基因型及6—BA浓度对大豆子叶再生的影响

开篇：润墨网以专业的文秘视角，为您筛选了一篇基因型及6—BA浓度对大豆子叶再生的影响范文，如需获取更多写作素材，在线客服老师一对一协助。欢迎您的阅读与分享！

摘要： 以冀豆系列10个大豆[Glycine max（L.）Merr.]品种为材料，研究基因型与6-ba浓度对大豆子叶再生芽和再生根的影响。结果表明：冀豆5号、冀豆7号芽再生率相对较高，分别为60.65%和38.43%；根再生率适中，分别为24.77%和15.74%，适于继续进行遗传转化。冀豆13号根再生率显著高于其他品种，达到73.96%，但其芽再生率较差，只有22.25%，不适于继续进行遗传转化。综合芽再生率和根再生率，10个冀豆品种在6-BA浓度为0.5 mg/L下再生能力较好。

关键词：大豆[Glycine max（L.）Merr.]；基因型；6-BA浓度；芽再生率；根再生率

中图分类号：S565.1；Q813.1+2 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2013）21-5351-03

Effects of Genotype and 6-BA Concentration on the Regeneration in the Soybean Cotyledon

WANG Fang-juan，ZHOU Li-yan，LU Ming，GUO Zhen-qing，DONGFANG Yang

（Life Science and Technology College，Hebei Normal University of Science and Technology，Qinhuangdao 066000，Hebei，China）

Abstract： 10 soybean[Glycine max（L.）Merr.] varieties were used as materials to study the effects of genotype and 6-BA concentration on the regeneration in the soybean cotyledon. The results showed that Jidou No.5 and Jidou No.7 bud regeneration rate were relatively high， up to 60.65% and 38.43%， respectively， and their root regeneration rate were moderate， respectively 24.77% and 15.74%. They were suitable for genetic transformation. The root regeneration rate of Jidou No.13 was significantly higher than that of the other varieties， reaching 73.96%， but the bud regeneration rate was lower， only 22.25%. Jidou No.13 was not suitable for genetic transformation. In terms of the bud regeneration rate and root regeneration rate， when the concentration of 6-BA was 0.5 mg/L， the regeneration ability of the 10 soybean varieties were higher in the soybean cotyledon regeneration process.

Key words： soybean[Glycine max（L.）Merr.]； genotype； 6-BA concentration； bud regeneration rate； root regeneration rate虽然已有不少学者通过农杆菌转化法获得了各种转基因大豆植株[1-3]，但大豆的转化率仍然较低，大豆仍被认为是较难转化的作物之一[4]。主要原因是从转化细胞分化再生植株困难。因此，建立一个高效再生体系是大豆转基因育种工作的基础。大豆胚尖、下胚轴、茎尖和子叶节作为外植体建立再生体系的研究已有报道[5-7]。邱承祥等[8]建立了以茎尖为外植体的大豆组培高效再生植株体系，报道了不同品种对6-BA的耐受程度存在一定差异。研究者还对大豆胚尖、子叶节和下胚轴再生体系进行了比较研究，因所选用大豆品种、激素浓度与配比不同，所得结果有差异[9-11]。由于子叶节取材不受季节限制，分化再生速度快，所以被越来越多的研究者采用。子叶节对6-BA浓度的反应存在基因型决定性。本试验采用冀豆系列10个大豆品种作为试材，研究不同浓度6-BA对大豆子叶节再生的影响，以期找到再生能力强的基因型及其适宜的6-BA浓度，为农杆菌介导进行遗传转化提供依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

供试大豆种子由河北省农林科学院提供，河北科技师范学院农学试验站繁殖，品种为冀豆3号、冀豆4号、冀豆5号、冀豆7号、冀豆8号、冀豆9号、冀豆10号、冀豆11号、冀豆12号、冀豆13号。

1.2 试验方法

选取健康饱满的大豆种子，放入密封的干燥器中，将100 mL次氯酸钠与5 mL浓盐酸混合产生氯气，利用氯气熏蒸大豆种子，时间为16 h。在温度25 ℃， 光照周期为16 h光照∕8 h黑暗， 光照强度为2 000 lx[12]的条件下培养5～7 d。

子叶的获得：将大豆种子接种于B5培养基上，置于培养室培养。5～7 d取子叶种皮未脱落，颜色嫩绿的大豆无菌苗，剥掉种皮，在子叶下2～4 mm处切去下胚轴，纵向切开，每粒种子获得2个子叶外植体[13]。将外植体在子叶与胚轴交接部位划成网状伤口，一般划6～7刀，划伤要轻、快，伤口不宜太深。

采用B5培养基[14]作基本培养基，灭菌前分别加入0.5、1.5、3.0 mg/L的6-BA配成选择培养基（表1），进行统一灭菌备用。每个品种培养40粒，保证每个品种的每个处理数在10片以上，2次重复。

1.3 数据处理

采用二因素完全随机设计，2次重复。培养15 d后调查分化情况，利用统计分析软件DPS进行方差分析。

2 结果与分析

2.1 基因型对大豆子叶再生芽和再生根的影响

由表2可以看出，10个大豆品种子叶的再生芽能力有明显差异。其中，冀豆5号、冀豆7号、冀豆9号芽再生率极显著高于其他品种，因此，这3个品种比较适合组织培养再生植株；而冀豆11号、冀豆13号、冀豆10号、冀豆12号的芽再生率相对较低。10个大豆品种的根再生能力也存在明显差异。冀豆13号的根再生率极显著高于其他品种，说明冀豆13号具有较强的根分化能力；而冀豆11号、冀豆9号两个品种根再生率比较低。

2.2 6-BA浓度对大豆子叶再生芽和再生根的影响

由表3可以看出，当6-BA浓度为0.5 mg/L时，各大豆品种间芽再生率差异不显著；当6-BA浓度为1.5 mg/L时，品种间芽再生率存在差异，其中冀豆5号的芽再生率显著高于冀豆10号、冀豆11号、冀豆12号、冀豆13号，但并未达到极显著水平；当6-BA浓度为3.0 mg/L时，冀豆5号与冀豆13号芽再生率差异显著，但未达到极显著水平。

当6-BA浓度为0.5 mg/L时，冀豆13号的根再生率较高，与其他品种间差异均达到极显著水平，其他品种之间差异不显著；当6-BA浓度为1.5 mg/L时，冀豆13号的根再生率仍然较高，与其他品种之间差异达到显著水平，冀豆10号、冀豆3号、冀豆4号、冀豆8号、冀豆12号之间差异不显著；当6-BA浓度为3.0 mg/L时，冀豆13号与冀豆3号的根再生率之间差异不显著，但冀豆13号与其余品种之间差异显著。由此可以看出，随着6-BA浓度的升高，10个大豆品种根再生率逐渐降低。6-BA浓度为0.5 mg/L 时有利于冀豆系列大豆根的再生。

3 小结与讨论

本试验结果表明，基因型和6-BA浓度对大豆子叶再生能力影响明显。这与龚学臣等[15]的研究结果一致。本试验中冀豆5号的再生能力很强，芽再生率比其他品种高，根再生率处于中间水平，是组织培养的优良材料。不同浓度6-BA处理下，不同大豆品种的再生能力变化不大，其中0.5 mg/L 6-BA处理下，各个基因型大豆的芽再生率和根再生率总体上高于其他两个浓度。

再生芽和再生根均可以衡量子叶的再生能力，但从组织培养角度来看，再生芽占主导作用，愈伤组织出芽后再诱导其生根是组织培养的常规途径。本试验中，不同基因型和不同浓度6-BA处理下，大豆品种间的再生能力差异明显，10个大豆品种均有适合其子叶再生的条件，通过试验可对其进行分析，以达到遗传转化的目的。

参考文献：

[1] 张 洁，商 蕾，郑文永，等.大豆胚尖遗传转化体系优化及抗逆基因GmPK转化研究[J].植物遗传资源学报，2012，13（2）：271-277.

[2] 李桂兰，乔亚科，杨少辉，等. 农杆菌介导大豆子叶节遗传转化的研究[J].作物学报，2005，31（2）：170-176.

[3] 王 伟，王 罡，季 静，等. 大豆子叶节植株再生体系的优化及转EPSPS基因的研究[J].作物杂志，2012（3）：23-27.

[4] 刘海坤，卫志明.大豆遗传转化研究进展[J].植物生理与分子生物学学报，2005，31（2）：126-134.

[5] 闫 帆，孙 昕，翟 莹，等.6-BA浓度及基因型对大豆胚尖诱导丛生芽的影响[J].大豆科学，2011，30（1）：29-32.

[6] 李文霞，宁海龙，李文滨，等.6-BA对大豆子叶节再生的影响[J].核农学报，2007，21（5）：502-505.

[7] 张 艳，南相日，满为群，等.大豆离体培养及高频再生基因型的筛选[J].植物生理学通讯，2010，46（11）：1135-1139.

[8] 邱承祥，武天龙.6-BA对大豆茎尖诱导再生植株的研究[J].大豆科学，2003，22（1）：32-35.

[9] 林树柱，曹越平，卫志明，等.6-BA诱导大豆子叶节和茎尖出芽的研究[J].上海交通大学学报（农业科学版），2005，23（2）：138-142.

[10] 李海燕，武小霞，刘 淼，等.大豆子叶节、胚尖再生植株的研究[J].大豆科学，2007，26（5）：709-712.

[11] 孙文丽，刘昱辉，吴元华，等.大豆胚芽尖再生体系的建立及转基因初步研究[J].湖北农业科学，2008，47（6）：615-618.

[12] 武小霞，李 静，姜成涛，等.大豆子叶节再生中植物生长调节剂浓度及基因型筛选[J].中国油料作物学报，2011，33（2）：123-129.

[13] 刘北东，朱延明，李海燕，等.大豆子叶节再生影响因素的研究[J].大豆科学，2002，21（2）：88-92.

[14] 杨海燕.蝴蝶兰组培快繁体系的研究[D]. 合肥：安徽农业大学，2006.

[15] 龚学臣，季 静，王 萍，等.苗龄与6-BA 浓度对大豆子叶节丛生芽诱导的影响[J].吉林农业大学学报，2005，27（2）：128-130.