结核病诊断中实验室资料的应用

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【中图分类号】R573.3 【文献标识码】A 【文章编号】1672－3783(2011)11－0423－01

【摘要】目的：比较浓集菌涂片抗酸染色法（涂片法）、实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）法、结核培养（L-J培养）和血清学方法检测血清结核抗体（TB-Ab）对临床结核诊断的应用价值。 方法：用涂片法，FQ-PCP法和L-J培养，对200份疑似结核病人呼吸适标本进行检测，同时检测其TB-AB。结果：200份标本，总阳性率涂片法为20.5%，FQ-PCP法为32.5%，培养法为25.0%，血清结核抗体为42.5%；四种方法的灵敏度、特异度分别为：涂片法36.8%和94.3%，FQ-PCP法为64.2%和96.2%，培养敏感度为50.5%，特异度为98.1%，血清结核抗体63.2%和76.2%。结论：结核培养作为结核诊断的金标准仍是不可缺少的方法，但周期长；FQ-PCP法快速特异性高，有较好诊断价值；血-清学方法检测血清结核抗体方便，简单；涂片法自观、简便、价廉，仍将是结核病实验诊断的重要手段，同时临床诊断中应合理选择。

【关键词】结核病；检测；诊断

结核病作为一种传染病在全球已经成一种公共卫生问题和社会问题，而在我国结核感染率高，椐抽样调查感染率为44.5%；结核病耐药率高；结核病死亡率高。我国是结核病高负担国家，发病率位居世界第二，于是对结核疾病的预防、诊断和临床治疗显得尤为重要。目前对结核的诊断主要通过临床症状、实验室检查、影象学检查。在临床表现和影象学检查不能确疹的情况下。结核疾病从病原学结合分枝杆菌的检查为确诊方法。在目前实验室中，主要通过涂片法，血清结核抗体检测，PCP检测结核杆菌，结核杆菌培养等方法。我科从2007年元月-2008年12月对200例临床病人四种方法进行研究分析结果报告如下：

1 对象与方法

1.1 对象 2008年在我院就诊的临床疑似结核病例200人，其中临床确诊为结核病者95例，正确留取晨痰标本，同时抽取血液标本

1.2 方法 对送检的200份呼吸道和血液合格标本分别进行以下实验：1）痰液用4%NAOH消化浓缩结核杆菌，同时进行涂片抗酸染色法和FQ-PC：R发和结核杆菌培养，并对此200份血液标本进行血清结核抗体检测。涂片法按照标准试验操作规则进行［1,2］，FQ-PCP法和血清结核抗体检测按照试剂盒说明操作。

2 结果

2.1 涂片法等四种方法 对200份呼吸道和体液标本的检测结果200份标本中，总阳性率浓集菌涂片法为20.5%（41例），FQ-PCP法为32.5%（65例），L-J培养法为25.0%（50例），血清结核抗体为42.5%（85例）。

2.2 确诊病例的检测 临床确诊为结核病的95例病例中，浓集菌涂片法阳性率为36.8%（35例），FQ-PCP法阳性率为64.2%（61例），L-J培养为50.5%（48例），血清结核抗体阳性率为63.2%（60例）。

2.3 四种检测方法的比较 四种检测方法的灵敏度、特异度分别为：涂片法36.8%（35/95）和94.3%（99/105），FQ-PCP法64.2%（61/95）和96.2%（10/105），培养敏感度为50.5%（48/95），特异度为98.1%（103/105），血清结核抗体63.2%（60/95）和76.2%（80/105）。

3 讨论

结核病的实验室诊断主要依赖细菌学涂片和培养检查［3］。痰涂片检查不仅可以明确结核传染源，而且十分经济，符合我国国情，具有简便、快捷、低廉的优点，但其敏感性低，36.8%，特异性为94.3%，不能区分结核和非结核分枝杆菌。

经典聚合酶链反应（PCP）扩增技术已广泛应用于结核病的诊断［5,6］。应用FQ-PCR荧光定量法，是利用一对结核分枝杆菌特异性引物和一条结核分枝杆菌特异性荧光探针，配以反应液，耐热DNA聚合酶（TAQ酶），四种核苷酸（DNT PS）等成分，用体外扩增法检测结核分枝杆菌基因。避免了PCR定性技术特异性差，存在假阳性和假阴性等问题，具有较高灵敏度和特异性，分别为64.2%、96.2%，而且迅速，不失为一种较好较快的实验室方法，但是设备要求高，试剂要求高，实验室条件标准化，工作人员的标准操作。

结核分离培养一直是诊断结核的金标准方法，一般应用L-J培养基，目前出一些快速培养基，但是总的来说费用大、时间长、敏感度不高，为50.5%，且只能检测活的结核杆菌，但是培养特异性高，为98.1%，可以进一步鉴定结核和非结核杆菌，也可以进行药物敏感实验，为临床用药提供依据，一直是用来确诊的实验室方法。

而血清学诊断技术对结核病的检测近年来也有较多报道［7］。怀化市第一人民医院检验科采用的纯化的结核分枝杆菌特异性外膜抗原，利用斑点金免疫金渗滤实验（DICFA）原理，用于人血清结核抗体的检测。200份血清标本阳性率为42.5%，但由于人群中感染结核分枝杆菌十分普遍，广泛的卡介苗接种等原因，以及结合病患者个体的免疫功能影响等因素，使血清结核抗体测定存在一定的假阳性和假阴性,敏感度和特异分别为63.2%和76.2%。

综上所述，在临床症状和影象学不能完全确诊的情况下，FQ-PCR法用于结核病诊断，灵敏度64.2%，其特异性强，为96.2%，仅次于结核培养，明显高于涂片法，且操作简便，只需2-3H即可完成。血清学方法检测结核抗体敏感度为63.2%，仅次于FQ-PCR法，但是特异性差，仅为76.2%，但是操作简便、快速、便于推广、无须特殊精密仪器，可作为结核诊断的一种重要的辅助方法［8］。而涂片法作为结核病最基本的细菌学检查方法，它所具有的直观、简便、价廉等优点，仍将是结核病实验室诊断的重要手段。所以应结合临床需要，合理选择实验室方法［3,4,9］。以利于结核病的诊断与治疗较少感染率，使结核病的患者率减低。

参考文献

［1］ 全国临床检验操作规则［M］．第3版.南京：东南人学出版社.

［2］ 中国疾病预防控制中心，痰涂片镜检质量保证手册［M］.北京：中国协和医科大学出版社.2004.5-18.

［3］ 赵雁林，尚美.我国结核病实验室诊断的现状［J］.中华检验医学杂志，2007，30（7）：725-728

［4］ 张诩，卢建平.四种结合分枝杆菌检测方法的临床应用评价［J］.中国防痨杂志，2006，28（1）16-17.

［5］ 梁晓海，黄平东。实时荧光定量聚合酶链反应检测肺结核患者痰标本价值的对照研究［J］，现代中西药结核.杂质006，15（13）：287.

［6］ 胡海利，荧光双标记定量检测对诊断结核病的临床意义［J］.上海医药.2002，23（9）：411-412.

［7］ 庄玉辉，结核病实验室诊断新技术研究应用中值得重视的问题［J］.中华结核和呼吸杂志.1999，22（3）：133.

［8］ 马秀玲，血清抗结核抗体对肺结核诊断的作用评价［J］.右江民族医学院学报.2003.3.

［9］ 王陇德.中国结核病控制现状及展望［J］.中华结核和呼吸杂志，2006，29：505-506.

作者单位：422800 湖南省邵东县人民医院