抗纤维蛋白抗体在血栓性疾病中的应用
开篇：润墨网以专业的文秘视角，为您筛选了一篇抗纤维蛋白抗体在血栓性疾病中的应用范文，如需获取更多写作素材，在线客服老师一对一协助。欢迎您的阅读与分享！
【摘 要】利用抗纤维蛋白抗体的血栓导向作用进行显影，或将其与溶栓剂联接以提高局部浓度，减少用药量，降低副作用，是目前诊断和治疗血栓性疾病的发展方向。本文就抗纤维蛋白抗体的制备及其在血栓性疾病研究方面的动态和应用进行了讨论。
【关键词】抗纤维蛋白抗体；血栓显影；溶栓治疗
【中图分类号】R54 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484（2013）04-0105-02
肺栓塞、深静脉血栓、中风及动脉粥样硬化等许多危害人类健康的疾病，均是由血管壁受损或病理过程激活凝血因子，从而导致血小板和纤维蛋白聚集形成血栓引发的[1]。精确诊断和靶向治疗被认为是治疗血栓性疾病最有效的办法。
由于现有药物溶栓特异性不高，半衰期短，且存在出血危险等缺点，因此寻找和研制溶栓成功率高、副作用小的药物具有重要的意义。纤维蛋白作为血栓各种成分的支架，是理想的抗体靶标。抗纤维蛋白抗体与放射性核素或溶栓效应分子结合可用于血栓性疾病的定位诊断和导向治疗，有很好的应用前景。
1 纤维蛋白原与纤维蛋白
人纤维蛋白原是一种由肝细胞合成并分泌的糖蛋白，分子量为340kd。纤维蛋白原分子由三对非等同的多肽链Aα、Bβ和γ组成，呈两侧对称性排列，链内及链间含有29个二硫键 [2]。凝血酶作用下，释出纤维蛋白肽A（FPA）和纤维蛋白肽B（FPB）的纤维蛋白单体纵向平行靠拢形成长链状的纤维蛋白多聚体，并进一步聚合形成纤维蛋白网，可捕捉大量的红细胞和血小板。
2 纤维蛋白特异性表位
已确定的纤维蛋白特异性表位有Aα（17-22）、Aα（52-78）、Aα（148-160）、Aα（502- 521）[3]、Bβ（15-21）、Bβ（118-134）[4]、γ（312-324）等。其中，Aα（148-160），γ（312-324）为组织性纤溶酶原激活物t-PA的结合位点。
3 抗纤维蛋白抗体的制备
3.1 杂交瘤技术
利用杂交瘤细胞制备单克隆抗体的技术，已非常成熟。以γ（311-324）为表位，制得抗γ（311-324）抗体与纤维蛋白原浓度为2.4 mg/mL的正常血浆无反应，当纤维蛋白浓度在0.1～1 pg/mL 时，仍能与其特异性结合。
但单克隆抗体也存在一些问题：分子量大，血液清除慢，组织穿透能力差，T/NT比值低，生产成本高，且鼠源性单抗对人有较高免疫原性，重复注射会产生人抗鼠抗原抗体反应。
3.2 噬菌体展示技术
噬菌体表面展示技术以噬菌体为载体，将待选基因片段定向插入外壳蛋白基因区，展示于噬菌体表面，进而通过亲和富集法筛选表达有特异肽的噬菌体。该技术简单易行、生产成本低、筛选容量大，且获得的抗体易于标准化。
已有利用噬菌体抗体库技术，成功获得具有纤维蛋白凝块特异性的人单链抗体scFv片段的报道。Charles等[5]为保证纤维蛋白特异性，先将构建的噬菌体展示环肽库与纤维蛋白原结合，取未结合的上清进行后续实验，获得了靶向纤维蛋白来源的可溶多肽DD（E）的肽段。
3.3 高通量虚拟筛选技术
采用三维药效基团模型搜索或者分子对接的方法，在化合物数据库中搜索可能的活性化合物，再进行药理测试的高通量化虚拟筛选方法，因具有效率高、费用低、不存在样品限制的优点，是目前新药研究的重要手段。
Bianucci等针对纤维蛋白表位γ（312-324），使用ZINC数据库[6]，采用DOCK程序对接并打分，筛选获得高亲和力配体。利用表面等离子共振技术、生物学实验、荧光检测法对初步筛选到的配体进行鉴定，计算结合自由能[7]，发现大部分配体与靶标结合力较强。此前，针对纤维蛋白表位γ（312-324）的内源或合成的高亲和力配体尚未被发现。
4.1 导向溶栓剂
导向溶栓是指将药物选择性地输送到血栓部位，并在该靶位发挥溶栓作用。
59D8是抗人纤维蛋白β链（15-21）的单抗。将59D8的Fab’（或IgG）通过共价键与重组水蛭素相连，抑制血凝块表面纤维蛋白的沉积率增加了10倍以上（P
由于化学结合会导致产量降低，并部分损失水蛭素的溶栓活性，Peter等[9]利用基因融合技术，并在水蛭素与59D8之间插入凝血因子Ⅹa的识别位点，使融合蛋白的活性只能通过凝血因子Ⅹa切割获得。重组融合蛋白scFv59D8-scuPALMW在保留激活纤溶酶原能力的同时，具有纤维蛋白特异性结合力，与临床使用的尿激酶型纤溶酶原激活物相比，能更快更强的发挥溶栓效果[10]。
MA-15C5是鼠抗人交联纤维蛋白D-双聚体单克隆抗体，靶向已交联的陈年血块。杨慧等[11]首创使用脂质体包裹尿激酶与D-双聚体单抗复合物（Ab-UK-Lip），在兔腹主动脉血栓模型中进行靶向溶栓实验，以保护UK和抗体，统计各组血压变化发现，Ab-UK-Lip组和UK组效果相似，但UK用量仅为后者的1/3。作为UK-Lip的归巢装置，D-双聚体单抗在溶栓治疗中有良好的靶向性。
4.2 血栓显影
寻找结构稳定、特异性强的血栓显影剂，对于及时发现准确的栓塞部位，指导手术进行，挽救器官组织的缺血性坏死，有较高的实际应用价值。
按不同剂量给予26例急性下肢深静脉血栓患者99mTc标记的抗D-双聚体单抗的Fab’ 片段99mTc-DI-DD3B6/22-80B3，生物分布、免疫原性、药代动力学等方面评价其安全性，发现99mTc-DI-DD3B6/22-80B3其耐受性良好，可有效应用于急性深静脉血栓的检测[12]。