穴位埋线治疗大鼠非酒精性脂肪肝的实验研究

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（浙江省中医院，浙江 杭州 310006）

摘 要：目的：观察穴位埋线对非酒精性脂肪肝的治疗作用。方法：采用高脂饮食喂养12周建立非酒精性脂肪肝大鼠模型后以中脘、气海、天枢（双）穴位埋线治疗8周，常规HE染色检测肝组织的脂肪变和炎症程度，生化法检测血清和肝组织甘油三酯、胆固醇及血清ALT、AST的变化，ELISA法检测血清TNF-α含量。结果：模型组大鼠肝组织可见弥漫性肝细胞脂肪变和不同程度炎细胞浸润，血清及肝组织脂质代谢紊乱，血清ALT、AST水平及TNF-α水平较正常组明显升高，应用穴位埋线治疗后，大鼠肝组织脂肪变和炎症程度明显减轻，肝组织TG、CHOL含量明显下降，血清ALT、AST水平及TNF-α含量明显降低。结论: 穴位埋线对非酒精性脂肪肝有较好的治疗作用，其作用机制可能与其调节脂质代谢、降低血清TNF-α水平有关。

关键词：非酒精性脂肪肝；穴位埋线；中脘；气海；天枢

中图分类号：R285.5文献标识码：A文章编号：1673-7717（2011）03-0543-02

收稿日期：2010-10-09

基金项目：浙江省中医药科技计划资助项目（2007CB146）

作者简介：龚秀杭（1957-），女，浙江杭州人，副主任中医师，研究方向：针刺疗法治疗消化系统疾病、妇科疾病。

近年来，随着人们生活水平的提高和饮食结构的改变，非酒精性脂肪肝的发病率不断上升，发病年龄趋于低龄化，并且部分患者可进展到终末期肝病，因而已成为人们普遍关注的一个公共健康问题。本实验选择经济方便的穴位埋线作为治疗手段，观察其对高脂诱导的大鼠非酒精性脂肪肝的影响，为临床防治提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物 SD大鼠24只，雄性，清洁级，体重190～210g，由上海西普尔――必凯实验动物中心提供。

1.2 主要试剂 胆固醇（批号061108）为上海伯奥生物科技有限公司，3号胆盐（批号20061206）为杭州微生物试剂有限公司产品， ALT（批号6653/31033/6）、AST（批号6730/31595/1）、TG（批号571/019/1）、CHOL（批号130/017/1）、HDL（批号6660/31043/1）为上海申能-德赛诊断技术有限公司产品，HDL（批号0060428-2）为上海复星长征医学科学有限公司，TNF-αELISA试剂盒（批号QRCT300333）为美国ADL公司产品。

1.3 NASH模型的建立 大鼠每天予以高脂饲料（82%普通标准饲料＋10%猪油＋2%胆固醇＋1%胆盐＋5%蛋黄粉）喂养，连续12周建立非酒精性脂肪性肝病模型大鼠。

1.4 分组及处理 24只大鼠随机分为正常组、模型组及穴位埋线组，每组8只，正常组每天予普通饲料喂养20周；模型组前12周每天给予高脂饲料喂养，后8周改这普通饲料喂养；穴位埋线组前12周每天给予高脂饲料喂养，后8周改为普通饲料喂养，同时从第13周第1天起采用穴位埋线方法进行治疗，穴位选用中脘、气海、天枢（双）［1］，用消毒镊子将0.5cm生物可降线置于一次性埋线器具［京药监械（准）字2005第2270643号］套管内，消毒皮肤，快速刺入特定穴位皮下，14天后重复，共4次，疗程8周。实验第20周未禁食不禁水16h，次日空腹取血及肝组织进行下列检测。

1.5 检测指标 肝组织病理学检查：常规HE染色，光镜下观察肝脏细胞脂肪变性及炎症浸润程度，非酒精性脂肪性肝病的病理组织学诊断参考2006年2月中华医学会肝脏病学分会脂肪肝和酒精性肝病学组修订的“非酒精性脂肪性肝病诊疗指南”［5］，其中脂肪变程度分4度：F0（-）、F1（+）、F2（2+）、F3（3+）、F4（4+）；炎症程度分为3级：G0（-）、G1（+）、G2（2+）、G3（3+）。血清ALT、AST、TG、CHOL、HDL-C、LDL-C采用全自动生化仪检测；肝组织匀浆TG采用异丙醇提取、氧化铝吸附磷脂和乙酰丙酮显色法测定，CHOL采用异丙醇提取，高铁、硫酸显色法测定。血清TNF-α采用ELISA法测定。

1.6 统计学方法 采用SPSS 12.0 for Windows软件包统计，计量资料采用单因素方差分析和多重比较，等级资料采用χ2检验。

2 结 果

2.1 穴位埋线对非酒精性脂肪肝大鼠肝脏组织学影响 正常组大鼠肝组织光镜下未见明显异常；模型组大鼠肝组织仍可见中到重度弥漫性肝细胞脂肪变，伴小叶内炎症及汇管区有炎细胞浸润，以小叶内炎症明显，个别有碎屑样坏死；穴位埋线组大鼠肝组织脂肪变以中度为主，肝组织的炎症程度较模型组显著降低（P

表1 穴位埋线治疗对非酒精性脂肪肝大鼠

肝组织脂肪变程度的影响（例）

注：与正常组比**P

2.2 穴位埋线对非酒精性脂肪肝大鼠脂质代谢的影响 模型组、穴位埋线组大鼠血清CHOL、LDL-C均较正常组

表2 穴位埋线治疗对非酒精性脂肪肝大鼠

肝组织炎症程度的影响（例）

注：与正常组比**P

显著升高（P0.05）；见表3。模型组、穴位埋线组大鼠肝匀浆TG、CHOL含量较正常组明显增高（P

表3 穴位埋线治疗对非酒精性脂肪肝

大鼠血脂的影响（mmol/L，±s）

注：与正常组比*P

表4 穴位埋线治疗对非酒精性脂肪肝大鼠

肝组织TG CHOL含量的影响（mg/g，±s）

注：与正常组比*P

2.3 穴位埋线对非酒精性脂肪肝大鼠血清ALT AST的影响 模型组大鼠血清ALT、AST水平较正常组明显增高（P

表5 穴位埋线治疗对非酒精性脂肪肝大鼠

血清ALT AST的影响（U/L，±s）

与正常组相比*P

2.4 穴位埋线对非酒精性脂肪肝大鼠血清TNF-α的影响 模型组大鼠血清TNF-α含量较正常组明显增高（P

表6 穴位埋线治疗对非酒精性脂肪肝大鼠

血清TNF-α的影响（ng/mL，±s）

注：与正常组相比*P

3 讨 论

有关非酒精性脂肪肝的治疗，目前所提倡的首先是修正生活方式（如调整饮食结构和增加有氧运动并长期保持），在此基础上，根据病情的程度分别联合应用胰岛素增敏剂、降血脂药、抗氧化剂、多价不饱和卵磷脂、熊去氧胆酸（UDCA）以及中药单、复方等。但是由于非酒精性脂肪肝的发病机制复杂，许多问题尚在研究之中，可供用于治疗的药物极其有限，迄今为止尚未找到治疗脂肪肝的特效药物。

中医认为，非酒精性脂肪肝是由于过食肥甘厚味，或情志失调，或久病体虚，引起肝失疏泄、脾失健运、湿热内蕴、痰浊郁结、瘀血阻滞而最终形成湿痰瘀阻互结，痹阻肝脏脉络而成。脾虚失运为本病发病的内在基础，痰湿内蕴、气滞血瘀为其的主要病机特点。临床上常采用健脾、行气、化痰、祛瘀的治疗原则。穴位埋线是国医针灸延伸，它通过针具把生物可降解线注入相应穴位，其线体分解吸收过程中产生生理、物理作用和生理化学变化，产生刺激信息和能量,经经络传入体内；由于线体长期持续刺激穴位,可提高穴位的兴奋性与传导性。本研究采用中脘、气海、天枢穴位埋线治疗高脂饮食诱导的非酒精性脂肪肝，结果发现，该治法能调节高脂饮食诱导的脂肪肝大鼠脂质代谢紊乱，改善肝组织脂肪变和炎症程度，降低血清ALT、AST水平，对非酒精性脂肪肝有较好了治疗作用。中脘穴为腑之幕穴配合大肠的幕穴天枢有健脾理气化痰,调畅三焦气道作用；《针灸大成》曰天枢穴“治妇人女子瘕，血结成块，漏下赤白，月事不利。”有活血祛瘀的功能；补气要穴气海穴又被称为丹田,可以补充宗气,加强脏腑功能；诸穴合用可共奏健脾行气,祛瘀化痰之功效，从而达到治疗非酒精性脂肪肝的目的。

“二次打击”学说是目前较为认可的非酒精性脂肪肝的发病机制，“第一次打击”是指脂质，尤其是脂肪酸和甘油三酯在肝细胞中的蓄积，一旦造成肝细胞脂肪变后，会由于信号转导途径的改变而产生细胞适应；但此时的肝细胞易受到“第二次打击”而致细胞凋亡或细胞坏死［2-3］。脂肪组织和脂变肝细胞可分泌许多脂肪细胞因子参与介导氧应激，实施二次打击，其中包括TNF-α等。在脂肪肝的形成中,TNF-α除参与氧化应激外，对肝细胞有直接毒性，并可通过激活NF-κB触发其它细胞因子或粘附分子的分泌（如IL-1、IL-8和细胞间粘附分子）从而加重炎症和损伤［4］。本研究发现，TNF-α参与了非酒精性脂肪肝的发病，穴位埋线能降低非酒精性脂肪肝大鼠血清TNF-α水平，这可能是其治疗非酒精性脂肪肝的重要机制之一。

参考文献

［1］ 林文注, 王佩. 实验针灸学［M］. 上海: 上海科学技术出版社, 1994 : 286-290.

［2］ Harrison SA，Kadakia S，Lang KA，et al. Nonalcoholic steatohepatitis: what we know in the new millennium［J］. Am J Gastroenterol，2002,97（11）:2714-2724.

［3］ Day Cp . Non-alcoholic steatohepatitis （NASH）: where are we now and where are we going［J］. Gut，2002,50（5）:585-588.

［4］ Leevy CB,Elbeshbeshy HA.Immunology of alcoholic liver disease［J］.Clin Liver Dis,2005,9（l）: 55-66.