高效液相色谱仪
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高效液相色谱仪范文第1篇
一、高效液相色谱仪及其技术简介
高效液相色谱（HPLC)也叫高压液相色谱、高速液相色谱、高分离度液相色谱等。是在经典液相色谱法的基础上，于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效，但会引起高阻力，需用高压输送流动相，故又称高压液相色谱。又因分析速度快而称为高速液相色谱。
高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱(固定相)内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动时，经过反复多次的吸附-解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器(能检测色谱柱流出组分及其量的变化的器件。指机械的、电子的或化学器件，用于区分、记录或指示环境中某一变量的变化，如温度、压力、电荷、电磁辐射、核辐射、粒子或分子等。)时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来。
二、高效液相色谱仪的应用
高效液相色谱仪在水环境监测中的应用主要分为三个方面：一方面是对传统监测项目指标的监测；一方面是针对水体中的有机物进行监测；另一方面是利用其高效分离的技术特点在对水体中污染物质总量的监测的基础之上对不同价态及其形态的污染物进行分类定量监测。
（一）对传统污染物的监测
对传统污染物的监测主要是针对日常水体中常见污染物的重点监测。根据国家的相关要求及其本站的实际监测条件，对水体中主要污染物的监测包括了重金属元素（铜、锌、砷、汞、镉、铬等）、营养元素（氮、磷、钾等）、特殊元素（硒、氯、硫等）。通过如上监测对水体的日常污染状况进行把握与评价。同时，传统污染物的监测还包括了对特定企业排污点的污水监测，作为其环保达标的重要依据。
（二）对水体中的有机物
在传统的污染物的基础之上工业以及农业淋容等多方面因素会对水体中造成一定的有机物污染，在针对有机物的污染监测过程中传统的监测方法无法在精度与效率方面达到要求。在此方面应用高效液相色谱仪在对有机物进行定型的同时进行定量的监测。主要监测的项目包括了，工业有机污染物（氰化物、）挥发酚、石油类、总有机物等）、农业有机物（如杀虫剂、除草剂、消化抑制剂）、特殊有机物（微生物代谢物、医疗污染物、生活污水等）。针对如上的有机物监测一方面能够对水体中有机污染现状进行评价，另一方面可以鉴别污染物种类进而对排查污染源提供一定的帮助。
（三）对不同价态及其形态的污染物的监测
同种化学元素的不同存在价态以及形态对其生物毒性的影响至关重要。比如铬元素在水体中存在三价与六价之分，其中三价铬毒性较小且对在较大浓度范围内对人体有益，而六价铬则表现为较强的生物毒性，在较低浓度下对人体造成较大危害。在水环境的监测过程中传统的六价铬的监测方法是利用六价铬与二苯碳酰二肼的显色反映进行检测的。这种检测方式由于收到氧化还原条件的影响容易造成较大误差，进而使得对水体环境的判断失准。采用高效液相色谱仪能够同时监测同种元素的不同价态进而对水体的污染物及其毒性进行更好的定量分析，为后续的环境评价与治理奠定基础。
三、高效液相色谱仪的特点
（一）高效液相色谱仪的准确性
与传统的检测方法相比较，高效液相色谱仪具有更高的准确性，这种准确性主要表现在两个方面：一方面高效液相色谱仪为全自动检测仪器，在避免了人为误差出现的同时降低了机械误差。而机械误差经过标准物质的校订之后可以得到很好的控制，这就决定了高效液相色谱仪在监测过程中误差较小。同时，在另一方面高效液相色谱仪在监测原理上同样优于传统的监测方法，以火焰原子吸收测量水体中的重金属浓度为例，其以火焰原子激发的峰值为测定浓度结果，在测定过程中的波动式消耗会使得测量结果较实际浓度偏低的现象。而采用高效液相色谱仪则是利用全部曲线的面积来代替相对体积内的总量，在计算优化方面更具备准确性。
（二）高效液相色谱仪的高效性
高效液相色谱仪的高效性主要表现为三个方面：
1、高效液相色谱仪的检测效率本身，样品从进样到出结果仅需要30秒作用的时间对于单向测定，此时间还具有一定的下降空间。
2、高效液相色谱仪的多重测定效率。在针对多项目的测定过程中。利用高效液相色谱仪进行测定可以单次进样多指标共同检测的效果，大大的降低了进样的重复性工作，提高了整体的工作效率。 3、高效液相色谱仪的连续进样机制，在前一样品转移到检测室后，后一样品既可以做进样处理，在监测相同的项目指标的情况下，连续进样与单独进样的监测效率提高越30%。
此外，通过高效液相色谱仪与质谱仪的连用可以实现在定量分析的基础之上进行定性的监测。一方面省略了定性检测的二次步骤，另一方面降低了样品前处理的难度与过程。进而，降低了监测的时间。
（三）高效液相色谱仪的广泛性
高效液相色谱仪的广泛性主要表现为对监测物质的广泛性，其监测项目几乎涵盖了水体环境监测的所有基础项目。包括了重金属的测定、营养元素的测定、其他离子的测定、不同价态的测定、有机物的测定等等诸多方面。尤其是其针对有机物的测定方面还可以细致划分为多环芳烃类化合物的测定、酚类化合物的测定、苯胺类化合物的测定、邻苯二甲酸酯类化合物的测定、氯联苯和卤代化合物的测定、苯基脲类化合物的测定、酞酸酯类化合物的测定等等。几乎涵盖了所有类别的污染物种类，使得在实际的操作过程中可以根据不同的监测目标与监测目的进行合适的项目选择。
四、高效液相色谱仪的应用前景
（一）与评价软件连用
高效液相色谱仪与评价软件连用主要是利用高效液相色谱仪的数据收集功能以及数据计算功能。在高效液相色谱仪对数据计算的基础上结合电脑的评价软件对获得数据进行进一步处理的过程。通过与评价软件的连用可以达到在监测的过程中根据不同的监测目的进行合理的评价结果输出的方式。进一步使得环境监测具有高效化与准确性。
在具体的操作层面其可能应用主要分为两个方面：一方面是利用评价软件的评价功能对超标样品进行筛选。在测定前利用标准物质对环境标准进行测定。而在测定的过程中利用评价软件的筛选功能自动对超标样品进行报警或者标红处理，而对于未超标样品则可以采用忽略的处理方式。最终的数据输出结果为超标样品编号与浓度。这样能够有效的降低环境监测站的工作强度。
另一方面是利用预设的国家标准以及不同污染物的环境效应权重针对同一样品的权指标测定项目进行评价报告的生成。在测定的过程中自动的对比国家环境标准，进而生成科学的环境评价报告，为后续的环境治理提供一定的依据。
（二）与质谱仪连用
高效液相色谱仪只能够定性的分析被监测物质，或者通过对吸收光谱的设定来测定特定物质的浓度，而对于未知物质的监测则存在一定的不足。此方面的缺陷使得其在使用的过程中测定项目具有一定的盲目性。通过高效液相色谱仪与质谱仪的连用可以在同一样品测定的情况下测定未知样品中的特定物质种类以及物质浓度。方便并拓宽了水环境监测的广度。
（三）与连续进样装置的连用
高效液相色谱仪具有一定的连续进样能力。但是，此种进样依旧采用手动的模式进行。在手动模式下，一方面对进样效率的提高程度不显著。另一方面则表现为对进样的准确程度不精确。因此，采用高效液相色谱仪与连续进样装置的连用在进一步提高工作效率的同时，保障了进样的准确性与测定的自动化程度。在效率与精度方面对高效液相色谱仪的检测均是一种提高。
高效液相色谱仪范文第2篇
关键词：高效液相色谱仪自动进样器校准方法；不确定评定；测量方法
一、高效液相色谱仪自动进样器校准方法
1.高效液相色谱仪自动进样器校准方法的引进条件
众所周知，测量始终是分析某物质不可避开的方法，并且也是确定物质各项指标是否合格，以及各成分，还有个成分之间如何发生反应以及之后的各项指标的重要方法，但是单一的测量方法存在着很多的不足之处，而在测量之中任何一点小的纰漏都有可能造成最后的巨大损失，所以在现实的严峻条件之下，为了更好更全面地发挥测量的效果和应有的准确度，引进了高效液相色谱仪自动进样器校准方法。在此之前，国际标准化组织（ISO）曾于1993了《测量不确定度表示指南》，这样的标准曾是国际上用于测评物品的最低准则，而高效液相色谱仪自动进样器校准方法也是在严格依据指南上的说明来进行创造发明的方法，也正是因为这样的标准使得高效液相色谱仪自动进样器校准方法在起点之处的效果就高于普通的校准方法。此外，国家质量技术监督局也曾于1999年批准颁布过JJF1059-1999《测量不确定度评定与表示》。而这之中德CNAL/AC01∶2005《检测和校准实验室认可准则》（等同于ISO/IEC17025∶2005）中5.4.6对有关不确定测量的相关方法进行了明确的规定，包括对实验室中应有的用于测量的设备配套设施，还有在测量之中应该遵循的程序守则。也正是因为这种测量效果的有效性和权威性，在基本的测量方法被普及之后，各大报告中均要求在最后提交的时候附上关于高效液相色谱仪自动进样器校准方法及不确定评定的评价结果，举一个明显的例子，在参加能力验证和比对中，就要求附上不确定评定的最后结果。
2.高效液相色谱仪自动进样器校准方法的具体操作原理
高效液相色谱仪自动进样器校准方法一般采用的方法，是根据液体的最小浓度来进行差量检测，而根据国家的的对于液体的最新研究显示，液体中的浓度的测量时液体中最敏感的地方，其敏感度超过了所有的其他指标，是能够准确得出测量结果的标杆，也因此成为了测量的最重要的指标之一。在测量中，利用高效液相色谱仪自动进样器校准方法来进行基本的测量，然后再通过对测量的结果进行分析合成，就能得到初步的结果。试验条件之下对液体的最小浓度的检测，在达到了一个极点之后，整体上就会成为一个饱和的状态，在这种饱和状态之下的液体很难检测出所想要的数据和效果，所以在液体到达饱和状态之前就必须要能够测量出有效地的结果，这就对测量的时间效应有了严格的要求，而高效液相色谱仪自动进样器的优势之一就是其对时间的把握度能够高于普通的仪器，这样不仅能够节省相应的时间，也能够在保证试验效果的同时，尽量避免对检测物品的浪费，（因为一旦物品至于空气之下，则会很开与空气产生化学反应，在这样的化学反应之下，不仅是液体的纯度会发生变化，需要检测到的液体的相关数据也会因为化学反应产生质的变化，这样便会导致最后的测量结果出现差错）
除此之外，最新发表的欧洲《质量控制文件》中也提供了具体的供高效液相色谱仪自动进样器校准方法如何操作和具体的流程做出了详细的解释和说明。在参考控制文件之中，提出了通过高效液相色谱仪自动进样器校准方法在进行测量的时候，应该对被检测的液体的体积，残体，密度等进行具体的测量，而在测量之后还应该进行至少5次以上的重复测量，在这样的测量结束之后，建立相关的体积误差，残液留样的数据分析对比，并且通过重复性检测建立复式校准方法，最后保证经评定之后的效果进样体积误差的相对扩展不确定度为1.8%。通过具体的标准对检测结果进行限定，不仅能够提高检测的效率，还能减少成本的使用你，是一个利益双得的两全之法，同时这样的检测结果标准规定也是为之后的高效液相色谱仪自动进样器的校准进行其他类似的校准时准去的依据保证和方法经验的提供。
二、高效液相色谱仪自动进样器校准方法及不确定度评定的具体效果演示说明
1.测量果冻中环己基氨基磺酸钠中对高效液相色谱仪自动进样器校准方法及不确定度评定的使用
环已基氨基磺酸钠俗称甜蜜素，是一种人工合成的无营养性食品甜味剂。因长期存在甜蜜素是否具致癌性的争议，英国、美国、欧盟、加拿大等国家和地区的食品中甜蜜素的添加均规定了允许的含量，日本则不允许使用。近年来，我国也将甜蜜素列入为限制使用的食品添加剂。它的基本性质效果是能够在水中微溶，但是在甲醇、乙醇、氯仿或二氯甲烷等强酸性物质中几乎不溶。适当的使用中环己基氨基磺酸钠可以达到对产品增味的效果，但是一旦使用过量，就可能会造成严重的急性过敏反应，或者是严重的腹泻，更甚者甚至会威胁人的生命安全，虽然现代医疗技术已经找到相应的方法能够及时处理这样的情况，但是如果一旦事情发生的太过于迅速或者用量过大，就很难能够避免意外情况的发生，因此，对环己基氨基磺酸钠应该在果冻中使用多少何其的具体效果和可能出现的情况进行测量就有了战略性的意义。
2.测定果冻中环己基氨基磺酸钠中使用的具体参数
检测中所需要的化学数据建立在基本的数学模型之上，而使用到的基本公式就是
CX = × ×100% （1）
式中：CX――供试品的含量；
AR――对照品的峰面积
AX――供试品的峰面积
WR――对照品浓度（g）
WX――供试品浓度（g）
这个基本的公式适用于计算产品中检测出的结果时的对具体的产品数据进行分析的时候使用，是在检测之后需要用到的工具。
检测之前需要用到的工具包括电子天平，特定的试管若干，同时还应该注意的是对室内温度的控制，一般在二十五摄氏度左右，同时控制液体在液箱中的流速大概为1.0ml/min ，在做好了基本的设施准备之后，应该注意的就是在实验过程中进行数据的准确计量。在实验中会用到的数据一般有：波长，样品和对照样品的量度，样品和对照样品的浓度，两种样品的平均峰面，对照样品的实际浓度和在掺水之后的产品变量的浓度，供应品的含量，其中对对照品纯度的控制要在：99.5%以内 ；对样品中含水量的控制要在：4.9%以内。在计算之后，除了基本的检查核算以确保测量的结果无误，还应该进行合成标准不确定度的计算，一般来说这样的计算主要是为了计算重度，举一个简单的例子，在各项条件符合标准的状况下，合成标准不确定度的计算结果应该是类似于下面的结果：
uc（Cx）=
= =0.021
uc（CX）=100.41%×0.021=2.1%
最后，在计算结果的基础上扩展不确定度计算，在进行完最后一步之后，按照标准流程提交报告。
参考文献：
[1]王冠杰，季士委，田利，曹守春，邹健，杨洋.高效液相色谱仪自动进样器校准方法及不确定度评定[J].化学分析计量，2013，05：69-71.
高效液相色谱仪范文第3篇
关键词：农产品安全检测 仪器分析方法 未来趋势
农产品是人们懒以生存的必备食物，但是近年来由于农药残留等影响农产品安全问题的不断出现，使得农产品安全检测成为关注的焦点。随着社会生产力的不断进步，社会生产技术不断创新发展，在农产品的生产过程中，越来越多的现代化技术被广泛应用，从农作物的种子培育到栽种，再到生长发育，最后到农产品产出，每一个步骤都已经浸透了各种现代化的技术，这些现代化技术使得农产品生产过程简便，耗费劳动力少，产量增加，但是同时，也给农产品安全问题带来了未知或者已知的威胁。其中，过量化肥以及农药的使用是已知的影响农产品安全问题的重要因素。所以农产品安全检测受到越来越广泛的关注，传统的人工检测方法已经不能满足日益增长的安全隐患检测需要，所以在目前农产品安全检测方法中，最为常用的仪器分析方法。本文主要探析农产品安全检测仪器分析方法及未来趋势。
一、仪器分析方法
在农产品安全检测中，仪器分析方法具有灵敏性强、检测速度快以及准确性高等特点，已经逐步取代传统的人工检测方法，成为最常用的农产品安全检测方法。目前，在实际使用过程中，经常将多种仪器以及多种仪器分析方法结合起来使用，以达到更精准更快速的检测目的。其中，常用的仪器分析方法主要有：光谱仪器分析方法（包括荧光仪器分析法、紫外—可见分光光度分析法、原子吸收分光光度分析法以及红外光谱仪器分析法等）、色谱仪器分析方法（包括色谱质谱仪器联用分析技术、气相色谱仪器分析方法以及高效液相色谱仪器分析方法等）、生物传感技术、高效毛细管电泳仪器分析法以及氨基酸自动仪器分析法等。
二、农产品安全检测仪器分析方法
本文主要探析几种常见的农产品安全检测仪器分析方法：包括色谱仪器分析方法以及光谱仪器分析方法。
1.光谱仪器分析方法
光谱仪器分析方法包括荧光仪器分析法、紫外—可见分光光度分析法、原子吸收分光光度分析法以及红外光谱仪器分析法等。
紫外—可见分光光度分析法：该方法是利用电子仪器使农产品产生紫外—可见吸收光谱，紫外—可见吸收光谱是农产品在吸收电磁辐射波（波长要在两百纳米到七百五十纳米之间）后产生的光谱。该方法主要用于检测农产品中含有的铁、锌、铜以及铅金属矿物离子等是否超标。
原子吸收分光光度分析法：是利用离子发射光谱仪发射等离子体，使用等离子体最为激光发射源，分析检测农产品的原子吸收光谱，检测其中含有的铜锌等金属离子，以及锗、锶以及硒等稀有元素。
红外光谱仪器分析法：该方法能够检测农产品中含有的水分、脂肪、蛋白质、纤维素、氨基酸以及灰分含量，还能够检测出农产品中含有的保鲜剂以及防腐剂成分，而且还能够检测农产品经过加工后的质量等。
荧光仪器分析法：该方法主要用于检测农产品中的铅离子。
2.色谱仪器分析方法
色谱仪器分析方法主要包括色谱质谱仪器联用分析方法、色谱核磁共振仪器联用分析方法、气相色谱仪器分析方法以及高效液相色谱仪器分析方法等。
色谱质谱仪器联用分析方法：质谱仪的原理是利用一束电子流攻击被检测物体，然后将形成的正离子碎片图谱记录下来，产生定量质谱图。该方法是利用质谱图对农产品的组成成分进行分析检测，在对农药残留的检测上发挥着重要作用。
色谱核磁共振仪器联用分析方法：核磁共振成像形成共振波谱，能够显示农产品中含有的不同类型氢原子的情况，这就可以从中看出农产品中含有影响安全的物质。
气相色谱仪器分析方法：是一定温度条件下，该方法可以将农产品中含有的部分化学物质气化、快速分离并检测出来，适用于检测农产品中含有的兽药残留、农药残留以及氨基酸等化学物质。
高效液相色谱仪器分析方法：该方法应用非常广泛，具有快速高效等特点，主要是利用液相色谱仪检测农产品中含有的营养成分、毒素、添加剂、污染物、农药残留以及兽药残留等。据了解，有约80%的化合物可以通过液相色谱仪进行分离检测。
三、农产品安全检测仪器分析方法的未来趋势探析
随着现代化技术的不断发展，农产品安全检测仪器分析方法也越来越先进，其未来趋势主要表现在以下几个方面：检测仪器更加灵敏，检测仪器体型更小、智能化加强，所需的检测环境趋近常态等。
检测仪器更加灵敏：据目前仪器分析方法中使用的检测仪器发展趋势来看，检测仪器将越来越精密、灵敏性越来越强，选择性将越来越高，并且可能将会不断推出具有特殊用途的检测仪器。
检测仪器体型更小、智能化加强：这是未来检测仪器的核心发展趋势，检测仪器将会趋向微型智能化发展，并且其使用程度也会越来越普及，方便携带、使用简单，技术化越来越强，越来越多的使用高新技术，非传统仪器技术（例如非破坏、非侵入、在线、多维、多参数、原位以及高通量等分析仪器）将被更广泛使用。
所需的检测环境趋近常态：目前仍存在一些检测仪器需要在一定温度或者一定压强的环境中才能发挥作用，但是同时人们也研制出了新的不需要特殊环境的检测仪器，在未来，能够在常温常压检测农产品安全是仪器分析方法发展的另一个方向。
四、结论
随着农产品安全问题的不断发生，安全监测仪器分析方法开始被广泛关注，本文主要探析了农产品安全检测仪器分析方法以及其未来趋势，农产品检测仪器分析方法主要包括：色谱仪器分析方法、光谱仪器分析方法以及其他仪器分析方法。其未来趋势主要包括：检测仪器更加灵敏，检测仪器体型更小、智能化加强，所需的检测环境趋近常态等。
参考文献
[1]李亮辉，叶健强，程勇，等.现代仪器分析在食品安全检测中的应用[J].科技资讯，2012，14：225.
高效液相色谱仪范文第4篇
蛋黄馏油为雉科动物家鸡的卵煮熟后剥取卵黄，经加热熬炼而得的棕褐色或黑褐色的油状液体。近代关于蛋黄馏油中的主要成分国内国外进行了很多研究，发现其中含有抗菌的活性物质，即哈尔满等生物碱成分，这与蛋黄馏油临床主要用于治疗真菌所致的癣类皮肤病，湿疹，烧伤，静脉曲张性溃疡等症相符。本实验建立了以高效液相法测定蛋黄馏油中哈尔满的含量测定方法,该方法具有准确、灵敏、方便、快速的特点，为蛋黄馏油新工艺的考察和制定其质量标准提供了条件。
1 仪器与试剂
1.1 仪器 岛津LC―10AT高效液相色谱仪
1.2 原料 雉科动物家鸡(Gallus gallus domesticus Brisson)的蛋煮熟后剥取的蛋黄。
1.3 试剂 磷酸三乙胺、甲醇（色谱纯），水为重蒸馏水, 哈尔满对照品（98%），其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件色谱柱：日本岛津Shim-pack，clc-ODS（6.0mm×150mm，5μm）；流动相：甲醇―磷酸三乙胺(20：80)，流速1ml/min，柱温：30℃；检测波长：230nm。
2.2 对照品溶液的制备：精密称取哈尔满对照品适量，加甲醇制成0.0396 mg•ml-1的溶液。
2.3 线性关系考察：精密吸取浓度为0.0396mg•ml-1的哈尔满对照品溶液1.0,2.0,3.0,4.0,5.0μL，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积积分值为纵坐标，哈尔满对照品进样量为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程如下：Y=48540.4547x+54126.4797,r=0.9997。结果表明，哈尔满的进样量在3.96～19.80μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。
Table1
2.4 精密度实验：精密吸取对照品溶液5ul，注入高效液相色谱仪，连续进样5次，测定哈尔满色谱峰峰面积，结果表明，精密度良好，RSD＝2.05％ (n＝5)。
Table2
2.5 供试品溶液的制备：取蛋黄馏油30g加入适量乙醚，5%的盐酸萃取；酸水层加入氢氧化钠溶液调至pH=10,乙醚萃取；蒸干乙醚，溶于5%的盐酸后再加入适量氯仿萃取，取酸水层，再加入氢氧化钠溶液调至pH=10后，加入适量氯仿萃取，取氯仿层，蒸干氯仿。溶于少量甲醇后移至100ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，过0.45μm滤膜，滤液备用。
2.6 重复性实验：精密称取同一批样品各5份，分别按2.4项下方法操作，精密吸取各供试品溶液5ul，分别注入高效液相色谱仪，测定。结果样品平均含量为0.0037%，RSD＝1.91％(n＝5)。
2.7 稳定性实验：精密吸取同一供试品溶液，按0、2、4、8、16h时间间隔，分别进样，测定哈尔满色谱峰峰面积，结果表明，样品溶液在32h内保持稳定，RSD＝2.63％ (n＝5)。
Table4
2.8 样品含量测定：取5个样品，按供试品溶液的制备方法制备，按上述色谱条件，精密吸取供试品溶液和对照品溶液各5ul，注入高效液相色谱仪，进行测定。
Table5
3 讨论与结论
本实验首次采用高效液相色谱法测定了 蛋黄馏油中哈尔满成分的含量，为蛋黄馏油新工艺的考察和制定其质量标准提供了条件。
高效液相色谱仪范文第5篇
【关键词】开胃理脾;口服液;含量测定
开胃理脾口服液是根据《卫生部药品标准•中药成方选》第七册开胃理脾丸剂改为口服液,原剂型为蜜丸剂,临床实验表明:口服液较丸剂更利于被人体吸收利用,疗效快,效果好,将其改成口服液后,提高药品质量标准,更利于控制药品的生产质量,所以笔者进行了含量测定方法学研究。
1 材料与仪器
仪器设备:HP1101型高效液相色谱仪
开胃理脾口服液 本制剂室制
所用试剂均为湖南化工研究所生产
2 实验方法
本处方原剂型并没有含量测试项目,为进一步控制产品的质量,选择对其口服液中芍药苷进行含量测定,作为质量控制的指标,采用高效液相色谱法进行检测。参照中国药典2005版白芍含量测定,选择了含量测定方法学研究。
仪器设备:HP1101型液相色谱仪
色谱柱:Zirchrom C185μm250×4.6 mm[1]
流动相:乙腈:0.1 mol/L磷酸二氢钠溶液(14:86)[1]
检测波长:230 nm[1]
流速:1.0 m/min[1]
2.1 对照品溶液的配制 取在五氧化二磷减压干燥器中干
作者单位:427301张家界市第二人民医院药剂科
燥36 h芍药苷对照品适量,加甲醇制成每1 ml约含0.16 mg芍药苷的溶液,摇匀,即得。
2.2 供试品溶液的制备
2.2.1 用石油醚脱脂的考察 分别取同一批样品20 ml,分不脱脂及石油醚萃取1次、2次、3次按上述色谱条件进行考察。操作过程同供试品溶液的制备及测定。
表1
石油醚脱脂考察结果
条件结果
不脱脂样品杂质峰分离不完全,时间拖得长
脱脂1次较上稍有改善
脱脂2次较上稍有改善
脱脂3次样品杂质峰减少,分离较完全,图谱较美观
从以上试验结果可以看出,用石油醚脱脂3次,能得到较好的分离效果,故选择用石油醚脱脂3次。
2.2 正丁醇萃取次数的考察 分别取同一批样品20 ml各3份,用石油醚脱脂3次,每次20 ml进行试验,然后分用水饱水正丁醇萃取1次、2次、3次每次20 ml,进行考察,操作过程同供试品溶液的制备及测定。
表2
正丁醇萃取次数考察结果表(次,%)
次数1234
含量(%)0.0540.0740.0850.086
从以上数据可以看出,萃取3次,较前2次完全,第4次颜色较淡,基本萃取干净,故选择萃取3次。
2.3 阴性样品的制备 按处方工艺照上述已确定的方法,制得阴性样品溶液,照前色谱条件进行检测。
经检测,阴性样品在芍药苷对照品出峰保留时间位置,没有出峰,说明阴性对芍药苷含量测定无干扰。
2.4 线性关系的考察 精密称取置五氧化二磷干燥器中干燥36 h的芍药苷对照品13.4 mg于25 ml容量瓶中,用甲醇适量使溶解,并用甲醇稀释至刻度,精密量取1 ml、2 ml、3 ml、4 ml、5 ml分别置10 ml容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,分别取各溶液20 μl注入高效液相色谱仪,记录色谱图。
表3
芍药苷线性关系图
12345
进样浓度mg/ml0.05360.10720.16080.21440.2680
进样量μg1.0722.1443.2164.2885.36
峰面积1346778.52677851.64056648.45385318.97007407.9
以进样量为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线为:
y=1308649.82x113816.8 r=0.9993
试验结果表明:本方法线性关系较好。
2.5 溶液稳定性考察 取同一批按供试品处理好的口服液样品溶液,分别于0、1、2、4、8 h各取样20 μl注入液相色谱仪,记录色谱图,观察其样品的峰面积,考察样品溶液的稳定情况。
表4
时间(h)01248
峰面积4486301.24472839.54492444.44511269.54515527.6
试验结果表明:本样品溶液在8 h内能够基本保持稳定。
2.6 回收率试验 按供试品溶液的制备方法,取20 ml样品6份,分别用石油醚脱脂3次后,用水饱和的正丁醇萃取3次,每次20 ml,合并正丁醇液,用正丁醇饱和水溶液,洗涤1次,水浴挥干正丁醇,残渣用甲醇溶解定容至10 ml容量瓶中,过滤,取续滤液5 ml分别置10 ml容量瓶中,分别加入芍药苷对照品溶液(0.25 mg/ml)1.0 ml、2.0 ml、3.0 ml按上述色谱条件测定,分别取20 μl注入液相色谱仪,并记录色谱图。见表5。
2.7 精密度试验 取按供试品溶液的制备方法制得的同一份样品溶液,连续6次,分别取20μl注入液相色谱仪,检测,并记录色谱图。见表6。
2.8 重复性试验 取同一批样品6份,按供试品溶液的制备方法制得,分别取20 μl,注入液相色谱仪,检测,并记录色谱图。见表7。
表5
回收率试验结果表
序号样品中芍药苷含量(mg/ml)加入对照品量(mg)测得量(mg)回收率(%)平均值(%)RSD(%)
10.0860.251.0897.398.550.90%
20.0860.251.0998.2
30.0860.501.3498.5
40.0860.501.3498.5
50.0860.751.5998.8
60.0860.751.61100.0
测试结果可知:本法回收率较好
表6
精密度试验结果表
次数123456
峰面积4525523.64513713.14484158.54506657.84485992.84517099.5
平均值(%)4505524.2
RSD(%)0.38
试验结果可知:本法精密度较好
表7
重复性试验结果表
序号对照品123456
峰面积4056648.44604971.34661240.54514570.74469140.94376047.14389806.5
含量(%)0.0910.0920.0890.0890.0870.087
平均值(%)0.089
RSD(%)2.29
试验结果可知:本法重复性较好
表8
批号含量(%)平均值(%)
0804260.0910.0920.092
0804280.0940.0970.095
0805010.0870.0910.089
0805050.0880.0870.087
0805070.0820.0810.081
0805090.0920.1000.096
2.9 几批样品的检测结果见表8。以上几批样品的含量均在0.080 mg/ml以上,故制定质量标准为每1 ml口服液中,以芍药苷计,不得少于0.08 mg。
3 讨论
通过试验,确定了用石油醚脱脂的考察、正丁醇萃取次数的考察,确定了供试品的制备方法;通过按开胃理理脾口服液制备工艺,取除白芍的其余药材制得的阴性样品,经检测,阴性样品对测定结果表干扰,见附图1。通过线性,溶液稳定性试验,回收率,精密度,重复性试验,试验结果表明,本品可以用高效液相色谱法进行开胃理脾口服液的含量测定,通过几批样品的含量测定,可以确定本品的含量限度。本品的含量测定方法学结果为:
【含量测定】照高效液相色谱法(中国药典2005年版附录ⅥD操作)。
色谱条件与系统适应性试验:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,检测波长为230 nm,理论塔板数按芍药苷计算应不低于3000。
对照品溶液的配制:精密称取在五氧化二磷减压干燥器中干燥36 h的芍药苷对照品适量,加甲醇制成每1 ml含芍药苷0.16 mg的溶液,摇匀即得。
供试品溶液的制备:精密量取口服液样品20 ml,用石油醚脱脂3次,每次20 ml,水层用水饱和正丁醇萃取3次,合并正丁醇液,再用正丁醇饱和水溶液洗涤1次,水浴挥干正丁醇,残渣用甲醇定量至10 ml容量瓶中,即得。
测定:分别精密量取对照品溶液与供试品溶液各20 μl,注入液相色谱仪,测定。以外标法计算芍药苷含量,即得。
本品每1 ml以芍药苷计,不得少于0.08 mg。
A.芍药苷对照品 B.开胃理脾口服液 C阴性样品溶液
参 考 文 献
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典.人民卫生出版社,2005,11,10.
[2] 赵陆华.高效液相色谱法分析中药成分手册.中国医药科技出版社.
[3] 詹正高.新药研究开发与应用.人民军医出版社.
高效液相色谱仪范文第6篇
关键词：奥美拉唑肠溶片；含量测定；HPLC
DeterminationofOmeprazoleEnteric-coatedTabletsbyHPLC
WENGShui-wang，SHAJi-da，etal.（FujianProvincialInstituteforDrugControl，Fuzhou，350001）
ABSTRACT：Ahighperformanceliquidchromatographymethodwasestablishedtodeterminethecontentsofomeprazoleinitsenteric-coatedtablets.TheanalyticalcolumnwasWatersNova-PakC18.Themobilephasewasconsistedofthephosphatebuffer（pH7.6）-ocetonitrile（75：25）.Thedetectionwavelengthwassetat302nm.Thecaliblationcurvewaslinearintherangefrom0.10μgto0.81μg，γ＝0.9999.Theaveragerecoverywas100.1％，withRSDwas1.19％.Themethodissimple，rapid，accurateandreproducible，andcanbeusedforthedrugcontrol.
KEYWORDS：Omeprazoleenteric-coatedtablets；Contentsdetermination；HPLC
奥美拉唑（Omeprazole）是一种新型的胃酸分泌抑制剂，能阻滞胃酸分泌的终末步骤，使胃酸pH值迅速提高，有效缓解胃的灼热和疼痛，用于消化性溃疡、反流性食道炎和卓-艾二氏综合征［1］。奥美拉唑肠溶片是继其注射液和胶囊制剂之后的又一种新开发的剂型。我们采用高效液相色谱法测定奥美拉唑肠溶片的含量，结果满意。
1仪器与试药
Waters液相色谱仪（美国Waters公司）：515泵、717自动进样器、486可变波长检测器、730数据处理机；UV-260型分光光度计（日本岛津）；乙腈（色谱纯），其余试剂均为分析纯；奥美拉唑对照品（精制品，符合质量标准要求［2］）、奥美拉唑肠溶片批号980801、980802、980803（由福建省顺顺制药联合公司提供）。
2实验方法与结果
2.1色谱条件高效液相色谱柱WatersNova-PakC183.9mm×150mm（美国Waters公司）；流动相为磷酸盐缓冲液（pH7.6）［3］-乙腈（75：25）；流速1.0ml.min－1；检测波长302nm；检测灵敏度为0.1Aufs，进样量20μl。
图1奥美拉唑及其肠溶片紫外吸收光谱图
1—奥美拉唑2—奥美拉唑肠溶片
2.2检测波长的确定取奥美拉唑对照品及其肠溶片细粉适量分别加甲醇溶解并制成约10μg.ml－1的溶液，照分光光度法，在250nm～350nm波长范围扫描绘制紫外吸收光谱图，结果302nm波长处有最大吸收（见图1）。
2.3分析方法的选择精密称取奥美拉唑对照品及其肠溶片细粉适量分别用甲醇溶解并制成约20μg.ml－1溶液，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图（见图2）。
图2奥美拉唑及其肠溶片HPLC色谱图
A.奥美拉唑B.奥美拉唑肠溶片1.溶剂峰
2.4线性关系取奥美拉唑对照品加甲醇溶解并制成20.20μg.ml－1的溶液，精密量取5、10、20、30、40μl分别注入液相色谱仪，按选定的方法进行测定。以峰面积（y）为纵坐标，进样量（x）为横坐标，进行线性回归，得回归方程y＝1.59×105x－7.56×104，γ＝0.9999。结果表明进样量在0.10μg～0.81μg之间呈良好线性关系。
2.5精密度试验取20.20μg.ml－1的奥美拉唑对照品溶液，按选定的方法进行测定，每次进样20μl，连续进样9次，结果显示该方法精密度良好，RSD＝0.31％（n＝9）。
2.6溶液的稳定性试验取线性关系试验溶液，于室温下分别放置1、2、4、8、12h，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱峰，结果说明本品溶液在室温下放置12h稳定。
2.7加样回收率试验取奥美拉唑肠溶片细粉适量，用甲醇溶解并稀释，分成5份，分别加入不同量的对照品溶液，混匀，滤过，取滤液用甲醇稀释成约20μg.ml－1的溶液，量取20μl注入液相色谱仪，按选定的方法测定并计算，结果（见表1）。
表1奥美拉唑回收率测定结果
试样
号样品量
mg加入量
mg测得量
mg回收率
％平均回
收率％RSD
％
11.08220.63681.713999.7
21.08220.71641.8016100.2
31.08220.79601.9123101.8100.11.19
41.08220.87561.927698.5
51.08220.95522.0426100.3
2.8样品测定取奥美拉唑肠溶片10片，精密称定，研细，精密称取适量加甲醇溶解、滤过并稀释成含奥美拉唑约20μg.ml－1的溶液，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，另取奥美拉唑对照品同法操作，以峰面积计算，结果（见表2）。
表2奥美拉唑肠溶片含量测定结果（n＝3）
批号含量（％）RSD（％）
980801103.20.29
980802101.91.50
980803103.81.10
3小结
3.1肠溶片所用辅料与一般片剂不同，采用以上所选定的方法测定奥美拉唑肠溶片的含量时，该品的辅料不出峰，不影响其主药的含量测定。
3.2本方法专属性强、准确可靠，可作为奥美拉唑肠溶片的含量测定方法。
参考文献
［1］张国仪，王作豪，邵大同，等.临床各科最新药物手册，科学出版社，1995，306.
高效液相色谱仪范文第7篇
关键词：奥沙利铂；相关物质；反相高效液相色谱法
注射液奥沙利铂，由奥沙利铂和乳糖组成。该组合物可加入注射用水和pH调节剂经冷冻干燥制成冻干粉针剂[1]。该冻干粉针剂不仅具有成形性好、外形饱满等优点，还克服了以乳糖作为冻干载体的奥沙利铂冻干粉针剂成型性不好等的偏见。
奥沙利铂属于铂族金属配合物，是继顺铂、卡铂之后的新一代铂类抗肿瘤药。未出现顺铂的肾脏毒性，也没有卡铂的骨髓抑制[2]，用于治疗经氟尿嘧啶治疗失败后的结肠癌转移的患者，可以单独和联合氟尿嘧啶使用。本文采用反相高效液相色谱法对奥沙利铂中的有关物质杂质A进行分离测定。
1仪器与试药
高效液相色谱仪由Aglient 1260 型液相色谱仪（美国安捷伦公司）。XS105型天平（德国Mettler Toledo公司）。奥沙利铂样品（批号：130526-1，13052603）、乙腈（色谱纯，国药集团）；四丁基氢氧化铵溶液溶液（国药集团）；磷酸二氢钾（国药集团）；水（纯化水，自制）。
2注射用奥沙利铂的稳定性研究
分别在室温、冷藏条件下对130526-1、13052603批次的注射用奥沙利铂进行稳定性研究。
2.1杂质A的检查
2.1.1色谱条件 色谱柱：Agilent SB-C18 （250 mm×4.6 mm，5 μm） ；检测波长205 nm；流速为1.0 mL/min；柱温35 ℃；流动相A：乙腈；流动相B：磷酸盐缓冲液（取320 g/L的四丁基氢氧化铵溶液10 mL和磷酸二氢钾1.36 g，加水溶解并稀释至1000 mL，并用磷酸调节pH值为6.0）（20∶80，v/v）.
2.1.2溶液的制备 供试品溶液：取奥沙利铂样品适量，精密称定，加水溶解并稀释成2 mg/mL的溶液。
对照品溶液：精密称取草酸（杂质A）对照品14 mg，置250 mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液①；精密量取对照品溶液（1）5 mL，置100 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液②。
系统适用性试验溶液：取硝酸钠12.5 mg，置250 mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，再精密量取2 mL，置100 mL量瓶中，加入对照品溶液①25 mL，加水稀释至刻度，摇匀，作为系统适用性试验溶液[3]。
2.2方法与结果
2.2.1专属性试验 取对照品溶液②与系统适用性试验溶液各20 μL分别注入液相色谱仪，记录色谱图，对照品溶液②的色谱图中草酸的信噪比应≥20；系统适用性试验溶液的色谱图中硝酸峰与草酸峰的分离度应>9.0。
2.2.2样品测定 精密量取供试品溶液与对照品溶液②各20 μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，供试品溶液的色谱图中如有与对照品溶液②主峰保留时间一致的杂质峰，量取杂质峰面积，与对照品溶液主峰面积比较并计算，见表1。
3讨论
在稳定性考察中，供试品溶液在室温下放置8 h 后，杂质量明显增高，冷藏放置8 h后杂质A的量没有增加，实验表明，注射用奥沙利铂对温度敏感，应冷藏储存。
参考文献：
[1]徐丽佳，陈晓辉，王峰.盐酸艾咪朵尔相关物质的分离与含量测定[J].沈阳药科大学学报， 2010，27（6）：470-473.
高效液相色谱仪范文第8篇
关键词：橙皮苷；高效液相色谱法；新止咳合剂；含量测定
中图分类号：R927.2
文献标识码：A
文章编号：1007－2349(2007)09－0033－02
新止咳合剂是由桔梗、陈皮、儿茶、甘草、法半夏等药制成，具有止咳、祛痰的功效。为本院的医疗机构制剂。质量标准中没有规定含量测定方法。本文参考《中国药典~2005年版，采用HPLC法测定陈皮的主要成分――橙皮苷的含量，作为质量控制指标，获得满意的结果。
1 仪器与药品
高效液相色谱仪(美国Agilent I100系列仪)，包括自动进样装置、VWD可变紫外检测器、柱温箱等；METTLER AE240型电子分析天平。除高效液相色谱检测所用试剂为色谱纯外，其他试剂均为分析纯。橙皮苷对照品(批号为0721―200010，供含量测定用，中国药品生物制品检定所)；新止咳合剂由本院制剂室配制(批号20070428、20070403、20070206)。
2 方法与结果
2．1 色谱条件色谱柱：Dikrna钻石C18柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：甲醇－0.2％磷酸(38:62)；流速：1.0ml/min；柱温：30℃；检测波长：283nm；进样量：5μl。理论塔板数按橙皮苷峰计算为5000。
2．2 溶液的制备精密称取橙皮苷对照品(置五氧化二磷为干燥剂的干燥器中，减压干燥36h)20.01mg，置50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至亥4度，摇匀，即得每1ml中含橙皮苷0.4002mg的溶液(贮备液)，分别精密吸取溶液(贮备液)①0.1ml、②0.5ml、③2ml、④4ml、⑤5ml、⑥10ml、⑦20ml，分别置20ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，分别得每Iml含①2μg、②10μg、③40μg、④80μg、⑤100μg、⑥200μg、⑦400μg的对照品溶液。取新止咳合剂20ml，用乙酸乙酯提取5次，每次20ml，合并乙酸乙酯层，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，用0.45μg的微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液。
2．3 方法学考察
2．3．1 标准曲线和线性范围精密吸取橙皮苷对照品溶液①、②、③、④、⑤、⑥、⑦各5μl，分别注入高效液相色谱仪测定。以橙皮苷对照品含量(瞎)为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，直线几乎通过原点，所以采用外标一点法进行含量测定。线性回归方程为Y＝1827.6X－4.58r＝0.99997，线性范围为0.01～2.μg。
2．3．2 精密度试验取同一橙皮苷对照品溶液④5μl，注入液相色谱仪，连续测定6次，结果峰面积积分值分别为；727.1535，727.6970，730.9173，728.3321，729.3542，731.2501；积分值平均为：729.117，RSD＝0.23％。结果表明仪器精密度较好。
2．3．3 稳定性试验取同一对照品溶液④和同一供试品溶液(批号为20070428)各5ul，分别于0，2，5，10，15，20，24h注入液相色谱仪测定，结果表明在24h内对照品和供试品的峰面积积分值稳定，说明测定溶液配制好后，放置24h内测定均可。
2．3．4 重现性试验 取同一批号的新止咳合剂(批号：20070428)，按供试品溶液的制备方法重复操作测定6次，结果平均含量为20.4μg/ml，RSD＝1.18％。
2．3．5 回收率试验采用加样回收法，取已知含量的同一批号(20070428)新止咳合剂(含量为：20.4μg/m1)适量，分别精密加入橙皮苷对照品适量，按供试品溶液的制备及测定法操作。
2．3．6 阴性干扰试验照上述条件测定新止咳合剂空白(不含陈皮药材制成的阴性合剂)制剂，结果在橙皮苷色谱峰相对应的保留时间处无吸收峰，说明处方中其它药味对陈皮中的橙皮苷测定无干扰。
2．4 样品含量测定按供试品溶液的制备及测定法操作，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪测定，外标一点法计算。
3 讨论
橙皮苷是陈皮中主要的活性成分之一，也是新止咳合剂治疗疾病的重要成分，故选择该物质作为考察指标。