银杏酮酯对离体心肌缺血再灌注损伤血流动力学的影响

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摘要:目的 在离体大鼠心肌缺血再灌注模型上，观察银杏酮酯（GBE50）对大鼠离体心肌缺血再灌注损伤的血流动力学的影响，并探讨其机制。方法 建立改良的Langendorff离体大鼠心脏灌注模型，平衡灌注30 min，缺血30 min，再恢复常速灌注40 min，造成心肌缺血再灌注损伤。用3组不同浓度的银杏酮酯 （12.5 mg/L、25 mg/L、50 mg/L）进行灌流，观察停灌前、再灌5 min、再灌10 min、再灌20 min、再灌40 min时,心率（HR）、左心室收缩峰压平均值（mLVSP）、左心室等容收缩和舒张期压力平均值（±dp/dt【sub】max【/sub】）的变化；冠脉流量（CF）、冠脉流出液超氧化物歧化酶（SOD）、乳酸脱氢酶（LDH）的变化。结果 用银杏酮酯灌流缺血的心脏后，与模型组比较,mLVSP、±dp/dt【sub】max【/sub】分别增加；平均冠脉流量增加，冠脉流出液中LDH含量均明显减少（P

关键词:银杏酮酯；缺血再灌注损伤；心功能；大鼠

中图分类号：R542.2 R289.5 文献标识码：A 文章编号：1672-1349（2011）06-0698-03Hemodynamic Effects of GBE50 on Ischemia-reperfusion Injury of Isolated Heart in Rats

Xie Mixue,Jiang Qi,Sang Yi Miao,et al

The Second Clinical Medical College,Zhejiang University of Traditional Chinese Medicine （Hangzhou 310053）

Abstract:Objective To investigate the effect of Ginkgo biloba extract 50（GBE50）on ischemia-reperfusion （IR） injury in heart of rats.Methods Langendorff rats model were built,then isolated rat hearts were subjected to reperfusion for 30 min,ischemia for 30 min,and reperfusion for 40 min.GBE50 （12.5 mg/L,25.0 mg/L,50.0 mg/L） was given in reperfusion period.The heart rate（HR）,mean left ventricular systolic pressure （mLVSP）,the maximum change rate of left ventricular pressure rise and fall （±dp/dt）,coronary flow （CF）,superoxide dismutase （SOD）,lactate dehydrogenase （LDH） in coronary sinus effusion were observed.ResultsIn isolated rat heart models,the ±dp/dt【sub】max【/sub】 of the heart was pared with control group of ischemia-reperfusion,activities of LDH in effluent samples of GBE50 group were lower than that in ischemia-reperfusion group （P

Key words:Ginkgo biloba extract 50ischemia-reperfusion injurycardiac function

1） 为2009年浙江省大学生科技创新基金项目（新苗人才计划）

银杏酮酯（GBE50）是国内少有的拥有自主知识产权核心技术的重要中药产品，其主要成分为银杏黄酮和银杏内酣。GBE50中的主成分总黄酮被证实为一类广谱的自由基清除剂，其另一主要成分内酯类的药效主要为拮抗血小板激活因子（PAF），其他成分如白果酸及其类似物则为过氧化物酶体增殖蛋白激活性受体γ（PPARγ）的部分激动剂，提示了银杏叶提取物可通过抗氧化、减少炎症反应介质等方面来治疗心肌缺血再灌注损伤。

1 材料与方法

1.1 材料 健康雄性SD大鼠32只，体重180 g～200 g，清洁级，由浙江省学科学院实验室中心提供。银杏酮酯，商品名为银杏速通，由山西千汇药业出品，批准文号：国药准字Z20050220。722E型可见分光光度计，HSS-1（B）型超级恒温水浴箱，RM6240计算机生物信号记录分析仪等。超氧化物歧化酶（SOD）、乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒购自南京建成生物有限公司。其他试剂均为国产分析纯试剂。K-H液成分：NaCl 6.89 g/L,KCl 0.35 g/L,MgSO【sub】4【/sub】 0.144 g/L，KH【sub】2【/sub】PO【sub】4【/sub】 0.163 g/L，NaHCO【sub】3【/sub】 2.1 g/L，葡萄糖1.982 g/L，CaCl【sub】2【/sub】 0.139 g/L。

1.2 实验方法

1.2.1 分组 将动物随机分为4组，每组8只，模型组：空白K-H液灌流，GBE50低、中、高剂量组：K-H液中分别加入 GBE50 12.5 mg/L、25 mg/L、50 mg/L。

1.2.2 离体大鼠心脏灌注模型的建立 大鼠击昏后开胸，迅速取出心脏并浸入4 ℃的K-H液中，主动脉修剪及轻挤心脏排尽心腔余血后立即将心脏悬挂于Langendorff灌流装置上。用恒温循环器预先恒温到37 ℃、95%O【sub】2【/sub】+5%CO【sub】2【/sub】混合气平衡20 min的空白K-H液，剪开肺动脉根部以利冠脉回流通畅。离体心脏进行主动脉逆向灌流（恒温37 ℃、恒压8.33 kPa）。左心房剪一小口，将自制的小乳胶水囊通过房室瓣插入左心室，水囊通过压力换能器连接至RM6240生物信号采集处理系统，实时采集和记录室内压（LVP）的变化。各组均平衡灌注30 min空白K-H液，停灌造成全心缺氧30 min，再恢复空白K-H液（或加药K-H液）灌流40 min。

1.2.3 观察指标

1.2.3.1 血流动力学指标 于停灌前，再灌5 min、10 min、20 min、40 min各时间段分别选取一段LVP曲线（持续时间3 s），测量心率（HR）、左心室收缩峰压平均值（mLVSP）、左心室等容收缩和舒张期压力平均值（±dp/dt【sub】max【/sub】）。

1.2.3.2 冠脉流量 于停灌前和再灌5 min、10 min、20 min、40 min分别用试管接取冠脉流出液1 min，记录冠脉流量。

1.2.3.3 冠脉流量的SOD、LDH含量 于再灌10 min用试管接取冠脉流出液2 mL，测定再灌10 min时冠脉流出液中SOD、LDH的含量。

1.3 统计学处理 数据用均数±标准差（x±s）表示。采用Excel数据分析，两组间用方差分析。样本方差齐者，用等方差假设检验；方差不齐者，用异方差假设检验。

2 结 果

2.1 GBE50对心脏再灌注时mLVSP的影响（见表1）表1 GBE50对心脏再灌注时mLVSP 的影响（x±s）

2.2 GBE50对心脏再灌注时心率的影响（见表2） 与模型组相比，低剂量10 min、40 min能使心率显著加快（P

2.3 GBE50对心脏再灌注时+dp/dt【sub】max【/sub】的影响（见表3）

表3 GBE50对心脏再灌注时+dp/dt【sub】max【/sub】 的影响（x±s）

2.4 GBE50对心脏再灌注时-dp/dt【sub】max【/sub】的影响（见表4） 与模型组相比，三种浓度GBE50组在第5 min、20 min均能使-dp/dt【sub】max【/sub】绝对值升高，其中中剂量第5 min、高剂量第5 min显著升高（P

2.5 GBE50对心脏再灌注时冠脉流量的影响（见表5） 与模型组相比，中剂量组在第10 min、20 min、40 min能使冠脉流量增多，其中以第10 min显著（P

2.6 GBE50对心脏再灌注10 min时冠脉流量的SOD、LDH含量的影响 与模型组相比，三种不同浓度的GBE50组均能使SOD显著升高（P

表6 GBE50对心脏再灌注5 min时冠脉流量的

SOD、LDH含量的影响（x±s）

3 讨 论

心肌缺血再灌注（ischemia reperfusion,IR）损伤是指缺血心肌在恢复血液再灌注后，功能代谢障碍及结构破坏反而加重的现象。心肌缺血再灌注导致的心肌可逆性或不可逆性损伤均造成心肌舒缩功能降低,表现为持久的心输出量减少,心室内压最大变化速率降低,再灌性心律失常、心肌内酶的外漏和冠脉流量减少等【sup】［1］【/sup】。关于心肌缺血再灌注损伤的发生机制还没有完全清楚，比较公认的有:钙超载，氧自由基和活化的中性粒细胞的作用【sup】［2］【/sup】。氧自由基在缺血再灌注介导组织损伤过程中起着十分重要的作用，不仅能够直接诱导细胞的氧化损伤而且通过激活一系列的途径导致组织损伤。Pietri等【sup】［3］【/sup】的临床研究亦提示，心肌缺血再灌注过程中自由基的产生可延缓心肌功能及代谢的恢复。郭潇等【sup】［4］【/sup】观察银杏达莫对再灌注损伤心肌丙二醛（MDA）和血清一氧化氮（NO）含量的影响。再灌注时，大量自由基爆发性产生使心肌不饱和脂肪酸和磷脂过氧化反应加剧，MDA大量产生，导致血管内皮细胞功能障碍。

银杏叶系活血化瘀中药，从银杏叶中提取的有效药用成分的化合物主要为总黄酮类及银杏内酯等，简称为银杏叶提取物。Liebgott等【sup】［5］【/sup】报道，银杏叶提取物的两种主要成分黄酮苷类和萜烯内酯能协同清除氧自由基，防止氧自由基产生过氧化损伤，因而对心肌缺血再灌注损伤有保护作用。高治平【sup】［6］【/sup】提出银杏叶提取物能有效降低血中膜脂质生成的过氧化产物MDA的含量（P

综上所述,GBE50可通过扩张冠脉、增强心肌收缩力对离体心脏缺血再灌注损伤起保护作用,其作用可能与GBE50能够提高SOD酶活性，清除再灌注损伤中产生的氧自由基，减轻心肌细胞过氧化损伤有关。

参考文献：

［1］ 梁日欣,肖永庆,高伟,等.川芎内酯A 预处理对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的保护作用［J］.中药药理与临床,2004,20（6）:1-3.

［2］ Menger MD,Vollmar B.Role of microcirculationintransplantation［J］.Microcirculation,2000,7（5）:291-306.

［3］ Pietri S，Seguin JR.Ginkgo biloba extract（EGb 761）pretreatment limits free radic-induced oxidative stress in patients undergoing coronary bypas surgery［J］.Cardiovasc Drugs Ther,1997,11（2）：l21.

［4］ 郭潇，王莉，陆艳，等.银杏达莫对兔心肌缺血再灌注诱导内皮细胞损伤的影响及机制［J］.时珍国医国药,2008,19（5）:F003-F004.

［5］ Liebgott T，Miollan M,Berchadsky Y，et plementary cardio-protective effects of flavonoid metabolites and terpenoid constituents of Ginkgo biloba extract（EGb 761）during ischemia and reperfusion［J］.Basic Res Cardiol，2000，95（5）：368-377.

［6］ 高治平.银杏叶提取物抗大鼠心肌缺血再灌注损伤的实验研究［J］.中西医结合心脑血管病杂志,2006,4（12）:1062-1064.

作者简介：谢咪雪（1988―），女，现为浙江中医药大学第二临床医学院临床医学专业学生（邮编：310053）；蒋琦、桑伊妙、陈盛，为浙江中医药大学第二临床医学院临床医学专业学生；杨午鸣，工作于浙江中医药大学基础医学院。

（收稿日期：2011-02-03）