随着病期的延长表达下降。无淋巴结转移组（-）12例，（+）5例，（++）7例，（+++）17例;有淋巴结转移组（-）18例，（+）1例，（++）1例，（+++）2例。其表达在有、无淋巴结转移中差异有非常显著性（P<0.01），随着淋巴结转移的出现而表达下降。
3 讨论
胃癌是消化道常见的恶性肿瘤之一，其以出现临床症状晚、进展迅速和生存率低为特征 ［3］ 。其预后不良的原因是在确诊胃癌时，通常原发灶已出现广泛浸润，并已扩散形成转移灶，尤其易扩散至淋巴结。恶性肿瘤的浸润和转移是多步骤和多分期的，其中降解或破坏细胞外基质是关键步骤 ［4］ 。MMPs（基质金属蛋白酶）在这一过程中起着重要的作用。TIMPs（基质金属蛋白酶抑制剂）是MMPs的天然抑制剂，它可与活化状态的MMPs以1:1克分子比例非共价结合，这种结合是不可逆且稳定的 ［5］ ，从而使MMPs不能发挥其作用，是MMPs的负调控因子。TIMPs广泛存在于组织和体液中，目前按发现的先后命名了4种:TIMP-1、2、3、4。它们是一组多功能的细胞因子，其中TIMP-1是一种分子量为28.5kD的可溶性糖蛋白，位于人Xp11.23-Xp11.4染色体上 ［6］ 。TIMP-1对于所有类型MMPs均有抑制作用。在生理情况下，它可参与细胞外基质的改建及影响细胞生长，在病理情况下，它在肝纤维化及肿瘤细胞的侵袭和转移中发挥了重要作用 ［7］ 。很多研究通过转基因技术，上调TIMPs的表达及给予外源性重组TIMPs均能降低恶性肿瘤的侵袭和转移能力 ［8］ ，而下调TIMPs的表达则增加了肿瘤细胞的远处转移和胚胎干细胞的侵袭能力 ［9］ 。
本实验应用免疫组化SP法检测TIMP-1在63例胃癌组织中的表达，结果显示阳性表达主要表现在胃癌细胞的胞浆内，呈散在、片状或灶状分布，在间质细胞表达较少，与Garbett EA等 ［10］ 应用免疫组化检测TIMP-1在胃癌组织中的表达结果相同。由此可见TIMP-1在胃癌细胞中的表达存在广泛异质性。本实验还发现，胃癌旁肠上皮化生和异型增生，TIMP-1的表达极佳，其染色深度部分超过胃癌细胞。目前认为，TIMPs在不同的肿瘤中来源于不同的细胞，瘤细胞和宿主间质细胞可分别表达或共同表达 ［11］ 。本实 验阳性率TIMP-1为52.4%（33/63）。曾有报道在胃癌中TIMP-1的表达为41% ［12］ 。以上实验均采用免疫组化方法，说明在同一种肿瘤组织进行测定的结果亦不完全相同，目前认为其影响因素可能为:（1）抗原丢失;（2）一抗单克隆抗体浓度不同（不同的生产厂家）;（3）实验过程中的主、客观原因;（4）结果判断方法的不同等。
本研究结果显示TIMP-1的表达与胃癌的分化程度、分期及有无淋巴结转移均有相关性，且其随着分化程度的升高而表达增强;随着浸润深度的增加而表达下降;随着淋巴结转移的发生而表达下降。但由此已可明确说明:TIMP-1是肿瘤浸润和转移的负调控因子之一，并可作为判断胃癌细胞恶的重要生物学指标。
多数胃癌一旦发现即已进入晚期阶段，肿瘤细胞的浸润转移多数已经发生，因此以抑制MMPs的活性来达到控制肿瘤发展的做法收效甚微。但通过对TIMPs的活性测定可估计患者的现状和预后，并进一步指导治疗。
参考文献
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10 Garbett EA，Reed MW，Brown NJ.Proteolysis in human breast and colˉorectal cancer.Br J Cancer，1999，81（2）:287-293.
蛋白酶抑制剂范文第2篇
关键词 基质金属蛋白酶抑制剂；凋亡：神经保护
近年来基质金属蛋白酶(MMPs)在脑外伤后的作用开始被研究者关注。本文采用动物实验方法，评价基质金属蛋白酶抑制剂(CTT)对脑外伤的疗效。
1 材料和方法
1．1 实验试剂：CTT(BIOMOL公司产品)，TUNEL检测试剂盒(武汉博士德公司)，其他试剂均为市售分析纯产品。
1．2 动物模型制备：2～3月龄健康SD大鼠64只(250～300g/只)雌雄各半。将大鼠随机分为实验组(侧脑室注射CTT)和对照组(侧脑室注射生理盐水)。每组按处死时点的不同分为4个亚组，分别为6小时8例、24小时8例、3天8例、7天8例。用10％水合氯醛300 mg／kg腹腔注射，麻醉后对实验组和对照组动物经侧脑室注射CTT或生理盐水各10ml。第二天利用Marmarou等学者的自由落体撞击法制造脑外伤，撞击重量50 g，撞击高度1.5米。
1．3 神经症状评分：脑外伤后在各处死时点采用Longa和Kat－sumata等的方法观察并记录大鼠神经功能缺失症状。
1．4 TUNEL法测凋亡：大鼠经过生理盐水和4％多聚甲醛快速灌注后，完整取出脑组织，注意软脑膜剥离干净。将脑组织置于4％多聚甲醛浸泡3～4小时后。移入30％蔗糖溶液4℃下浸泡沉底2天。固定后的脑组织作20 μm厚的冰冻切片，再经TUNEL试剂盒处理后苏木素染色，400倍光镜下记数阳性细胞数。
1．5 统计方法：结果用均数±标准差表示，采用SPSS11.5统计软件，以单因素方差分析t检验作差异的显著性分析。
2 结果
2．1 两组大鼠神经症状评分：见表1、图1。
2．2 CTT对脑外伤后神经元凋亡的影响：在实验组和对照大鼠的海马部可以见到一定数量的TUNEL染色阳性的凋亡细胞，见图2、表2。
3 讨论
MMPs是一组与锌有关的金属蛋白酶，主要功能是降解和再塑造细胞外基质。该酶在正常的胚胎发育，组织塑型和一些疾病如膜性肾病、多囊肾、动脉粥样硬化、多种结缔组织疾病、关节炎和肿瘤转移等的发生发展中起着重要作用。试验中使用的CTT是一种人工合成的基质金属蛋白酶抑制剂，它能够特异性的抑制明胶酶MMP－2和MMP－9，而对MMP－8，MMP－13，MP－14等无抑制作用。
蛋白酶抑制剂范文第3篇
【关键词】 基质金属蛋白酶抑制剂-1； 慢性乙型肝炎； 肝纤维化； 诊断； 酶联免疫吸附测定
Clinical Application of Tissue Inhibitor of Metalloproteinases-1 in Assessment of Liver Fibrosis/SHI Yu-ling.// Medical Innovation of China，2012，9(23):087-089
【Abstract】 Objective：To evaluate the clinical value of TIMP-1 for diagnosis liver fibrosis. Method: CHB patients were divided into mild liver fibrosis group (S0-S1) and significant liver fibrosis group (S2-S4)， according to pathological diagnosis. The diagnostic capacity of CTGF was assessed by comparing the area under receiver operating characteristic (AUC) with a panel of fibrosis markers.Result：Serum level of TIMP-1 in control group，S0-S1，S2-S4 was(146.6±29.2)，(161.2±43.2)，(221.6±93.8)μg/L，respectively. The level of TIMP-1 in S2-S4 group was significantly higher than that of S0-S1 group (t=5.32，P
【Key words】 Tissue inhibitor of metalloproteinases-1; Chronic hepatitis B; Liver cirrhosis; Diagnosis; Enzyme-linked immunosorbent assay
First-author’s address:The First People Hospital of Xiangcheng ， Xiangcheng 466200，China
doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2012.23.056
有研究发现，血清基质金属蛋白酶组织抑制因子(tissue inhibitor of metalloproteinases-1，TIMP-1)在肝纤维化发生发展中有重要作用[1]。为了评估血清TIMP-1在肝纤维化中的诊断价值，笔者测定了肝纤维化患者血清中TIMP-1的含量，将肝穿刺病理学检查作为金标准，使用ROC曲线分析TIMP-1诊断明显纤维化的临床价值，并和肝纤维化标记物HA、PCⅢ、CⅣ、LN比较其诊断性能。
蛋白酶抑制剂范文第4篇
关键词 骨化三醇 角质形成细胞 中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂 serpin B1 银屑病
中图分类号：R977.24； R758.63 文献标识码：A 文章编号：1006-1533（2016）09-0028-07
Calcitriol inhibits keratinocyte proliferation by upregulating the expression of leukocyte elastase inhibitor serpin B1
LI Hui1，2*， GUO Zhili2， GU Jun2**
（1. Department of Dermatology， General Hospital of Urumuqi Military Region， Urumuqi 830000， China；
2. Department of Dermatology， Changhai Hospital， Second Military Medical University， Shanghai 200433， China）
ABSTRACT Objective： To evaluate the role of calcitriol and serpin B1 in human keratinocyte cell line HaCaT proliferation. Methods： Calcitriol was added at 1×10-8 mol/L into the culture of HaCaT cell in a calcitriol group while only serum-free Dulbecco’s modified Eagle’s medium instead in a control group. Whole proteins were extracted by freeze-thawing method after cells were incubated in the dark for 48 h and were separated by two-dimensional differential gel electrophoresis. The differences for protein expression were analyzed by ImageMaster 2D Platinum 5.0 and the identification of proteins was performed by matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry. The overexpression of serpin B1 was confirmed by reverse transcription polymerase chain reaction and Western-blotting assay. The effect of serpin B1 on HaCaT proliferation was analyzed by RNA interference experiments， methyl thiazole tetrazolium assay and flow cytometry. Results： The expression of serpin B1 was upregulated in the calcitriol group. Calcitriol could inhibit HaCaT proliferation at 1×10-9 ～ 1×10-6 mol/L. HaCaT proliferation could be promoted and its inhibitory effect could be offset by interfering serpin B1. Conclusion： The expression of serpin B1 can be upregulated when calcitriol is added into the culture of HaCaT cells， which may play an important role in the inhibition of calcitriol to the proliferation of HaCaT cells.
KEY WORDS calcitriol； keratinocytes； leukocyte elastase inhibitor； serpin B1； psoriasis
胞增殖和表皮内的中性粒细胞浸润[1-2]。骨化三醇及其类似物已被证实可有效治疗轻、中度寻常型银屑病[3-4]，其机制被认为是骨化三醇能抑制角质形成细胞的增殖并促进角质形成细胞的分化[5]。
银屑病患者的活动性皮损及外周血中的中性粒细胞数常增多，且随之产生的氧化压力与银屑病的严重程度相关[2，6]。中性粒细胞颗粒蛋白酶虽能直接杀伤吞噬的病原体，但在慢性炎症性疾病中，其之过度释放也可导致组织损伤以及凋亡细胞的清除障碍[7-9]。蛋白激酶的调节在表皮的屏障功能及炎症性皮肤病的发病过程中起着重要作用[10]。作为蛋白激酶家族成员，中性粒细胞弹性蛋白酶（neutrophil elastase， NE）是活化的中性粒细胞释放的主要物质，在银屑病引起的组织破坏中起着重要作用。NE在银屑病患者的组织和血清中表达过度并在银屑病的发病中起着重要作用[11]。NE的水平与银屑病的活动性相关，且被认为是诊断银屑病和随访其严重程度的一种很好的监测指标[12]。此外，既往研究显示，NE在银屑病皮损中高表达，且可刺激角质形成细胞的增殖[13]。NE也可促进人角质形成细胞株HaCaT细胞的增殖及银屑病器官培养模型的transwell迁移[14]。NE和内源性蛋白酶抑制剂间的失衡已被公认为是银屑病的病因之一。一些NE的抑制剂、包括源自皮肤的抗白细胞蛋白酶[15]和α1-抗胰蛋白酶[16]都已被证实与银屑病相关。蛋白水解失衡与银屑病的进展相关[2]。
丝氨酸蛋白酶抑制剂是一类具有独特的三级结构并通过自杀式底物抑制机制中和靶蛋白酶的蛋白家族[17]，其成员serpin B1又被称为多形核中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂和胞浆丝氨酸蛋白酶抑制剂[18]。serpin B1是中性粒细胞颗粒内的一种以自杀式底物抑制机制作用的快反应型NE、蛋白激酶3和组织蛋白酶G的抑制剂[10]。丝氨酸蛋白酶抑制剂已被认为与银屑病和其他常见的炎症性皮肤病相关[13，19-20]，但serpin B1与银屑病的相关性尚未见有报告。
本研究的目的是证实骨化三醇能上调HaCaT细胞中的serpin B1表达且其有抑制HaCaT细胞增殖的作用。
1 实验方法
1.1 细胞培养
实验组：将永生化的HaCaT细胞（上海生化和细胞生物研究所产品）用添加了10%胎牛血清（法国Biowest公司产品）的Dulbecco改良的Eagle培养基（Dulbecco’s modified Eagle’s medium， DMEM）（法国Biowest公司产品）于5% CO2、37 ℃下常规培养。待80%的细胞融合后，再加入1×10-8 mol/L的骨化三醇（美国Sigma公司产品）。
阴性对照组：将HaCaT细胞于未添加胎牛血清的DMEM中培养。
1.2 双向凝胶电泳（two-dimensional electrophoresis， 2DE）法和质谱分析
采用反复冻融法提取骨化三醇组和阴性对照组中的HaCaT细胞全蛋白，用Bradford法测定蛋白浓度，然后通过2DE法分离蛋白。总上样量为100 μg，第一向固相等电聚焦电泳采用17 cm长的pH为3 ～ 10的非线性固相pH梯度凝集胶条、按程序化的电压梯度进行电泳。主动水化50 V、14 h，温度为17 ℃，依次经250 V、30 min，500 V、1 h，1 000 V、1 h，升压至10 000 V、5 h，聚焦10 000 V达总量60 000 Vh。聚焦结束后，胶条先后经2%二硫苏糖醇和2.5%碘乙酰胺平衡，然后进行第二向电泳，采用12%十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis， SDS-PAGE）法，10 mA、50 V、50 min，50 mA、250 V、至溴酚蓝指示剂到底部边缘。电泳结束后，采用快速银染法染色蛋白点位。
银染后的凝胶用UMAX PowerLook 2100XL扫描仪进行图像扫描光密度分析。使用ImageMaster 2D Platinum 5.0软件对2DE图谱进行匹配分析，筛选出存在差异的蛋白质点。切取符合质谱分析法浓度要求的10个有差异的蛋白质点并进行胶内酶解，然后通过基质辅助激光解吸飞行时间质谱仪对蛋白质点进行氨基酸序列分析，依据酶解肽片断的质量，通过Mascot软件查询SWISS-PROT蛋白数据库，经软件自动运算得出Mascot得分，进而确定被测蛋白的可能属性及名称。数据分析及蛋白鉴定由中科院上海生物研究所蛋白质组学研究中心完成。
1.3 反转录聚合酶链式反应（reverse transcription polymerase chain reaction， RT-PCR）法
用Trizol试剂（美国Invitrogen公司产品）抽提预处理后的HaCaT细胞的总RNA，然后按照操作试剂盒（立陶宛MBI Fermentas公司产品）反转录合成cDNA。serpin B1引物的序列如下：前向引物，5′-AGGAACAGTTGACTTTGGAA-3′；反向引物，5′-AAAGAGATCCTGCACACCTA-3′。RT-PCR法采用标准的SYBR Green PCR试剂盒（日本TOYOBO公司产品）进行，聚合酶链式反应的特异性扩增在ABI 7300仪器（德国Applied Biosystem公司产品）中进行。serpin B1、磷酸甘油醛脱氢酶（glyceraldehyde phosphate dehydrogenase， GAPDH）的相对量采用2-ΔΔCt法计算。
1.4 Western-blotting法
提取的HaCaT细胞全蛋白经SDS-PAGE法分离后转移到硝酸纤维素膜（德国Millipore公司产品）上，用serpin B1抗体（美国Santa Cruz公司产品）和GAPDH抗体（美国Bioworld公司产品）孵育，之后孵育羊抗兔二抗，最后用化学发光法（美国Pierce公司产品）显影。
1.5 细胞转染
设计并合成3对serpin B1的siRNA（委托上海吉玛制药技术有限公司完成），序列分别为：serpin B1-homo-491 sense为5′-CGGGCAUGGUUGAUAACAUTT-3′，antisense为5′- A U G U U A U C A A C C A U G C C C G T T- 3′；s e r p i n B 1 - h o m o - 9 3 s e n s e为5′-GGCGUUGAGUGAGAACAAUTT-3′，antisense为5′- A U U G U U C U C A C U C A A C G C C T T- 3′；s e r p i n B 1 - h o m o - 8 1 3 s e n s e为5′-GUGGACUAAACCUGAGAAUTT-3′，antisense为5′-AUUCUCAGGUUUAGUCCACTT-3′。采用Lipofectamin 2000（美国Gibco公司产品）转染法转染HaCaT细胞，阴性对照siRNA作为空白对照。以RTPCR法验证转染及干扰效率。
1.6 噻唑蓝实验分析细胞增殖
铺96孔板，使HaCaT细胞在24 h内融合达70%左右，然后分为3组，分别加入骨化三醇、NE和无胎牛血清的DMEM，培养48 h后，再每孔加5 mg/ml噻唑蓝20μl，37 ℃、5% CO2下孵育4 h。吸弃每孔内培养基上清液，再每孔中加入二甲基亚砜150 μl，振荡10 min。用酶联免疫检测仪测定550 nm下的各孔光吸收值。
1.7 流式细胞仪检测细胞周期
用6孔板培养HaCaT细胞，然后分别用阴性对照siRNA、空白对照、serpin B1 siRNA、阴性对照联合骨化三醇（1×10-8 mol/L）和空白对照联合骨化三醇（1×10-8 mol/L）处理细胞。48 h后收集细胞，加入70%乙醇，30 min后再用冰磷酸盐缓冲液（phosphate buffer solution， PBS）清洗。在冰上加入含RNase（1∶100）的PBS重悬细胞，然后用碘化丙啶染色，用流式细胞仪（美国BD Biosciences公司产品）进行分析。
1.8 统计分析方法
本研究计量资料以（均数±标准差）表述。两组样本间的均数比较用两样本均数的t检验。P
2 结果
2.1 骨化三醇上调serpin B1表达
建立了HaCaT细胞全蛋白的2DE图谱，发现重复性好，并共检测出3 000余个蛋白位点，见图1A。与对照组相比，骨化三醇组共有22种蛋白出现表达差异，其中一些蛋白的位点已在图1A中用圈和数字标示。22种蛋白中有5种表达下调，17种表达上调。共鉴定出4种有表达差异的蛋白，分别为serpin B1、fascin同系物-1、干扰素调控因子-4和gi 158256364。在图1A中用箭头标示的即是serpin B1，其在骨化三醇组表达上调。图1B、1C和1D展示了serpin B1的鉴定过程。
如图2A所示，RT-PCR法结果显示，与对照组相比，骨化三醇组在4、8、12、24和48 h时间点，serpin B1的表达分别上调了1.99、2.41、3.28、3.46和3.31倍（均P
2.2 serpin B1抑制HaCaT细胞增殖
如图3所示，骨化三醇在1×10-9 ～ 1×10-6 mol/L浓度时能抑制HaCaT细胞的增殖。为明确serpin B1对HaCaT细胞增殖的影响，对HaCaT细胞转染serpin B1 siRNA并设阴性对照。用RT-PCR法验证serpin B1的干扰效率，发现如图4A所示，serpin B1-homo-93可显著降低serpin B1的表达，抑制率达83%；如图4B所示，serpin B1 siRNA可较阴性对照和空白对照显著促进HaCaT细胞的增殖（均P
此外，如图4B所示，与阴性对照组相比，阴性对照联合骨化三醇组的HaCaT细胞增殖受到抑制，提示骨化三醇可抑制HaCaT细胞增殖。而当干扰serpin B1后，骨化三醇对HaCaT细胞增殖的抑制作用消失，提示serpin B1在骨化三醇抑制HaCaT细胞增殖过程中起着至关重要的作用。
如图5A、5C和5F所示，对细胞周期的研究结果也证实了serpin B1 siRNA的细胞增殖促进作用：serpin B1 siRNA组和阴性对照组的G1期细胞占比分别为（40.36±3.07）%和（47.04±2.15）%、S期细胞占比分别为（50.41±4.33）%和（35.49±4.30）%（均P
3 讨论
骨化三醇及其类似物已被证实可有效治疗轻、中度寻常型银屑病，其作用机制也已被证实是骨化三醇可抑制角质形成细胞增殖并促进其分化[3-4]。然而，骨化三醇促使角质形成细胞分化正常化的分子机制尚未被完全阐明。一项研究采用基因表达组学方法研究了1， 25-二羟维生素D3对角质形成细胞基因表达的影响，结果发现可诱导角质形成细胞serpin B1的表达[21]。同时，该研究还展示了一个包括维生素D受体配体在内的维生素D相关的细胞分化调控网络。本研究通过蛋白组学方法研究发现，骨化三醇可改变包括serpin B1在内的HaCaT细胞的多种蛋白表达。尤其是serpin B1，其表达的改变已为进一步的实验所证实，且其抑制HaCaT细胞增殖的作用也得到了进一步的研究。本研究揭示，骨化三醇可改变HaCaT细胞中的一些蛋白表达，这为银屑病治疗提供了新的作用靶点。本研究还显示，serpin B1在角质形成细胞中有表达，且其表达会在骨化三醇存在时上调。
serpin B1在中性粒细胞胞浆中高表达[22]。近来发现，除中性粒细胞、巨噬细胞和肥大细胞外，serpin B1在支气管和腺上皮细胞中也有表达[23]。serpin B1调控初始免疫，可在慢性炎症中通过中和蛋白激酶而减少组织损伤。在小鼠细菌感染模型中，serpin B1也与中性粒细胞的内稳定相关[24-26]。有研究显示，在小鼠慢性铜绿假单胞菌感染模型中，serpin B1可降低细菌数和减少炎性细胞的浸润[27]。对多种感染模型的研究还显示，serpin B1与病原菌清除及维持免疫功能所必需的正常中性粒细胞的储备有关[28-29]。因此，serpin B1被认为是最有效的NE抑制剂之一[29-31]。通过抑制NE，serpin B1可能在银屑病、慢性阻塞性肺疾病、纤维囊性病和溃疡性结肠炎等慢性炎症性疾病以及感染性疾病的发病过程中发挥至关重要的作用。
本研究也发现，serpin B1和骨化三醇均可抑制HaCaT细胞的增殖。serpin B1 siRNA可促进细胞周期由G1期向S期转化，而骨化三醇则抑制由G1期向S期转化。如果骨化三醇诱导的serpin B1对其产生细胞增殖抑制作用至关重要，那么干扰serpin B1将使骨化三醇对细胞增殖的影响消失。为验证该假设，对阴性对照联合骨化三醇组和serpin B1 siRNA联合骨化三醇组进行了比较研究，发现在serpin B1扰后，骨化三醇也不能产生细胞增殖抑制作用了。即：骨化三醇是通过上调serpin B1的表达而产生抑制HaCaT细胞增殖作用的。serpin B1可能是骨化三醇治疗银屑病的有效作用靶点。
本研究仍存在不足，尚需进一步研究serpin B1对HaCaT细胞分化和凋亡的影响。此外，需进行serpin B1与银屑病相关性的体内研究。
总之，本研究显示，serpin B1在角质形成细胞中有表达，且其表达会在骨化三醇存在时上调。serpin B1可抑制角质形成细胞增殖，在骨化三醇治疗寻常型银屑病中起着重要作用。
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蛋白酶抑制剂范文第5篇
1981年在美国加利福尼亚州和纽约市，部分男性同性恋者同时染上一种疾病，用了多种药物治疗却无效，病人最终死亡。专家发现，这些病人起病时表现为淋巴结肿大、厌食、慢性腹泻、体重减轻、发热，存在严重免疫缺陷，所以将此病称之为获得性免疫缺陷综合征（AIDS），中文译音叫艾滋病。
艾滋病是不治之症吗？
一提起艾滋病，许多人都认为是“不治之症”。其实，许多发达国家由于广泛应用抗病毒治疗，每年的病死人数已明显下降，因此，艾滋病应称为“可治之症”。但目前还不能根治。
目前用于抗HIV病毒的药物有几大类？
现在全世界用于治疗AIDS的药物很多，而美国食品及药品管理局（FDA）认可的标准最为严格。若以2001年美国FDA批准的药物为准，则共分为核苷类逆转录酶抑制剂和蛋白酶抑制剂两大类，共15种。
什么是逆转录酶抑制剂？
现在已清楚，引起艾滋病的病毒叫人类免疫缺陷病毒（HIV），而HIV是属于RNA病毒。该病毒进入人体免疫细胞的CD4细胞后，在病毒逆转录酶的作用下把RNA转换为DNA，然后再进入病毒生活周期的其他阶段。所以阻断逆转录酶后可以阻碍病毒的生存，以达到治疗目的，这类药叫逆转录酶抑制剂。
这一类又细分为核苷类逆转录酶抑制剂与非核苷类逆转录酶抑制剂两种。
核苷类逆转录酶抑制剂共有6种，代表药物是齐多夫定（ZDV）。该药1987年开始使用。其副作用较多，主要为骨髓抑制，可出现巨红细胞性贫血、中性粒细胞和血小板减少等。其他不良反应有近端肌肉病变。少数患者可出现指甲变蓝、心肌病或脂肪肝。长期应用该药，特别是单剂治疗，易引起耐药。目前用于临床的同类药物还有去羟肌苷（ddI）、扎西他滨（ddC）、司他夫定（D4T）和拉米夫定（3TC）、Abacavir五种。
非核苷类逆转录酶抑制剂有奈韦拉平、Delaviridine及依非韦伦（Efavirenz）三种，这组药也不单独应用，多采用联合治疗。
什么叫蛋白酶抑制剂？
生活在免疫细胞内的病毒要繁衍新的病毒时，由基因编码出许多前蛋白。这些前蛋白必须在蛋白酶的作用下才能裂解为成熟蛋白，以供组装新病毒之用。目前有不少药物是抑制蛋白酶的，这样一些前蛋白就不能裂解为成熟蛋白，从而使病毒的组成受阻，这类药被称为蛋白酶抑制剂。
美国FDA批准了6种蛋白酶抑制剂（PI）：即沙奎那韦（Saquinavier）、茚地那韦（Indinavir）、里托那韦（Ritonavir）、奈费那韦（Nelfinavir）、Amprenavir及Lopinavir/里托那囊合剂。这些药物可减少病毒量，但单药疗效不佳，常与核苷类或非核苷类逆转录酶抑制剂合用。沙奎那韦副作用较轻，有头痛、胃肠道症状、粒细胞减少等。茚地那韦的副作用为药物沉淀造成肾结石、血清总胆红素升高、贫血、粒细胞减少等。其他各药也有不少副作用，就不一一列举了。
什么是“鸡尾酒疗法”呢？
所谓鸡尾酒，就是几种酒混合在一起组成新的混合饮料。艾滋病的治疗中应用以上两类药联合治疗，人们把它比喻为“鸡尾酒”疗法。美国自1995年采用这种疗法，艾滋病死亡率明显下降。
艾滋病的治疗问题算解决了吗？
没有，所以本文开头就说本病是可治之症，但不能根治。
联合治疗虽然可以延缓病毒耐药的出现，但病毒基因仍可以发生突变。开展耐药基因的检测，可及早发现耐药现象，但目前尚难普及。
再次是治疗后，血中病毒量下降，一旦停药，又复上升，说明不能杀灭潜在感染细胞及获得免疫重建。
蛋白酶抑制剂范文第6篇
【关键词】Cystatin C；早期诊断；肾功能损害
测定物质清除率是评估肾脏排泄功能的最简便方法，因而常用此来评估肾小球滤过率(glomerular filtation rate，GFR)。半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(Cystatin C)可自由透过肾小球基底膜，且被近曲小管吸收，同时无肾小管的分泌，在所有组织中产生速率是恒定的，不受人体肌肉量、代谢、年龄、性别及炎症等因素的影响，是反映肾小球滤过率(GFR)的理想的内源性标志物[1]。因此，半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(cystatin C)是评估肾功能的一种敏感性好、特异性高的指标。我院于2004年4月至2008年2月对63例肾脏损害患者的血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(Cystatin C)、血清肌酐(serum creatinine，Scr)和内生肌酐清除率(endogenous creatinine clearance rate，Ccr)的测定结果进行比较，以探讨血清Cystatin C在早期肾功能损害诊断中的应用价值，现将结果报告如下。
1 资料与方法
1．1 一般资料 2004年4月至2008年2月选择在我院治疗的2型肾病患者63例，其中男性34例，女性29例，年龄28~77岁，平均(55．1±12．7)岁。入选的患者均填写了知情同意书。其中糖尿病患者23例，男13例，女10例，年龄30~77岁；高血压患者20例，男12 例，女8例，年龄34~76岁；肾病患者20例，男10例，女10例，年龄28~75岁，将这三组患者命名为糖尿病组、高血压组、肾病组。
1．2 方法 在我院的健康体检者中选择23例健康的志愿者作为对照组，其中男12例，女11例，年龄30~79岁，平均(57．2±11．2)岁，排除糖尿病、高血压及其他肾脏疾病史。对照组与糖尿病组、高血压组和肾病组之间年龄、性别、病程等方面差异均无统计学意义(P>0．05)，具有可比性。具体检测方法[2]：受检者血液测定采用空腹血，用真空分离胶试管采集，15 min后离心分离血清，2 h内完成测定。测定留取晨起7∶00 至次日7∶00 24 h尿液，集于一容器中，加人防腐剂，混匀后取40 ml 送检；采用微粒子增强免疫比浊法测定血清Cystatin C浓度，测定原理为使用兔抗人胱氨酸蛋白酶抑制剂C抗体包被的微粒子与抗原反应，反应体系发生的浊度变化，在540 nm波长处的吸光度值与胱氨酸蛋白酶抑制剂C浓度成比例，其结果可进行定量测定；肌酐清除率(Ccr)测定、计算按卫生部《全国临床检验操作规程》第2版方法进行。
1．3 统计学方法 使用SPSS 13．0对各项资料进行统计分析，各项参数以均数±标准差(x±s)表示，计量资料采用t检验，P
2 结果
糖尿病组、高血压组和肾病组与正常对照组的Cystatin C、Scr、Ccr等各项指标的测定结果比较发现：糖尿病组、高血压组和肾病组的Cystatin C明显高于正常对照组的Cystatin C，且差异具有统计学意义(P
3 讨论
有资料报道由高血压、糖尿病等引起的肾功能损害已占到这两种疾病总数的30%左右，为了早期发现该类疾病引起的肾功能损害,及早进行干预以逆转或延缓肾功能损伤,临床迫切需要找到并使用一些灵敏度高、特异性强的检测指标[3]。目前临床上Scr和Ccr是常用的检测肾功能评价GFR方法,但均有一定的局限性,且不同程度受一些外来因素的干扰。首先，血清肌酐(Scr)作为一种肌酸的代谢产物,主要有
肾小球滤过,肾小管少量分泌，其是临床广泛使用的肾小球滤过功能指标,但是其水平受年龄、性别、体质量、代谢水平及药物等因素的影响，如头孢类抗生素、酮体、黄疸和乳糜对Scr测定方法也有干扰[4]。另外，还有有两个因素决定了Scr不是肾脏损害的敏感标志物,第一,其参考范围较宽,个体差异大;第二,肾小球滤过率和Scr虽然存在负相关,但只有当肾小球滤过率下降超过50%时才能导致Scr的轻微上升。内生肌酐清除率(Ccr)是指肾脏在单位时间(分或日)内，能将多少量(毫升或升)的血浆中的内生肌酐清除出去。由于肌酐的排泄要经过肾小球、肾小管等肾组织单位，通过测定它就可以反应肾小球的滤过功能是否正常。Ccr反映肾功能比Scr敏感,但受某些因素的干扰,如尿液收集困难、记录不准确及公用的一些计算公式也有一定的误差,因此也不能很好的反映GFR变化。
半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(Cystatin C)又名γ-痕迹蛋白或球蛋白，是一种碱性非糖化小分子量蛋白质，分子量为1．33Kda，是半肌氨酸蛋白酶抑制剂(CPls)家族中的一员，由120个氨基酸残基组成，由所有的有核细胞以恒定的速率产生，可自由通过肾小球滤过，在近曲小管上皮细胞被分解代谢，不被肾小管重吸收和分泌。所有有核细胞都能稳定产生Cystatin C,其血中浓度不受炎症、肌肉量、发热或性别等因素影响。Cystatin C可自由滤过肾小球,然后由近曲小管细胞重吸收并迅速分解代谢,因此,血中的Cystatin C浓度就由肾小球滤过率决定。国外的一些学者通过Roe(Receiver Operating Characteristic)作图分析发现改变“截断限”(cuotff limit)使Cystatin C的诊断敏感性下降至70%时，其诊断特异性仍可达75%，而通过改变血清肌配浓度的“截断限”，使其诊断敏感性下降至50%时，才能获得100%的特异性，使其诊断敏感性增加至100%时，其特异性接近于零，这说明CystatinC的诊断准确率明显优于血清肌酐(Scr)。Cystatin C作为一种敏感性好、特异性高的评估肾功能指标，具有以下几个优点[5]：①稳定的生成率;②稳定的血浓度，不受其他病理变化的影响，不与蛋白质结合;③肾小球自由滤过，不被重吸收或分泌。本研究通过对肾脏损害患者的血清Cystatin C、血清肌酐和内生肌酐清除率等指标的测定结果进行比较，探讨了血清Cystatin C在早期肾功能损害诊断中的应用价值，结果发现检测血清Cystatin C是临床早期诊断肾功能损害的有效方法。
因此，Cystatin C现已替代血清肌酐作为评估肾小球滤过率的较好指标，其在临床早期诊断肾功能损害中有着重要的意义。
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蛋白酶抑制剂范文第7篇
关键词：胰岛素;非注射途径给药;口服;吸入;粘膜给药;皮肤给药
1口服给药
口服给药是最方便最易接受的给药方式，符合生理顺应性的。
1．1胰岛素在消化道中的吸收部位 有报道其较好的吸收部位为小肠，另有报道在小肠中以回肠部位给药效果最好，降血糖百分率达56％ 。
1．2口服胰岛素制剂的药剂学问题 口服胰岛素制剂使其顺利到达最佳吸收部位，需要选择和研制合适的包衣材料、蛋白酶抑制剂、胰岛素吸收促进剂以及相应的载体。目前对包衣材料的研究，较多的是聚丙烯及其衍生物的醣醣类，它在体液中溶胀，不被机体吸收，对人体无害，它的不同类型和用量对药物释放的速度影响也不相同，最近有人实验证明，聚丙交酗胰岛素微囊(PLA-IICI)体外、体内实验都明显优于氰基丙烯酸异丁酯以及它的聚合物的胰岛素制剂，具有更好的安全性和生物利用度
1.2.1加入吸收促进剂，同样用氰基丙烯酸异丁醣做囊材，在包裹胰岛素的同时加入人体调钙素作为胰岛素的促吸收剂，通过大鼠肠道吸收实验证明，降血糖效果良好。
1.2.2加入酶抑制剂，在制成的胰岛素微球中分别加入酶抑制剂：抑肽酶、胰蛋白酶抑制剂、凝乳蛋白酶抑制剂、Bowman-Brik酶抑制剂，动物实验表明抑肽酶和Bovnnan-Brik酶具有明显的统计学意义。P(0．05)，降糖作用相对于对照组增加了50％以上。
1.2.3胰岛素的脂质体给药其可以降低药物的溶出速度，延缓药物的释放，如果同时加入不同剂量的去氧胆酸钠、胆酸钠、单硬腊酸甘油醣等表面活性剂和PVP等水溶性物质，改善载体的润湿性，则可以灵活调节载体中药物的释放速度。
2 吸入给药
将药物雾化后经口腔或鼻腔吸入，通过气管进入肺部的给药方式。
2.1吸入给药的给药方式基本相同但在制剂成份上有所区别，
2.1.1吸入粉雾剂，是将药物制成徽粉(固体)喷雾吸入
2.1.2吸入气雾剂，是将液体药物喷射成微小雾滴而吸入肺部。有人用胰岛素气雾剂给正常及糖尿病大鼠肺部给药，在同一剂量下，经吸入和气管内给药，其药理生物利用度在正常大鼠体内分别为6．96%和11．4%，在糖尿病大鼠体内分别为5．6%和8．7%。美国佛蒙特大学医学院教授1rillJam Cefalin博士对114例1型糖尿病患者采用吸入法，可以使他们每日胰岛素注射次数，减少到每日1次，或者免除注射胰岛素。
CETalu WT选择26例2型糖尿病患者，餐前吸入胰岛素，睡前注射长效胰岛素锌悬液，3个月血糖得到了明显的控制。
2.2吸入给药的潜在问题:
蛋白酶抑制剂范文第8篇
【摘要】 目的研究制半夏对基质金属蛋白酶-16（MMP-16）活性的抑制作用。方法根据抑制MMPs活性后底物降解速率降低的原理，通过检测底物降解速率，测定中药制半夏对MMP-16的抑制作用。结果与空白对照组及阳性对照组相比，制半夏具有较强的抑制MMP-16活性的作用，其抑制活性IC50=23 μg/ml。结论半夏水煎剂在体外具有抑制MMP-16活性的作用，其抑制活性较强，且存在剂量依赖关系。
【关键词】 制半夏； 基质金属蛋白酶； 酶活性分析； 抗肿瘤
Abstract：ObjectiveTo study the inhibitory action of pinelliae tuber on matrix metalloproteinase-16 (MMP-16).MethodsThe decreasing of the degrade rate of substrate is associated with the inhibition of matrix metalloproteinase-16. We studied the inhibitory activity of pinelliae tuber on MMP by observing the degrade rate of substrate. ResultsPinelliae tuber strongly inhibited the activity of MMP-16， and the IC50 was 23 μg/ml.ConclusionThe apozem of pinelliae tuber has inhibitory activity on MMP-16 in a dose-dependent manner in vivo.
Key words：Pinelliae tuber; Matrix metalloproteinase; Methods for the analysis of enzymatic activity
我国传统中药半夏Pinelliae tuber具有燥湿化痰、降逆止呕、消痞散结的功效。长期的临床实践表明半夏具有确切的疗效。半夏生品有小毒，临床上内服必须经过炮制或与生姜配伍以减轻毒性，故本实验所用半夏均为临床应用广泛的炮制半夏。基质金属蛋白酶（MMPs）是一类锌离子依赖的蛋白水解酶家族，能够降解细胞外基质成分，参与众多重要的生理和病理过程［1］。根据报道， MMPs活性的抑制对肿瘤细胞的行为有重要的影响［2～4］。本实验研究制半夏体外抑制基质金属蛋白酶－16活性的作用及抗肿瘤机理，从而为从分子水平上研究半夏的治病机理奠定基础，也为进一步从半夏中提取基质金属蛋白酶抑制剂提供实验依据。
1 器材
1.1 材料制半夏（吉林大学中日联谊医院中药房提供的道地药材），自制缓冲溶液（50mmol/L HEPES，0.2M NaCl，10 mmol/L CaCl2，20μmol/L ZnSO4，0.05 % Brij-35），荧光底物DQ-gelatin（美国Sigma公司），已知广谱MMP的抑制药物15 nmol/L GM6001。
1.2 仪器Bio-Red FLx-800荧光酶标仪(美国)， DPX-9082B-1 点热恒温培养箱(上海福玛实验设备有限公司)。
2 原理与方法
2.1 原理实验所用底物为荧光底物，酶降解底物后发荧光，通过荧光酶标仪检测反应体系的荧光强度变化。抑制活性的测定是在反应体系中加入半夏提取物，提取物中抑制成分与酶结合，占据酶的活性中心，使底物不能与酶结合，从而导致酶降解底物速率降低，荧光强度变化减慢。
2.2 方法
2.2.1 分组分为空白对照组（反应体系中不加入任何药物）、阳性对照组（反应体系中加入已知mmp抑制药物GM6001）、半夏水提物不同浓度组（加入不同浓度半夏水提物）。
2.2.2 提取物的制备将3 g半夏放入水中沸水煮3 h，然后过滤得到水煮溶液，将水煮溶液低温冻干，得到半夏水提取物。配制浓度为0.4，1.2，2，2.8和3.6 mg/ml的水提取物溶液。
2.2.3 抑制活性的测定将一定量的MMP-16分别与1 μl不同浓度的半夏水提取物（0.4，1.2，2，2.8和3.6 mg/ml）、1 μl无菌蒸馏水、1 μl 15nmol/L的GM6001加入96孔酶标板中，然后加入缓冲溶液（50mmol/L HEPES， 0.2 M NaCl，10 mmol/L CaCl2，20 μmol/L ZnSO4， 0.05% Brij-35），使终体积为50 μl，放入37℃培养箱中孵育30min，然后加入含有0.2 μg DQ-gelatin的缓冲溶液50 μl，最终反应体系为100 μl，制半夏水提取物最终浓度分别为4，12，20，28和36 μg/ml，立即用Bio-Red FLx-800荧光酶标仪进行检测，激发波长为460 nmol/L发射波长为520 nM。检测10 min。检测的荧光强度变化就代表酶降解底物活力的强弱。
2.2.4 抑制活性计算Vi代表加入抑制剂组的荧光强度变化，用Vo代表没有加入抑制剂组的荧光强度变化，抑制剂的抑制百分数用下边的公式计算：抑制百分数（%）=1-Vi/Vo ，当抑制百分数为50%时，则为此抑制剂抑制酶活性的IC50。
3 结果
图1～7分别是空白对照组与半夏水提物浓度分别为4，12，20，28和36 μg/ml的实验组及阳性对照组的测定结果，图中“Mean V”表示随时间变化的荧光强度的变化速率，可以作为相对的底物降解速率，根据实验方法中所给出的公式，能够计算出不同浓度的半夏提取物对MMP-16的抑制百分数。通过以上数据，能够推测MMP-16的活性抑制50%时所需要的半夏的量，见图8，IC50=23 μg/ml。
图1 空白对照组（略）
图2 4μg·ml-1半夏水提物的测定结果（略）
图3 12μg·ml-1半夏水提物的测定结果（略）
图4 20μg·ml-1半夏水提物的测定结果（略）
图5 28μg·ml-1半夏水提物的测定结果（略）
图6 36μg·ml-1半夏水提物的测定结果（略）
图7 阳性对照组的测定结果（略）
图8 不同浓度的制半夏抑制活性的分析（略）
4 讨论
MMPs是锌肽酶家族的一员，是组成结缔组织细胞外基质降解过程中必不可少的酶，几乎能降解细胞外基质的所有成分，在体内多种生理和病理过程中起重要作用［5］。在创伤愈合、骨质再吸收、怀孕和分娩以及乳腺萎缩等与组织重塑有关的生理过程中均有MMPs的参与［6］，而在类风湿性关节炎、骨关节炎、角膜溃疡、牙周疾病、动脉粥样硬化、心肌梗塞、神经退行性疾病如多发性梗塞等以细胞外基质过度破坏为主要特征的病理过程中MMPs亦发挥重要作用［7］。MMPs的表达和活化与肿瘤的生长、侵袭和转移呈正相关，在恶性肿瘤中MMPs经常过度表达［8］。基于此，MMPs已成为恶性肿瘤治疗的一个新靶点。 目前几种广谱、低分子量的用于数种类型的肿瘤治疗的MMP抑制剂已被临床评估。虽然这些小分子药物在临床前的动物实验中能高效地抑制MMP的活性并有效地阻止肿瘤的生长和转移，但是其价格昂贵，并且在临床应用中表现出了强烈的副作用，最终导致后期临床的失败［9］。其原因可能在于这些抑制剂的特异性不强，对于许多其它种类的MMP的正常生理功能也起了不同程度的影响。因此，寻求高效的、特异性强的MMP抑制剂是这个领域当前工作的重点，也是目前国内外开发抗癌药物的热点。半夏在我国的临床应用历史悠久，价廉易得，成分分离工艺简便，药效记录多，安全性和毒副作用有验证，这些优势是合成化合物所无法比拟的。本实验表明，制半夏水煎液具有抑制MMP-16活性的作用， 其抑制活性IC50=23μg/ml，与空白及阳性对照组抑制活性相比后发现，在体外半夏抑制MMP-16活性的作用较强，且其抑制强度存在剂量依赖关系，水煎液的浓度越大，抑制作用越强。实验结果为从分子水平上研究半夏治疗相关疾病的机理奠定了基础，也为今后进一步从半夏中提取基质金属蛋白酶抑制剂并开发出以MMPs为靶点的中药新药提供了理论依据。 针对MMP-16的抑制效果已经完成，针对其他种类的MMPs的抑制效果仍有待进行，我们将以MMPs的抑制活性为指导，继续分离、鉴定出半夏中的MMPs抑制成分。
【参考文献】
［1］ Uta B. Hofmann， Roland Houben， Eva-B，et al. Role of matrix metalloproteinases in melanoma cell invasion［J］. Biochimie， 2005，87:307.
［2］ Ming-Chung Jiang， Ching-Fong Liao ， Po-Huang Lee. Aspirin Inhibits Matrix Metalloproteinase-2 Activity， Increases E-Cadherin Production， and Inhibits in Vitro Invasion of Tumor Cells［J］. Biochemical and Biophysical Research Communications， 2001:282， 671.
［3］ Ki-Tae Ha， Tae-Kyun Lee， Keum-Hwa Kwak，et al. Inhibitory effect of Cho-Deung-San on human aortic smooth muscle cell migration induced by TNF-a through inhibition of matrix metalloproteinase-2 and -9 activity［J］. Vascular Pharmacology，2004，41: 83.
［4］ Risto Ala-aho，Veli-Matti Khri. Collagenases in cancer［J］. Biochimie，2005，87: 273.
［5］ 陈华江，乇军杰.基质金属蛋白酶的结构及其调节机制［J］.国外医学·肿瘤学分册，2001，28(1):20.
［6］ Kugler A.Matrix meta11oproteinases and their inhibitors［J］.Anticancer Res．1999，19(2):1589．
［7］ Veli—Matti K，Saarialho-kere U. Matrix metalloproteinases and their inhibitors in tumor growth and invasion［J］. Ann Med，1999．31(1):34.