蛋白酶抑制剂范文精选

作者：蔡同建，陈景元，李妍，季爱玲，杜可军，骆文静

【关键词】 蛋白酶体抑制剂；PC12细胞；帕金森病；细胞凋亡

【Abstract】 AIM: To investigate the effect of proteasome inhibitor MG132 on the proliferation and apoptosis of dopaminergic PC12 cells. METHODS: PC12 cells were treated with MG132 at different concentrations for 3 d. The effect of MG132 on the proliferation of PC12 cells was analyzed through MTT assay and the effect of MG132 on the apoptosis of PC12 cells was analyzed through Giemsa staining and flow cytometry. RESULTS: Treated for a same period （3 d）, the inhibitory effect of MG132 on PC12 cell proliferation enhanced with the increment of the concentration of MG132（0, 1, 2.5, 5, 10, 20 μmol/L）. The inhibitory rate exceeded 40% when the MG132 concentration was 2.5 μmol/L, and the 50% inhibiting concentration （IC50）was 3.78 μmol/L. MG132 also induced the apoptosis of PC12 cells obviously. The apoptosis index of the cells treated by MG132 at 2.5 μmol/L for 3 d was 24.7% examined by Giemsa staining and 25.6% by flow cytometry, that of the control cells was 1.3% and 0% respectively. CONCLUSION: MG132 can inhibit the proliferation of dopaminergic PC12 cells and lead to apoptosis. The disfunction of proteasome may do harm to the existence of dopaminergic cells.

【Keywords】 proteasome inhibitor; PC12 cells; Parkinson disease; apoptosis

【摘要】 目的： 了解蛋白酶体抑制剂MG132对多巴胺能细胞PC12增殖和凋亡的影响. 方法： 用不同浓度的MG132处理PC12细胞3 d，通过3（4，5二甲基噻唑2）2，5二苯基四氮唑溴盐（MTT）微量比色法检测MG132对PC12细胞增殖的影响，通过姬姆萨染色法和流式细胞术检测MG132对PC12细胞凋亡的影响. 结果： 在作用时间相同（3 d）的条件下，随着MG132浓度的增高（0， 1， 2.5， 5， 10， 20 μmol/L），对PC12细胞增殖的抑制作用逐渐增强. 当MG132浓度达到2.5 μmol/L时，对PC12细胞的抑制率超过40%, IC50＝3.78 μmol/L. 同时，MG132能够明显诱导PC12细胞凋亡： 姬姆萨染色显示，浓度为2.5 μmol/L的MG132作用3 d，细胞凋亡率为24.7%，而对照为1.3%；流式细胞术分析结果表明，浓度为2.5 μmol/L的MG132作用3 d，细胞凋亡率为25.6%，而对照为0%. 结论： 蛋白酶体抑制剂MG132能够抑制多巴胺能细胞PC12的增殖并诱导细胞凋亡，蛋白酶体活性的丧失可能影响到多巴胺能细胞的生存.

【关键词】 蛋白酶体抑制剂；PC12细胞；帕金森病；细胞凋亡

0引言

帕金森病（parkinsons disease, PD）是最常见的神经系统退行性疾病之一，严重危害患者身体健康和降低患者的生活质量［1-2］. PD的病因和发病机制至今不够明确. 越来越多的证据表明，多巴胺能神经元内蛋白质的损伤和功能异常蛋白的蓄积在散发性PD的发病过程中起着重要的作用［3］. 蛋白酶体是一种多价复合酶，分布于细胞质与细胞核内，是哺乳动物细胞中主要的中性蛋白水解酶，在泛素蛋白酶体通路（ubiquitinproteasome pathway, UPS）中起催化作用［4-5］. 本研究以多巴胺能细胞PC12为研究对象，观察蛋白酶体抑制剂MG132对PC12细胞的增殖和凋亡的影响，以探讨蛋白酶体活性异常在PD发病过程中的作用，为阐明PD的发病机理提供新的实验依据.

[摘要] 目前普遍观点认为，肿瘤产生的本质是细胞增殖的调节失控，而细胞的增殖要通过细胞周期来调控。细胞周期调控激酶复合物[cyclin dependent kinase（CDK）/Cyclin]活性的异常是导致细胞周期失控的根本原因。抑制CDK/Cyclin激酶的活性成为有效治疗肿瘤的策略之一。因此，针对CDK/Cyclin激酶抑制剂的研究是当前抗肿瘤药物开发的热点之一。本文对近年来CDK/cyclin抑制剂的种类及目前其在临床应用中出现的问题进行概述。

[关键词] 细胞周期蛋白激酶抑制剂；肿瘤；细胞周期

[中图分类号] R979.1 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2014）13-44-04

[Abstract] As normally accepted， the cell proliferation is regulated through cell cycle and the occurrence of tumor may lie in deregulation of cell cycle， directly resulted from the abnormal of the complex of cyclin dependent kinase（CDK）.It has become one of the most effective strategies to inhibit the activity of the complex for dealing with tumors.Thus，the study on CDK/Cylclin complex inhibitors is one of hot focuses in antitumor drug discovery.This thesis mainly discusses the types of CDK/Cyclin inhibitors and their clinical issues.

[Key words] Inhibitor；Cancer；Cell cycle

细胞周期的调控过程是在检查点的监视下，各种调控因子依次激活或灭活，从而启动细胞完成DNA复制，分裂为2个子代细胞的过程。在诸多细胞周期调控因子中，细胞周期蛋白依赖性激酶（cyclin dependent kinase，CDK）是处于核心位置，其与细胞周期蛋白Cyclins、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子（CKIs）等组成细胞周期调控的网络系统[1]。CDKs是一类丝氨酸/苏氨酸激酶，目前有13种包括CDK1～13，分别在细胞周期调控CDKs（1～6）和转录调控CDKs（7～13）起作用。细胞周期的调控事实上就是检查点的调控，其中以G1/S调控点最为重要。细胞周期受到外界信号如生长因子等刺激时，催化亚基CDK4/CDK6与调节亚基CyclinD结合后，CDKs残基被磷酸化/去磷酸化修饰而被激活，CDKs激活后催化Rb蛋白使之磷酸化，Rb基因（retinob lastoma gene）又称为视网膜母细胞瘤基因，是第一个被克隆的抑癌基因，其蛋白磷酸化后与转录因子（如E2F）形成复合物的能力丧失，E2F在细胞周期调控中起重要作用，能诱导CyclinE和CDK2的表达并形成CyclinE/CDK2复合体，后者进一步使Rb蛋白磷酸化，充分释放E2F，随后E2F进入核内激活一系列细胞周期进入S期的必须基因的表达。在S期内DNA复制晚期，CDK2被cyclinA激活，使转录因子E2F及时失活，阻止了由持续激活的E2F导致的细胞凋亡[2-3]。

1 CDK/Cyclin抑制剂的种类

研究统计显示，有超过90%的人类癌症中CDK、Cyclin、CKI和Rb途径中相关基因发生了变异，其中CDK和其相应的调节亚基Cyclin的失常最为频繁[2-3]。此外，细胞周期的波动促进了化疗的抗性，降低了化疗的效果。因此恢复细胞周期正常的CDK/Cyclin活性调控是治疗肿瘤的策略之一。药物研究人员已经把寻找不同类型CDK和Cyclin抑制剂作为前沿的抗肿瘤药物的重点研究方向。目前CDK抑制剂主要有内源性的和外源性的两种。

半胧氨酸蛋白酶抑制剂(cystatin)广泛分布于植物、细菌、病毒、原生动物和哺乳动物体内，参与各种生理和病理的过程，如蛋白质的分解代谢、感染与免疫、肿瘤的侵袭和转移等。早在20世纪60年代末，Fossum和whitaker[’〕就已从鸡蛋清中分离得到半胧氨酸蛋白酶抑制剂并发现其具有抑制无花果蛋白酶、木瓜蛋白酶及二肤酶的活力。80年代早期，Anastasi等[zl首次采用亲和层析方法从鸡蛋清中分离得到半胧氨酸蛋白酶抑制剂并命名为“cystatin”，此后，cystatin相继在不同的物种中被分离纯化。这些在结构和功能上具有进化上相似性的内源性半胧氨酸蛋白酶抑制剂构成一个Cystatin超家族。

cystatin除了具有独特的抑制半胧氨酸蛋白酶(如组织蛋白酶eathepsinB、L、S和天冬酞胺内肤酶AE功活性外，还具有一些免疫调节活性。本文就cystatin的分类、结构及免疫调节活性方面的研究进展作一综述。

由一条约含100个氨基酸的多肤链构成，不含二硫键和糖基，分子量约11一12KD。这类分子包括人stefinA、B，鼠。tefin。、俘等，主要分布于上皮细胞和多形核白细胞内;②cystatins家族，为分泌型蛋白。由约120个氨基酸组成，分子量约13一14KD，位于多肤链的c端有两个链内二硫键，也不含糖基。目前，有些学者认为川。ystati。超家族除上述的3个类型外，还包括一些胎球蛋白、组氨酸糖蛋白、cys-tatin相关蛋白以及恒定链等，这些均与cystatin同源，归为新一类cystatin超家族成员。

cystatin分子的结构特征cystati。分子的共同特征是[5]能以等摩尔与半胧氨酸蛋白酶分子发生紧密、可逆地结合。经氨基酸序列分析发现它们具有3个高度保守的区域:①靠近N端的区域，其中甘氨酸一11(cystatinC序列)高度保守;②第一个发夹环，包括高度保守的QVvAG序列(谷氨酞胺一55一甘氨酸一59);③第二个发夹环，包括脯氨酸一105和色氨酸一106。这3个区域均为疏水性，其疏水性作用与cystatin和目标酶的结合有关。

eysrain与抗原呈递树突状细胞(DC)是[7]一类重要的抗原呈递细胞(APC)。早期或未成熟的DC具有很强的摄取抗原的能力，而无或很弱的呈递抗原的能力。它们在外周组织接受刺激(如抗原、1S、细胞因子等)后逐渐向次级淋巴器官迁移。在迁移过程中，DC经历一个130成熟的过程:首先逐渐丧失内化抗原的能力，接着表达MHC一n分子和协同刺激分子增加，最后胞膜表面呈递抗原肤一MHC一n复合物。总之，DC通过调控MHC一11分子的胞内转运和胞膜表达来调节其抗原呈递能力。

[摘要] 组蛋白去乙酰化酶（HDACs）是一类对染色体的结构修饰和基因表达调控发挥着重要作用的蛋白酶，与肿瘤的发生发展关系密切。组蛋白去乙酰化酶抑制剂（HDACIs）在抗肿瘤药物的开发中具有重要意义。本文对HDACs分子结构、HDACs与肿瘤的关系、HDACIs化学结构及其目前主要的设计思路、构效关系进行综述。

[关键词] 组蛋白去乙酰化酶；抑制剂；肿瘤

[中图分类号] R977.3 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2015）06（a）-0015-07

Research progress of histone deacetylase inhibitors

GU Hua-wei LIU Yan SANG Jun-xia LIU Jing

Pharmacy of Department，the Fourth Affiliated Hospital of Henan University of Science and Technology；Tumor Hospital of Anyang City in Henan Province，Anyang 455000，China

[Abstract] Histone deacetylase（HDACs） is a kind of protease which plays an important role in the modification of chromosome and regulation of gene expression，and is closely associated with the occurrence and development of tumor.Histone deacetylase inhibitors（HDACIs） of great significance in the development of the antitumor drugs.The molecular structures of HDACs，HDACs with malignant tumor，the molecular structures of HDACIs，main design ideas of HDACIs，structure-activity relationship were reviewed in this article.

[Key words] Histone deacetylase；Inhibitors；Tumor

摘要：目的用一种改进的测定方法，测定从苦瓜籽中提取分离的胰蛋白酶抑制剂的抑制活性。方法通过稳定性、重复性和专属性实验，分析和考察此测定方法。结果苦瓜籽中的胰蛋白酶抑制剂的相对分子质量1×103，比活1 153 U/mg；配制的抑制剂在2 h内测得的活性变化小于2％；RSD 2.5％；0.05 mg/mL牛血清白蛋白对测定体系没有干扰。结论此方法适用于苦瓜胰蛋白酶抑制剂活性的测定。

关键词：苦瓜；分离；胰蛋白酶抑制剂；测定方法

中图分类号：Q55文献标识码：A文章编号：1672-979X(2007)04-0014-04

Study on Measurement Method for Activity of Trypsin Inhibitors from Momordica charantia

FU Zhong-ping, ZHOU Ji-yan, WANG Fu-jun*

(Institute of Traditional Chinese Materia Medica, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine,

Shanghai 201203, China)

Abstract：Objective To study a modified method for detecting inhibitory activities of trypsin inhibitors purified from Momordica charantia (MC) seeds. Methods The method was assessed by the stability, repeatability and specificity tests. Results The relative molecular mass of trypsin inhibitors from MC was around 1×103; specific activity was 1 153U/mg; the inhibitor solution was stable and the activity lose was less than 2% within 2 h; RSD of the method was 2.5% and 0.05mg/ml BSA did not interfere the activity measurement. Conclusion The method is suitable for the determination of inhibitory activities of trypsin inhibitors from MC.

【摘要】目的综述国内外对基质金属蛋白酶-1、组织金属蛋白酶抑制剂-1的研究进展。方法查阅国内外的相关文献，进行总结分析。结果基质金属蛋白酶-1、组织金属蛋白酶抑制剂-1广泛参与机体的生理及病理过程，在恶性肿瘤、心脑血管病变、骨性关节炎、肝纤维化等病理过程中有特殊的临床意义，涉及到机体中的多个系统。结论基质金属蛋白酶-1、组织金属蛋白酶抑制剂-1在机体的生理病理过程中发挥着重要的作用，对其作用机制的深入研究，不仅可为疾病的早期诊断提供参考，还有助于开发特异性更好的组织金属蛋白酶抑制剂，为疾病的治疗提供新策略。

【关键词】基质金属蛋白酶-1；组织金属蛋白酶抑制剂-1；诊断；治疗

细胞外基质（ECM）是由细胞合成并分泌到胞膜外、分布在细胞表面或细胞之间的大分子，主要由胶原、糖蛋白、氨基聚糖与蛋白聚糖、弹性蛋白等组成。基质金属蛋白酶（MMPs）是一组由Zn2+依赖性的高度保守的内肽酶组成的酶家族，对细胞外基质具有特异性的降解作用，几乎能够降解细胞外基质的所有成分[1]。现将基质金属蛋白酶-1和组织金属蛋白酶抑制剂-1的研究进展总结如下。1基质金属蛋白酶-1（MMP-1）

1.1MMP-1的合成及结构MMP-1是最早被纯化的脊椎动物胶原酶。MMP-1主要由结蹄组织细胞、血管内皮细胞、巨噬细胞等多种细胞合成[2]，以无活性的酶原形式分泌到细胞外基质中。羧基端结构域也叫血红素样结构域，是大约含有210个氨基酸残基的血红素结合蛋白样的结构域，此结构域包含4个半胱氨酸残基的重复序列，决定底物的特异性。

1.2MMP-1的生物学功能MMP-1是胶原酶亚家族的成员之一。细胞基质中无活性的MMP-1可在蛋白水解酶和氧化性谷胱甘肽、4-氨基苯基乙酸乙酯、氯化汞等体外化学剂的作用下被激活[3]。MMP-1还可以通过分解作用释放细胞外基质中贮存的生物活性分子，如MMP-1可以分解基膜蛋白多糖，释放出与其结合的成纤维细胞生长因子。MMP-1还可裂解细胞表面分子和其他非基质分子，其中包括L-选择蛋白、IL-Iβ、抗胰凝乳蛋白酶、抗胰蛋白酶、胰岛素生长因子结合蛋白、肿瘤坏死因子和基质细胞衍生因子等发挥作用。

1.2.1MMP-1与恶性肿瘤的关系已证实[4]，MMP-1的表达异常与多种疾病密切相关，如恶性肿瘤（胃癌、食管癌、舌癌等）、心脑血管病变、关节炎、椎间盘突出等，涉及机体的多个系统。在恶性肿瘤的浸润和转移过程中，MMP-1通过降解细胞外基质，促进癌细胞的浸润和转移[1]。在心脑血管病变中，MMP-1与动脉粥样硬化和血栓也有密切的联系。通过免疫组化法对心肌梗死、不稳定型心绞痛组和稳定型心绞痛三组病例的尸体解剖发现，MMP-1的表达在破裂的动脉粥样硬化斑块中明显高于未破裂的斑块。

1.2.2MMP-1与骨性关节炎的关系研究表明，骨性关节炎的发生与发展，与软骨基质的破坏紧密相连，MMP-1可降解软骨基质中最具特征、含量最多的Ⅱ型胶原和蛋白多糖，导致软骨基质中胶原纤维的“网状拱形结构”破坏，使软骨失去正常的弹性及变形能力[4]。此外，MMP-1还与疤痕组织的过度增生、椎间盘突出、肠粘连、功能性子宫出血、子宫内膜异位症等多种疾病密切相关。

1.3MMP-1的活性调节MMP-1在正常组织中检测含量极低，主要参与胚胎发育、血管再生、凋亡、排卵、神经发育等生理过程。MMP-1的表达调节同其它MMPs分子相似[3]，主要在受控于基因转录水平、酶原的激活、以及组织金属蛋白酶抑制剂。通过上述三种调节基质共同作用，使机体组织内MMP-1的水平和TIMP-1之间保持相对平衡的状态，共同参与细胞外基质的更新降解、重塑过程。2组织金属蛋白酶抑制剂-1（TIMP-1）

摘 要： 组蛋白的乙酰化修饰将影响染色体结构和基因表达，但这种修饰是可逆，这就为肿瘤的治疗提供了乐观的前景。目前研究最多的是组蛋白去乙酰化酶抑制剂，它是一类新的治疗肿瘤药物，本文将初步介绍其中羟肟酸类曲古抑菌素A的作用原理，相关研究及其发展前景。

关键词： 组蛋白乙酰化； 曲古抑菌素A； 肿瘤

中图分类号： R73-3 文献标识码： A 文章编号： 1009-8631（2012）09-0121-02

肿瘤已成为当今世界危及人类生命的常见而严重的一种疾病，自上世纪70年代开始人们就致力于癌症的研究，虽然在癌症的发生和发展机制上有了一些了解，但仍不能从其本质上认清。现今人类基因组计划（human genomepr0ject，HGP）基本完成，人们对以癌症的研究转到基因表达调控上。最近的一些研究发现，基因的表达不仅取决于其本身，不改变基因序列的表观遗传修饰也起到一定的作用。表观遗传是指基因表达或蛋白表达的改变不涉及DNA序列变化，但又可以通过细胞分裂和增殖而稳定遗传。表观遗传修饰对于癌症的发生、发展、诊断和治疗具有重要意义[1]。异常的表观遗传修饰将导致基因的不正常表达，从而引起代谢紊乱、疾病的发生甚至致癌。表观遗传修饰包括DNA甲基化、组蛋白修饰、染色体重塑和非编码RNA，其中DNA甲基化和组蛋白修饰是主要的，而目前研究最多的是组蛋白去乙酰化酶（histone deacetylase，HDAC）抑制剂[2]。迄今已开发出的一系列结构不同的HDAC抑制剂药物，主要有羟肟酸衍生物、环状四肽类、氨基甲酸酯类衍生物、苯甲酰胺类衍生物及酮类。羟肟酸类、短链脂肪酸类、环状四肽类、苯甲酰胺类、亲电酮类和其他类。

1 蛋白质去乙酰化酶抑制剂TSA

组蛋白去乙酰化酶抑制剂是一种新的肿瘤诱导分化剂，能够有效抑制组蛋白去乙酰化酶的活性，促进组蛋白及非组蛋白的乙酰化修饰，在转录和翻译后修饰水平调控肿瘤靶蛋白及凋亡相关蛋白的表达和降解，活化凋亡信号通路，诱导肿瘤细胞凋亡[3]。曲古抑菌素A（也称制滴菌素） （Trichostation A简称TSA），是众多HDAC抑制剂中的一种，属于羟肟酸类，是链霉素代谢产物，其作用效果是非竞争性可逆的。TSA主要通过调节组蛋白的乙酰化状态来改变染色质结构，进而影响相关基因转录，使高度酰基化的组蛋白积累，肿瘤细胞的形态和功能发生改变，最终导致细胞增殖抑制、诱导分化、凋亡以及端粒酶活性抑制等一系列效应。是目前国际上公认的研究酰基化对细胞影响的可靠模式。

2 肿瘤的发生

肿瘤发生是多方面的，其中细胞周期调控异常是其重要机制。细胞内存在一系列能确保细胞周期的各个事件按正常顺序进行的检查点（checkpoint），当DNA受到损伤或细胞分裂出现异常时，可以适时终止细胞周期，同时启动修复机制。如果这些损伤过于严重而无法修复，则发生细胞凋亡。否则，细胞将发生癌变。

【摘 要】基质金属蛋白酶（MMPs）参与了OA关节组织的病理破坏。这些酶类降解细胞外基质的大分子并调节管理细胞行为的因子。它们也可能参与组织修复，但也因为它们的超表达成为了破坏疾病进程的一部分。许多研究金属蛋白酶作用的早期临床试验均表明基质金属蛋白酶抑制剂（TIMP）治疗OA的效果欠佳。因此，我们需要更准确地掌握不同细胞中的MMPs在疾病过程中的确切作用。新型TIMP应该增加其特异性，不仅要了解其催化域的结构，还要知道其他催化基序在底物结合中的作用，或通过研制金属蛋白酶组织抑制剂来实现。也可以考虑通过调节基因表达或防止蛋白活化来抑制这些酶类。

【关键词】骨关节炎；软骨；MMP和TIMP

【中图分类号】R684.3 【文献标识码】B 【文章编号】1004-7484（2014）01-0029-02

1 简介

骨关节炎（OA） 是一种慢性退行性疾病，是引起关节疼痛和残疾的主要原因[1]。其特征是关节软骨的破坏导致关节功能障碍。这种破坏主要是由于软骨中降解细胞外基质（ECM）大分子的蛋白水解酶活性的升高。长期以来一直在探讨基质金属蛋白酶（MMPs）与疾病发生和潜在治疗靶点之间的确切相关性，并混淆了它们在许多疾病病理方面的广泛作用。

软骨基质由两个主要的ECM成分组成：II型胶原纤维和软骨可聚蛋白聚糖类（约各占45%），还有一些其他含量较少的大分子物质[2]。在正常软骨中，软骨细胞会把合成的大量II型胶原、蛋白多糖等物质分泌到ECM中，构成细胞外纤维网架，给细胞提供支持与保护。这些物质同时被软骨细胞分泌的MMPs降解，维持软骨细胞内外动态平衡。关节软骨损伤时，软骨细胞分泌大量的MMPs对ECM进行降解，软骨细胞失去胶原网络结构支持而破坏，导致OA的发生。

2 MMPs：破坏的主宰者？

MMPs属于金属蛋白酶含锌超家族成员，来源于关节的固有细胞和浸润细胞，包括胶原酶、明胶酶、基质降解素、基质溶解素、膜型MMPs和其他分泌型MMP。MMPs最初是以降解基质的蛋白水解酶为特性的，但最近的研究表明它们作用于ECM还可以释放生长因子或产生新的配体[3]。MMPs也可以从载体蛋白中释放生长因子，激活蛋白酶抑制剂，并激活或灭活炎性细胞因子和炎性趋化因子[3]。因此它们在骨形态发生、骨重塑、伤口愈合和血管生成中有重要作用。大多数情况下，MMPs还有可能参与组织的正常生物过程，如修复和重塑[4]。在OA中，组织试图修复损伤、控制炎症和感染，但过程可能并不完整。这种'落空'的修复伴随基质更新和细胞表面以及胞周分子的调节，可能导致MMPs活性的不平衡，因此造成了组织的破坏。与非关节炎软骨相比，OA关节软骨中的MMP-1、MMP-3、MMP-13，MMP-28均升高。关节软骨的周期性压力负荷可增加MMP-3和MMP-13的表达和活化[5]，甚至单一的压力损伤都可增加MMP-3和TIMP-1mRNAs的表达水平[6]。关节的不稳定、老化、氧化刺激也促进软骨基质的分解。对于造成软骨损伤的MMPs来说，内源性TIMP的水平并不过量。TIMPs是组织中的主要抑制剂。Woessner等[7]在1995年的研究中发现在关节炎中软骨的退变本质上是MMPs和TIMP的不平衡造成的。在各种OA动物模型中应用合成型TIMP预防软骨和骨蛋白水解的实验[8]均支持金属蛋白酶破坏骨关节功能的理论。

摘要 丝氨酸蛋白酶抑制剂是一类分布广泛的蛋白酶抑制剂超家族，能与体内参与各种调控作用的丝氨酸蛋白酶相互制约，形成一定的动态平衡，调节生物体内许多重要的生命活动。该文就近几年来关于昆虫丝氨酸蛋白酶抑制剂在免疫调节中的研究进展进行综述。

关键词 昆虫；丝氨酸蛋白酶抑制剂；免疫调节

中图分类号 R997.3 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2014）08-0245-01

Roles of Insect Serine Protease Inhibitors in Immunomodulation

YANG Wei-ke DONG Zhan-peng CHEN An-li LIAO Peng-fei

（Institute of Sericulture and Apiculture，Yunnan Academy of Agricultural Sciences，Mengzi Yunnan 661101）

Abstract Serine protease inhibitors（Serpins）are widely distributed protease inhibitor superfamily，which could restrict each other with serine proteases（SPs） mediating crucial physiological processes to form a dynamic and regulate many important life activities of the organism.In this paper，we mainly discussed the progress on immunomodulation of insect Serpins in recent years.

Key words insect；serine protease inhibitors；immunomodulation

[摘 要]目的研究鱼腥草中胰蛋白酶抑制剂活性成分的最佳提取条件。方法以提取液对胰蛋白酶的抑制率为指标，采用正交试验法对提取温度（A）、溶剂用量（B）、pH值（C）、提取时间（D）4个因素进行优选研究，并以优选出的提取方案进行验证实验。结果因素B对提取效果有极显著的影响，因素A、C均有显著的影响，因素D影响不显著。结论鱼腥草中胰蛋白酶抑制活性成分有效部位的最佳提取工艺为A1B2C3D2。

[关键词]鱼腥草 胰蛋白酶抑制剂

中图分类号：P618.21 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2014）10-0374-01

蛋白酶抑制剂（proteinase inhibitor， PI）是一类能够抑制蛋白水解酶活性的物质，广泛存在于动植物和微生物中。其中胰蛋白酶抑制剂（Trypsin inhibitor， TI）具有重要的药用价值，对急性胰腺炎、肺气肿、抗休克、防治脑水肿和脑缺血等都有很好的临床 治疗 效果，还有研究表明对 HIV 和肿瘤的治疗也有重要意义。因此，从传统中药中筛选具有TI活性的材料有很广阔的应用前景和市场价值。

鱼腥草为三白草科植物蕺菜Houttuynia cordata Thunb.的地上部分，具有清热解毒、消痈排脓、利尿通淋之功效，是临床应用极其广泛的中药之一。本实验根据前期筛选的结果，利用鱼腥草为材料对从鱼腥草中提取TI的工艺进行优化，找出最佳的提取条件，为今后的 工业 化生产TI提供基础性数据。

1 仪器与试剂

1.1 试剂胰蛋白酶（ 北京麒麟宏伟公司） 、大豆蛋白酶抑制剂（国药集团化学试剂有限公司）、苯甲酰DL-精氨酸对硝基苯胺（BAPNA）（上海三杰生物技术有限公司）、三-羟甲基-氨基甲烷、无水氯化钙、盐酸、三氯乙酸、氢氧化钠等为国产分析纯；鱼腥草。

1.2？ 仪器可见光分光光度计（7202B） 、离心机（LD-4） 、精密pH 计、水浴锅、精密 电子 天平（FA2004N）。