呕必宁对顺铂所致脑组织5-HT含量变化的影响
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(辽宁中医药大学，辽宁 沈阳110032)
摘要：目的：探讨中药复方呕必宁防治化疗药诱发呕吐的中枢机制。方法：应用行为学与分子生物学的方法，比较对照组、NS组、中药组实验动物静脉注射DDP前后，动物呕吐反应，血、脑脊液中DDP浓度，脑脊液、脑组织中的5－HT,5－HIAA含量变化。结果：注射DDP后与NS组比较，中药组猫的呕吐率下降；与此同时脑脊液中DDP浓度明显低于NS组、脑脊液及脑组织中5－HT和5-HIAA浓度较NS组显著降低。结论：呕必宁对DDP所致呕吐反应具有防治作用，其机制可能与降低猫脑脊液中DDP的浓度，降低脑脊液、脑组织中5－HT，5－HIAA含量有关。
关键词：呕宁；化疗吐；DDP；5－HT；5－HIAA
中图分类号：R－33 文献标识码：A 文章编号：1673－7717(2007)05－0869－03
迄今的研究结果认为化疗药致呕吐机制主要为胃肠道及中枢两方面机制，关于中药复方防治化疗药所诱发呕吐的研究胃肠道机制已经报道，文章从神经中枢角度对中药复方防治化疗药诱发呕吐的可能机制进行了实验研究，报道如下。
1、实验材料与方法
1.1动物 健康杂种猫，体重为2.4～2.8kg，为12～18月龄，雄雌不限，均由辽宁中医药大学实验动物中心提供。1.2呕必宁组成 半夏15g，干姜15g，黄芩15g，竹茹15g，炙甘草10g，旋覆花(包煎)15g，人参15g，大枣15g等。由辽宁中医药大学附属医院药局提供，按常规方法煎煮后，浓缩成1g/mL浓度(相当于每毫升含生药1g)，置4℃冰箱保存备用。
1.3试剂及仪器 顺铂(DDP)由山东德州制药厂生产，批号：990305。正丁醇由上海油脂化工厂生产。5－HT、5－HAA标准品：均由中国医科大学生化检测中心提供。荧光剂：邻苯二甲醛，瑞士产。美国BIO－AND酶标仪。日本日立180－80型原子吸收分光光度计。
1.4动物分组 本实验共使用猫计30只，实验前进行适应性饲养1周后，按体重及试验的时间段随机分组：①对照组；②生理盐水组(NS组)；③呕必宁组(中药组)。每组10只，同步饲养。
1.5给药时间方法及标本制备 对照组不给与任何处置。Ns组及中药组每组给药量按人体一猫体表面积换算的等效剂量比率表换算如下：DDP 5mg/kg，中药5mL/kg。NS组于实验前2天经胃管灌服NS 5.0mL/kg体重；中药组灌服中药煎液5mL/kg体重，日2次分别于早晚8:00时进行，在灌服的5天后，即第10次灌服之后经股静脉缓慢注射DDP或NS(5mg/kg)。于注射后12h经股静脉采血和经枕骨大孔采脑脊液，用于测DDP、5－HT和5－HIAA。断头处死后立即采集延髓区脑组织1g，加5倍体积酸性正丁醇，置于4℃中进行研磨，制备匀浆，3000r/min离心5min后提取2mL上清液，采用文献方法测定脑组织中5－HT，5－HIAA的含量。血清及脑脊液中铂(Pt)的测定采用无火焰原子吸收分光光度法。
1.6呕吐发生频率观察 本观察在动物清醒状态下进行，参照WHO临床试验常见副反应中的呕吐分级标准，将24h内动物呕吐情况分为5级。0级：无呕吐动作发生；1级：出现1～2次呕吐动作；2级：出现3～5次呕吐动作；3级：出现5～10次呕吐动作；4级：出现10次以上呕吐动作。
1.7数据处理 本实验数据均用x±s表示，利用SPSS10.O统计软件进行分析，采用t检验及相关性检验进行统计学处理。
2实验结果
2.1 呕必宁对DDP所致猫呕吐频率的影响 如表1所示：与对照组比较，NS组注射DDP后0.5～3h内大多数动物开始出现频繁的呕吐反应，呕吐多为胃内容物。在DDP后1～8h期间呕吐反射最为明显，个别可持续到注射DDP后12h以后。中药组中也有4例动物出现呕吐反应，但均发生在注射DDP后1～3h左右，并且其表现比较轻，注射DDP 12h后呕吐反射动作不再发生。
2.2呕必宁对静注DDP后血清和脑脊液中DDP分布的影响如表2所示：在静注DDP后，NS及中药组动物血中DDP浓度在注射后12h，组间无显著性差异(P＞0.05)。脑脊液检测结果发现，脑脊液中的DDP浓度与同时间的血中DDP浓度比较，明显低于血中。而中药组脑脊液中DDP浓度始终低于NS组，差异十分显著(P＜0.01)。
2.3呕必宁对DDP所致脑脊液中5－HT 5－HIAA浓度变化的影响 静注NS和DDP后，NS组与中药组脑脊液中5－HT和5－HIAA浓度明显高于对照组(P＜0.01)。与NS组比较，中药组脑脊液中5－HT，5－HIAA的浓度虽然也升高，但是其升高的幅度明显低于Ns组(P＜0.01)。
2.4呕必宁对DDP所致脑组织中5－HT 5－HIAA含量变化的影响 脑组织中5－HT,5－HIAA含量变化与脑脊液中5－HT，5－HIAA的浓度改变有着相似的规律，在静脉注射DDP后同对照组比较，NS组脑组织中5－HT,5－HIAA的含量均明显升高(P＜0.01)，而中药组中5－HT，5－HIAA的浓度虽然也升高，但与NS组比较，则明显降低(P＜0.01)。
3讨论
化疗药DDP所诱发恶心呕吐反应的中枢机制研究表明，大量的DDP或其代谢产物可通过血脑脊液屏障薄弱区域进入中枢神经系统内，促使中枢神经细胞的相关部位释放过量的5－HT，后者与其催吐化学感受触发区(CTZ)细胞膜表面的5－HT3受体结合，使该区域兴奋，进而兴奋呕吐中枢，引起呕吐反射。
本实验中发现，静脉注射DDP后不同观察的时间段中，NS组猫的呕吐频率显著增加，与此同时其血中、特别是脑脊髓液中的DDP浓度明显上升、脑脊液及脑组织中的5－HT以及其代谢产物5－HIAA含量伴随着血、脑脊髓液中DDP浓度的上升而明显升高，表明此时猫的频繁呕吐反应与体内上述组织中的5－HT、5－HIAA浓度和含量升高有着直接关系。证明了DDP进入血液后可以通过血脑屏障或血－脑脊液屏障进入脑组织，并促进脑组织中5－HT、5－HIAA的释放增多，激动了CTZ区域的5－HT，受体，进而兴奋了呕吐中枢导致呕吐的发生。因此，减少化疗药物进入中枢神经系统内、抑制5－HT的过量分泌、阻断5－HT受体是其防治化疗诱发呕吐反应的途径之一。
实验结果表明，与NS组比较中药组猫的呕吐次数频率明显减少，且呕吐反应的级别也明显轻微，表明呕必宁对DDP所致呕吐具有显著的防治的作用。从实验结果来看，灌服中药组在DDP后猫发生呕吐反应明显轻于Ns组的同时，脑脊液中DDP浓度明显低于NS组，脑脊液中5－HT、5－HIAA的浓度及脑组织中5－HT、5－HIAA的含量也明
显低于NS组，且可较快恢复正常。说明呕必宁可以降低血脑屏障对DDP的通透性，减少DDP进入脑脊液的量，进而抑制了DDP所诱发的脑组织的5－HT的释放，减轻了5－HT对呕吐中枢的刺激而达到防治DDP致呕的作用。
中医学理论没有化疗致呕吐的记载，但根据其症状可归为“呃逆”证范畴。中医理论认为胃主受纳和腐熟水谷，其气主降，以下行为顺，若邪气犯胃或胃虚失和，气逆而上则发生呕吐。本症有虚实之分，实者因邪气内传，虚者则中阳损伤，导致心下痞满，脾胃之气升降失和，气逆作呕。防治大法当降气以平上逆，益气以补正虚。呕必宁以《伤寒论》中半夏泻心汤药味为主化裁而成。方中黄芩、黄连苦寒泻热而降阳，干姜、半夏辛温散痞而和阴，佐以竹茹甘寒清热安胃止呕，旋复花辛温下气、化痰而降逆，再加人参、炙甘草、大枣以补益被下药误伤的脾胃之气，使阴阳升降恢复正常，自然上下交通，痞满恶逆可除、呕吐自止。
中药复方防治DDP所致呕吐的中枢机制虽未见报道，但现代药理研究发现：半夏可通过抑制呕吐中枢与CTZ而防治少量吗啡或硫酸铜所致猫的呕吐，对洋地黄所致鸽的呕吐也有止吐作用；半夏和生姜合用对中枢可产生协同作用。生姜辣味成分姜烯酚和姜酚有抑制呕吐中枢的作用。其中二萜成分Galanolactone有拮抗5－HT受体作用，进而抑制呕吐中枢的兴奋性；旋覆花中的有效成分能增加小肠蠕动，促进胃排空，调节消化道运动功能以恢复正常；甘草具有解痉作用，可明显缓解胃肠平滑肌痉挛；大枣中所含cAMP浓度是其它生药的1000倍左右，具有抗组织胺和5－HT释放的作用。
根据本研究结果结合以上药理研究可以看出，呕必宁防治DDP所致的呕吐中枢机制，可能通过降低血－脑脊液屏障对DDP的通透性，减少DDP对中枢神经系统刺激、进而抑制了5－HT的过量分泌对5－HT受体的激动，减少从催吐化学感受区向呕吐中枢的兴奋传导，降低其兴奋性而抑制呕吐发生。
本实验结果表明，中医学的“胃气上逆”的现代医学病理学改变之一，是与上述中枢组织中5－HT，5－HIAA的含量明显升高有关；而“降逆止呕”的药理学机制之一与减少或抑制中枢组织上述物质的合成、释放密切相关。
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