早期应用丹参川芎嗪注射液对局灶性脑缺血-再灌注损伤大鼠血-脑屏障通透性的影响

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[摘要] 目的:观察丹参川芎嗪注射液对脑缺血-再灌注(ischemic-reperfusion,IR)损伤大鼠血-脑屏障(blood brain barrier,BBB)通透性的影响。方法:荧光分光光度法测定大脑中动脉缺血-再灌注大鼠各个时间点伊文思蓝含量,在伊文思蓝漏出最多的时间点,比较丹参川芎嗪注射液组和盐水组伊文思蓝的含量。结果:再灌注后3 h脑组织中伊文思蓝含量开始增加,24 h达最高;在24 h时给予丹参川芎嗪注射液,伊文思蓝含量低于盐水组(P

[关键词] 丹参川芎嗪注射液;脑缺血-再灌注;血-脑屏障;伊文思蓝

[中图分类号] R-33[文献标识码]A [文章编号]1673-7210(2010)02(b)-012-02

Effect of Salvia Ligustrazine Injection on the permeability of blood brain barrier of focal cerebral ischemic-reperfusion injured rats

NIU Wenhua, NIU Xiaoyuan*, LIU Fengqin

(Department of Neurology, the First Affiliated Hospital of Shanxi Medical University, Taiyuan 030001, China)

[Abstract] Objective: To observe the effect of Salvia Ligustrazine Injection (SLI) on the permeability of blood-brain barrier (BBB) in rats. Methods: The cerebral artery ischemia-reperfusion model of Wistar rats were prepared by intraluminal middle, and the EB of brain tissue at different time points was determined by using quantitative fluorescence spectrophotometric determination. SLI treatment group and saline group were done at the point of the peak of permeability of BBB, and the effect of SLI on the permeability of BBB was observed. Results: EB began to increase 3 h after reperfusion 2 h after ischemia, and reached peak at 24 h. SLI was given to interfere 24 h after reperfusion, the amount of EB of SLI-treatment group was significantly lower than that of saline group (P

[Key words] Salvia Ligustrazine Injection; Cerebral ischemia-reperfusion; Blood-brain barrier; Evans blue

血-脑屏障(BBB)由三种结构组成:毛细血管内皮细胞、细胞间紧密连接、基底膜以及星形胶质细胞。它可以阻止血液中的某些物质向中枢转运,从而保证中枢神经系统内环境的稳定。脑缺血-再灌注损伤后,由于BBB开放,通透性改变,血液中的某些有害物质就会进入脑内,从而加重脑的损伤,因此对干预BBB的通透性的治疗具有重要的临床意义。丹参川芎嗪注射液已被广泛地用于心、脑、肾各个器官的保护性治疗[1-3]。本实验通过观察丹参川芎嗪注射液对脑缺血-再灌注后BBB通透性的影响,探讨其对脑缺血-再灌注损伤的保护作用,对临床应用具有指导意义。

1 材料与方法

1.1实验动物及分组

雄性SD大鼠,体重250～300 g。动物随机分为正常对照组及缺血-再灌注组,然后将缺血-再灌注组按照再灌注时间分为再灌注3、12、24、48、72 h组,每组6只。在EB含量漏出最多的时间点,设盐水组和SLI组。

1.2 动物模型制备及神经病学评分

1.2.1造模造模前大鼠禁食24 h,用10%水合氯醛(350 mg/100 g)腹腔注射,颈部正中切开皮肤,分别分离右侧颈总动脉(CCA)、颈外动脉(ECA)及颈内动脉(ICA),在ECA上剪一小口,将线栓子插入大脑中动脉(MCA)的开口处,鱼线插入深度平均为(18.5±0.5) mm。缺血后2 h实施再灌注,然后缓慢回抽鱼线,使其头端回撤至CCA内。假手术组不插入线栓,其他步骤同上。

1.2.2 神经功能评分参照Zea Longa 5分制神经功能评分,0分:肢体活动正常;1分:左侧前肢不能完全伸展;2分:行走时向左侧旋转;3分:行走时向左侧倾倒;4分:不能自发行走,意识丧失。0分和4分者均被剔除。

1.3 BBB通透性评价

按照Uyama等[4]的方法,在再灌注后各个时间点前1 h用10%水合氯醛腹腔注射麻醉,经股静脉注入2% EB生理盐水溶液(4 ml/kg)1 h后,左心室灌注生理盐水,断头取脑,取右侧背外侧新皮层,将其称重后匀浆,而后离心,提取上清液。上清液用无水乙醇按1∶3稀释,由荧光分光光度计测定其荧光值。根据标准曲线计算出EB含量(μg/ml),然后与组织的质量相比,得到每克脑组织的含量。

1.4 统计学方法

采用SPSS 13.0进行分析,多组定量资料间比较用方差分析,两组资料间比较采用t检验,显著性检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 脑缺血-再灌注不同时间点BBB通透性的变化

结果发现,大鼠脑缺血-再灌注后3 h脑组织EB含量较正常组增多,再灌注24 h达高峰,再灌注48 h、72 h EB含量较再灌注24 h时下降,但仍高于对照组。12 h组和48 h组之间差异无统计学意义(P>0.05)。

表1 不同时间点大脑皮层EB含量比较(x±s)

2.2丹参川芎嗪注射液对脑缺血-再灌注后BBB通透性的影响

在缺血2 h再灌注24 h设SLI组和盐水组,结果显示,SLI组脑组织EB含量明显低于盐水组。

表2 两组干预后脑组织EB含量比较(x±s)

3讨论

丹参、川芎为传统的活血化瘀中药,丹参可改善微循环、抗氧化、抗感染、下调ICAM-1和VCAM-1的表达[5-7]。川芎嗪可扩张血管、减少脑缺血时氧自由基的产生,发挥抑制神经细胞凋亡、抗感染等作用[8-9]。SLI是在丹参注射液与盐酸川芎嗪注射液的基础上研制出的中西药复方制剂,已被用于临床研究,集中体现了丹参注射液及盐酸川芎嗪注射液的功效。

本实验通过检测大鼠损伤侧脑组织内EB含量显示,在脑缺血-再灌注3 h时,EB含量开始增加,即BBB的通透性开始上升,再灌注24 h达高峰。取BBB通透性最大的缺血-再灌注时间点,给予丹参川芎嗪注射液干预,结果显示,丹参川芎嗪注射液能降低脑组织中的EB含量,即表示它能够降低BBB通透性的升高程度。已有研究表明,BBB通透性升高与脑组织缺血-再灌注损伤过程中过多生成的OFR与细胞膜不饱和脂肪酸发生反应生成过氧化脂质及损害血管内皮细胞膜结构密切相关[10]。丹参川芎嗪注射液中的丹参素和川芎嗪分子量小,可以直接透过BBB,从而能直接灭活黄嘌呤氧化酶,提高SOD活性[11],对脂质过氧化反应起到抑制作用,这可能是丹参川芎嗪注射液能够降低脑缺血-再灌注损伤大鼠BBB通透升高程度的原因。虽然本研究结果显示丹参川芎嗪注射液可减轻BBB通透性的升高程度,但是在此过程中丹参川芎嗪注射液的具体作用机制尚不明确,还需要做更进一步的后续研究。

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(收稿日期:2009-11-13)