老年人口腔细胞角蛋白与口腔扁平苔藓关系的临床研究

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[摘要] 目的 探讨老年患者口腔CK与OLP的相关性，为临床的疾病诊断和制定治疗方案提供依据。 方法 32例病例样本来源于我院口腔科经病理学检验确诊的OLP患者颊部病变组织，为研究组；另取同期口腔拔牙患者健康口腔黏膜组织30例，为对照组；进行样本制备和垂直电泳处理，观察两组样本的CK阳性情况。 结果 研究组患者CK2、CK4和CK5阳性率明显低于对照组，而研究组CK10、CK13和CK14的阳性表达率明显高于对照组（P

[关键词] 老年患者；口腔细胞角蛋白；口腔扁平苔藓；相关性

[中图分类号] R781.5 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2013）25-0149-02

老年人体质差，易发生各类口腔感染。口腔扁平苔藓（OLP）是一种较为常见的口腔内慢性非感染性病变，主要发病于口腔黏膜，表现为上皮的过度角化，可累及口腔颊、牙齿、舌等其他部位的黏膜组织，属于免疫反应性疾病的一类[1]。目前临床对OLP的治疗比较困难，易反复且有恶性倾向，被世界卫生组织（WHO）列入到癌前状态范畴中。研究表明，细胞角蛋白（CK）与上皮角质细胞的增殖具有相关性[2]。CK属于角质细胞中的骨架性蛋白，多于上皮细胞中表达，具有组织分化的特异性和高度保守性[3]。为探讨老年患者口腔CK与OLP的相关性，给临床的疾病诊断和制定治疗方案提供依据，早期遏制癌变，笔者选取我院自2011年6～12月间收集的OLP标本共32例，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料

32例病例样本来源于我院口腔科经病理学检验确诊的OLP患者颊部病变组织，为研究组，其中男18例，女14例；年龄60～82岁，平均（69.4±5.3）岁；排除服用激素类药物患者和有口腔黏膜病变者。另取同期口腔拔牙患者健康口腔黏膜组织30例为对照组，其中男15例，女15例，年龄60～78岁，平均（66.2±4.8）岁。

1.2 方法

1.2.1 仪器与试剂 采用北京天诚活德生物技术有限公司提供的DYY-12C型号电泳仪，由同厂提供的DYCZ-30型夹芯式垂直电泳槽。紫外可见分光光度计由上海精密仪器仪表有限公司供应，型号UV-3200PCGLP。聚偏二氟乙烯（PVDF）膜由美国BIO-RAD伯乐公司生产。鼠抗人广谱细胞角蛋白（P-CK）单克隆抗体由上海丽臣生物科技有限公司供应，配有ELISA试剂盒。辣根过氧化物酶标记羊抗小鼠IgG由上海万安生物科技有限公司提供。DAB染色试剂盒由北京赛驰生物科技有限公司提供。

1.2.2 样本制备 取两组口腔黏膜标本各分为2份，一份行病理学HE染色验证确诊，一份行样本制备与检测。将口腔黏膜标本置入浓度3 mmol/L的乙二胺四乙酸（EDTA）无钙镁磷盐缓冲液中，置于37℃环境下静置2 h后取出，利用显微外科组织镊在10×4倍的观察视野下分离上皮组织。分离后的上皮组织置入碾钵中，加入液氮研磨至粉末状，再加入高盐缓冲液1 mL，于4℃环境下匀浆1 h后，移入离心管进行离心处理10 min，转速5 000 r/min，弃除上清液后，将沉淀物重悬于低盐缓冲液中，继续混匀搅拌，于4℃环境下移入离心管离心处理5 min，转速5000 r/min，再次弃除上清液，将沉淀物以PBS洗涤5 min，第3次离心，转速5 000 r/min，弃除上清液，沉淀物加入细胞角蛋白溶解液1 mL后于沸水浴中搅拌7 min，冷却后再行离心，离心后上清液用紫外分光光度计测定蛋白定量，蛋白浓度为2.5 μg/μL。

1.2.3 电泳 进行聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳，凝胶上的样孔均匀分为两份，各放入5个样本，两份样本一一对应。两份凝胶一份使用考马斯亮蓝R250进行染色处理后观察色带变化情况，另一份应用Western杂交电泳处理，证实获得蛋白条带属于角蛋白。各样品槽内加样，浓缩胶5%，分离胶12%。电泳后将凝胶切取一半移至PVDF膜上，再使用封闭液封闭好，于4℃环境下静置过夜，次日加入抗CK抗体，静置于4℃环境下过度，再以PBST液洗涤PVDF膜，反复3次后，加入辣根过氧化物酶，二抗标记，置于37℃环境下行2 h振荡，取出后用PBST洗涤PVDF膜，反复3次，参照DAB染色试剂盒的相关说明进行显色处理。

1.3 统计学方法

获得数据录入统计学软件包SPSS15.0中并建立数据库进行数据分析，计数资料采用χ2检验，P

2 结果

分别对研究组和对照组检验样本中CK阳性率进行比较，两组计数资料CK2、CK4和CK5、 CK10、CK13和CK14分别进行卡方检验，见表1，研究组患者CK2、CK4和CK5阳性率明显低于对照组，而研究组CK10、CK13和CK14的阳性表达率明显高于对照组，差异有统计学意义（P

3 讨论

OLP的病理改变与CK的变化密切相关。李宁等[4]研究指出，基底层细胞凋亡过程中角质形成细胞形成嗜伊红小体，尤以OLP基底膜破坏区域、炎性细胞浸润区域、上皮T细胞侵入区域等更为明显。基底细胞可通过将抗原提呈给细胞毒性T细胞促成角质形成细胞形成免疫损伤的靶细胞，从而降低黏膜上皮的自我修复能力，促进OLP的形成及进展。CK主要于上皮组织细胞表达，属于细胞中间丝的主要成分，研究认为其具有高度的组织和细胞特异性[5]。

CK2是二型细胞角蛋白，简洁等[6]报道口腔黏膜中的角化上皮和非角化上皮一般情况下较少出现在CK2的表达。Presland等[7]研究OLP中未发现CK2的表达。在本组研究中，研究组的CK2无表达，对照组的CK2表达阳性率仅20%，与相关报道相符，提示在正常口腔黏膜组织中可能存在不稳定CK2，但OLP可能引起DK2的表达减少甚至是消失。CK4属于上皮分层和非角化标志，一般和CK13形成角蛋白对，于口腔上皮组织中呈现。CK5属于基底层标志，一般是与CK14呈现角蛋白对，二者可形成弹性纤维网，从而适应细胞分裂以及组织形成变化，为细胞的形变提供环境。在本组研究中，CK4、CK5在研究组中的表达均极少，在对照组中表达相对多，与CK2的表达相似，笔者认为可能是OLP的进展引起CK4和CK5的减少或消失。CK2、CK4、CK5在OLP中表达不足可作为临床研究的一种现象，但其消失过程及诱因等仍需进一步的临床深入研究。

CK10、CK13和CK14是目前对OLP研究中较为关注的几种角蛋白，毛良军[8]直接对该三种CK的显微镜下表现进行报道，并指出该三种CK表达的变化与OLP病灶的角化、增殖和分化有关。CK10作为角化标志，在角化复层的鳞状上皮基底层中表达，在细胞角化的过程中产生变化。CK10过度表达可能会致使上皮细胞的角化和分化，在本组研究中研究组DK10阳性率明显高于对照组，提示CK10在OLP中存在过度表达，可能也是引发OLP发病及进展的因素之一。CK13属于细胞分层与分化的标志，主要于颊黏膜上皮的基底组织上层表达，临床可通过CK13的表达了解上皮组织的分化与成熟情况。在本组研究中，研究组CK13阳性率明显高于对照组，提示CK13的表达过度可能影响OLP上皮细胞的分化与分层。CK14属于基底层的标志，主要集中表现在基底层细胞中，由于基底层细胞具有较高的分裂与增殖能力，因而CK14的变化可表达细胞分裂增殖的能力与程度。在本组中研究组CK14阳性率明显高于对照组，提示CK14的过度表达可能影响到OLP上皮细胞加强增殖与分裂，从而引发病变或加重病情。

总之，口腔细胞角蛋白与口腔扁平苔藓的发病有一定相关性，CK2、CK4、CK5的浅表达和CK10、CK13、CK14的过表达，影响上皮细胞组织的增殖、分裂、角化等，进而影响OLP的发病。当然，CK与OLP相关性之间的病理因素仍需要进一步研究获得。

[参考文献]

[1]田燕，刘玮，吴延芳，等. 细胞分化标志分子在扁平苔藓皮损中异常表达的研究[J]. 临床皮肤科杂志，2010，31（8）：448-450.

[2]汪群，诸焕颖，孙红英. 人口腔扁平苔藓角质形成细胞的体外培养及生物学鉴定[J]. 复旦学报，2007，34（5）：776-778.

[3]毛良军，古亚兰，聂敏海，等. 细胞角蛋白10、13、14和19在OLP中的表达研究[J]. 临床口腔医学杂志，2007，23（12）：710-712.

[4]李宁，翦新春. 口腔扁平苔藓中细胞角蛋白19的表达及意义[J]. 临床口腔医学杂志，2008，24（5）：307-309.

[5]于世凤. 口腔组织病理学[M]. 第5版. 北京：人民卫生出版社，2006： 200-202.

[6]简洁，聂敏海，古亚兰，等. 细胞角蛋白在口腔扁平苔藓中表达的电泳研究[D]. 泸州医学院，2008：1-32.

[7]Presland RB，Dale BA. Epithelial structural proteins of the skin and oral cavity：function in health and disease[J]. Crit Rev Oral Biol Med，2010，11（4）：383-386.

[8]毛良军. CK10、CK13、CK14、CK19在口腔扁平苔藓中的表达研究[D]. 泸州医学院，2007：12-53.