HPLC测定白带丸中盐酸小檗碱的含量

开篇：润墨网以专业的文秘视角，为您筛选了一篇HPLC测定白带丸中盐酸小檗碱的含量范文，如需获取更多写作素材，在线客服老师一对一协助。欢迎您的阅读与分享！

摘 要：目的：建立白带丸中盐酸小檗碱的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法测定，用C【sub】18【/sub】柱（150×4.6mm,5μm），以乙腈－0.05mol/L三乙胺溶液（用磷酸调PH值至3.0）（35∶65）为流动相，检测波长347nm。结果：盐酸小檗碱的线性范围为0.060～0.300μg；相关系数r0.9994，平均回收率为99.634%，RSD0.45%（n5）。结论：所用方法测定样品灵敏度高，重复性好，能有效地控制白带丸的质量。

关键词：白带丸；盐酸小檗碱；hplc

中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1673-7717（2011）04-0905-02

Determination of Berberine in Baidai Wan by HPLC

ZHANG Ling-rong

（People’s Hospital of Lengshuijiang City Lengshuijiang, Lengshuijiang 417500,Hunan,China）

Abstract:Objective：To establish method for the determination of berberine in Baidai Wan； Methods：The separation was carried out on C 18（150×4.6mm,5μm） column；The mobile phase was composed of acetonitrile-0.05mol/L triethylamine （35∶65），Detection wavelength was 347nm；Results：The linear range of berberine was 0.060μg～0.300μg （r0.9994）；Average recovery was 99.634% （RSD0.450%n5）.Conclusion：This method was accurate、rapid 、reproducible and suitable for the quality control of this preparation.

Key words:Baidai WanBerberineHPLC

收稿日期：2010-11-09

作者简介：张玲容（1972-），女，湖南冷水江人，副主任中药师、执业药师，研究方向：医院药学研究。

妇科良药白带丸为纯中药制剂,自1977年以来，一直为中国药典所收载。由椿皮、黄柏、白芍、当归、香附（醋制）五味原料组成，具有清湿热,止带下的功效，用于湿热下注,赤白带下。我们用高效液相色谱法对白带丸中黄柏含有的有效成分盐酸小檗碱进行了含量测定研究。现报道如下。

1 仪器与试药

日本岛津LC-10ATvp型高效液相色谱仪，SPD-10Avp型紫外检测器，N-2000色谱数据工作站。FA1004电子分析天平（上海良平仪表有限公司），KQ3200超声清洗器（中国昆山市超声仪器有限公司）。

试剂及试样:盐酸小檗碱对照品（供含量测定用，中国药品生物制品检定所，批号：110713-200208）、乙腈为色谱纯、其余试剂均为分析纯、水为自制重蒸水。

2 含量测定

2.1 色谱条件【sup】［1］【/sup】 色谱柱：A.T.Chrom C【sub】18【/sub】（150×4.6mm,5μm）；流动相：乙腈－0.05mol/L三乙胺溶液（用磷酸调PH值至3.0）（35∶65）为流动相，检测波长为347nm；柱温：室温；流量：1.0mL/min。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取在五氧化二磷干燥器中干燥5小时的盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成每1mL含0.02mg溶液，摇匀，即得。

2.3 供试品溶液的制备 取白带丸20g，将样品研细，取约10g精密称定，置100mL量瓶中，加盐酸-甲醇（1∶100）溶液约80mL，超声处理30min，放冷至室温，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过。弃去初滤液，取续滤液1mL加盐酸-甲醇（1∶100）溶液稀释至25mL制得供试品溶液。

2.4 检测波长的选择 取盐酸小檗碱对照品溶液（100μg/mL），以流动相为空白在210～500nm范围内绘制吸收光谱图。结果：盐酸小檗碱最大吸收波长为347nm。当采用347nm为检测波长时，盐酸小檗碱的检测灵敏度高，杂质峰较少，基线平稳，杂质均不干扰测定。综上因素，选择347nm为其检测波长。

2.5 系统适用性试验【sup】［2］【/sup】 分别精密吸取对照品溶液，白带丸供试液，缺黄柏的阴性样品供试液各20μL，注入HPLC仪，按上述色谱条件测定，结果理论塔板数以盐酸小檗碱的吸收峰计算均不低于5000，缺黄柏的阴性样品供试液在对照品溶液的出峰时间处无峰出现。

2.6 线性关系考察【sup】［3］【/sup】 精密吸取上述对照品溶液适量，稀释成0.0030、0.0060、0.0090、0.0120、0.0150mL/mg的溶液，分别吸取20μL在上述色谱条件下，进样，测定峰面积，结果见表1。以峰面积对进样量（μg）回归，得回归方程A2317632 C13891,相关系数r0.9994，表明盐酸小檗碱在0.06μg～0.30μg之间线性关系良好。

表1 盐酸小檗碱线性关系考察结果

2.7 精密度试验 精密吸取同一对照品溶液（每1mL含盐酸小檗碱0.010mg），按上述色谱条件操作，重复进样5次，分别进样20μL，测定其峰面积。结果见表2。精密吸取供试品液20μL，连续进样5次，记录峰面积，结果见表3。其峰面积的RSD分别为1.58%和1.62，表明本法精密度良好。

表2 精密度试验结果

表3 供试品精密度试验结果

2.8 稳定性试验 取供试品溶液（批号：090801），室温放置，依上述方法每隔一定时间测定一次，结果见表4，盐酸小檗碱峰面积的RSD为1.48%，表明供试品溶液在24h内基本稳定。

表4 稳定性试验结果

2.9 重复性试验 取同一批供试品（批号：090803），平行精密称取5份，依法测定，结果见表5，盐酸小檗碱含量的RSD为1.94%，结果表明，本法重复性良好。

表5 重复性试验结果

表6 回收率试验结果

2.10 回收率试验【sup】［4］【/sup】 采用加样回收法。取已知含量的样品（批号：090803，C2.075mg/g）加入一定量对照品，按供试品制备方法制备样品，测定总量，以下式计算回收率，结果见表6。

回收率（%）×100%

结果表明，本方法回收率良好。

2.11 提取条件考察【sup】［5］【/sup】 取供试品（090805）分别用甲醇50mL超声处理40分钟和盐酸-甲醇（1∶100）超声处理40分钟，盐酸小檗碱含量分别为2.065mg/g、2.078mg/g，故采用甲醇超声处理。又平行称取四份样品，超声处理不同时间，结果见表7，表明超声处理40分钟即可将盐酸小檗碱提取完全。

表7 提取完全性试验结果

2.12 样品测定 按上述色谱条件对10批样品进行含量测定，结果见表8。

表8 样品测定结果

3 讨 论

（1）本方法供试品溶液制备方法简便易行，在该色谱条件下盐酸小檗碱峰分离效果良好，回收率符合要求，结果理想。

（2）根据对流速的考察,发现当流速为1.0mL/min的时候，盐酸小檗碱分离效果更好,出峰时间更适中。

参考文献

［1］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典：1部［M］.北京：化学工业出版社，2005：214.

［2］ 赵子剑，赵子犁. RP-HPLC法测定状元深海龙酒中丹参酮ⅡA的含量［J］.怀化学院学报,2007，26（2）：62-63.

［3］ 赵子剑. HPLC测定大风丸中芍药苷的含量［J］.中国西部科技,2008，07（9）：53-54.

［4］ 赵子剑，赵启鹏，刘敏.复方石淋通片的质量标准研究［J］.现代中医药,2005，25（5）：69-70.

［5］ 赵子剑.黄柏与苍术共煎对黄柏中小檗碱提取率的影响实验［J］.中华中医药学刊,2009，27（6）：1237-1238.