不同日龄意蜂工蜂上颚腺10-HDA分泌规律研究*

开篇：润墨网以专业的文秘视角，为您筛选了一篇不同日龄意蜂工蜂上颚腺10-HDA分泌规律研究*范文，如需获取更多写作素材，在线客服老师一对一协助。欢迎您的阅读与分享！

蜜蜂工蜂上颚腺分泌的反式-10-羟基-2-癸烯酸(10-hydroxy-2-decenoic acid,10-HDA)是蜂王浆中最特色的功能成分之一。一般认为,作为蜜蜂幼虫和蜂王食物中主要成分之一的10-HDA,主要起到抑菌和营养的作用。Boch and Shearer(1967)研究发现,工蜂(原文未标明蜂种)头部10-HDA含量随日龄的增加而上升,含量变化为0～60 μg/bee。Plettner et al.(1997)曾报道,西方蜜蜂工蜂10-HDA平均含量为95 μg/bee。我国目前饲养的意蜂已经是长期本地驯化的品种,并且高产王浆的意蜂品种已在我国大部分地区推广使用多年,对其工蜂中10-HDA的分泌规律还未见研究,本试验以浆蜂本地驯化后代的意蜂为材料,对不同日龄的意蜂工蜂上颚腺10-HAD分泌规律进行了研究,现报道如下。

1材料与方法

1.1 材料

1.1.1蜂群

意大利蜜蜂(Apis mellifera ligustica)蜂群由福建农林大学蜂学学院教学蜂场提供。

1.1.2主要仪器

LC-20A高效液相色谱仪(日本岛津)(色谱柱:4.6mm×285mm不锈钢柱,填充物:不定形硅胶C18键合相,10μm);SHB-III循环水式多用真空泵(北京博医康实验系统有限公司)等。

1.1.3试剂

甲醇(色谱纯);无水乙醇(优级纯);对羟基苯甲酯,含量99.0%;10-hda标准品(纯度99.6%)。

1.2 方法

1.2.1意蜂工蜂人工羽化和标记

从意蜂群中提取出快出房的封盖子脾,放入35℃,75%～80% RH的恒温培养箱中培养。羽化当日的蜂部分作为0日龄冷冻保存备用,其余用油漆笔标记蜜蜂背板,以标记当天记为0日龄,标记后放回3群意蜂群。于标记后的第5、10、15、20天从蜂群中捕捉相应日龄的标记蜂,分别取得5,10,15,20,25,30日龄的工蜂,每日龄约取100只蜜蜂装袋,置冰箱冷冻保存。

1.2.2工蜂上颚腺中10-HDA的检测

(1)不同日龄工蜂上颚腺10-HDA含量的分泌规律研究。

取各日龄工蜂头部5个一组,做5个重复。将5个头部置于研磨器中加少量甲醇充分研磨后,移至10 mL容量瓶中,润洗3遍研磨器,加入容量瓶中,定容并摇匀后,置超声波浴中超声15min,然后用0.45μm的针式滤器过滤后待测。

(2)10日龄工蜂10-HDA分泌规律研究。对来自3群蜂的10日龄工蜂各30只,共90只,对逐个对每个头部按(1)中所述方法进行制样,检测10-HDA含量。

(3)10-HDA测定。吸取10-HDA标准溶液1mL,内标溶液2mL,至10mL容量瓶中,再加入甲醇至刻度,摇匀,用于高效液相色谱(HPLC)检测。色谱仪检测条件:波长210nm;流动相(CH3OH+0.03mol/L H3PO4+H2O)%=(55+10+35)%,流动相流速1mL/min。用标准品的峰面积,按比例计算样品中10-HDA含量。

2结果与分析

用HPLC对0、5、10、15、20、25、30日龄意大利蜜蜂工蜂头部10-HDA含量的测量结果如图1所示。由图可知,随日龄增长,工蜂头部上颚腺的10-HDA含量不断升高。尽管Boch and Shearer(1967)的文中未标明是蜜蜂种类,但推测应为西方蜜蜂的一种。本结果的这种日龄变化趋势与他们的结果相似。检测表明,0日龄工蜂上颚腺的10-HDA含量最低,平均6.72±2.98μg/bee,即每个上颚腺平均含3.36μg 10-HDA;此后,随日龄增长,10-HDA含量逐渐增加;至10日龄后,达到一定高峰,增速趋缓,10、15、20日龄的含量分别为45.20435±6.882246 μg/bee,45.3401±11.59839 μg/bee,46.05902±7.574184 μg/bee;至25日龄时,含量再次有所增加,至30日龄时已是0日龄含量的十几倍,为所测最高值,平均为56.00±15.8μg/bee,范围为33.43μg/bee～83.4μg/bee。

3讨论

对蜜蜂上颚腺中10-HDA含量已有不少研究,主要集中于信息素研究角度开展。有报道,0日龄的A. m. intermissa工蜂上颚腺中10-HDA含量仅有(0.140.06) μg(Moritz et al.,2002);室内饲养(无王状态)的0～4日龄海角蜜蜂(A. m. capensis)工蜂上颚腺10-HDA的含量随日龄增加而增加,0日龄为(0.770.26)μg,4日龄为(2.830.82)μg(原文未说明是1个上颚腺还是1对上颚腺的含量)(Simon et al.,2001)。有王群小蜜蜂(Apis florea)工蜂的10-HDA含量为10.1μg/bee(Keeling et al.,2000)。本试验对有王状态下意蜂工蜂上颚腺中10-HDA结果表明,0～30日龄,工蜂上颚腺中10-HDA含量总体呈逐渐上升的趋势,但10至20日龄时一直保持平衡,且30日龄含量达到最高。推测,10日龄后,腺体活性已达最高,但因10至20日龄工蜂均可能参与哺育饲养,腺体分泌物有一部分已分泌进入王浆中,而此后的25、30日龄,均成为采集蜂,未参与哺育,因而仍处于较高值,但采集蜂保持如此高的含量是否暗示此腺体的分泌物仍有其它生理功能的意义,这一现象背后的真正原因值得进一步研究。

参考文献:

[1] Boch R., Shearer DA. 2-Heptnone and 10-hydroxy-trans-dec-2-enoic acid in the mandibular gland of worker honey bees of different ages [J]. Zeitschrift für vergleichende Physiologic. 1967, 54: 1-11.

[2] Keeling CI, Slessor KN, Koeniger N, et al. Quantitative analysis of the mandibular gland components of the dwarf honey bee (Apis florea Fabricius) [J]. Apidologie. 2000, 31: 293299.

[3] Moritz RFA., Crewe RM, Hepburn HR. Queen avoidance and mandibular gland secretion of honeybee workers (Apis mellifera L.) [J]. Insectes Soc. 2002,49: 8691.

[4] Plettner E., Otis G. W., Wimalaratne PDC, et al.Species- and caste-dertermined madibular gland signals in honeybees (Apis) [J]. Journal of Chemical Ecology, 1997, 23 (2):363-377.

[5] Simon UE, Moritz RFA, Crewe RM. The ontogenetic pattern of mandibular gland components in queenless worker bees (Apis mellifera capensis Esch.) [J]. Journal of Insect Physiology. 2001.47:735738.