黄精对长期超负荷游泳致阴虚内热模型大鼠的作用研究

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[收稿日期] 2013-11-21

[基金项目] 国家重点基础研究发展计划（973）项目（2007CB512603）

[通信作者] *陈素红，研究员，博士生导师，主要从事中药药理与新产品开发，E-mail：

[作者简介] 吴柳花，硕士研究生，Tel：（0571）86613602，E-mail：

[摘要] 目的：观察黄精对长期超负荷游泳模型大鼠的滋阴作用。方法：除正常组外，造模大鼠采用长期超负荷游泳建立阴虚内热模型，大鼠游泳8周，每周5 d，每天1次，日游泳时间由10 min逐日增加至第7周末180 min，水深60 cm，水温30 ℃。模型成功后，大鼠灌胃给予黄精水提物不同剂量（2.5，10 g・kg-1）连续8周。末次给药后眼眶取血，测大鼠血清免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白M（IgM）及白细胞介素2（IL-2）、白细胞介素（IL-6）含量，血浆环磷酸腺苷（cAMP）、环磷酸鸟苷（cGMP）含量。给药期间同时观察大鼠一般行为学指标（体重、面温、痛阈值、抓力）。结果：与模型对照组比较，黄精水提物2.5，10 g・kg-1给药8周，能明显增加阴虚模型大鼠体重和抓力，降低面温及痛阈敏感性，升高血清IgA，IgM，IL-6含量，还能升高血清IgG的含量，但无统计学差异；黄精水提物10 g・kg-1还能升高血清IL-2含量，降低血浆cAMP含量及cAMP/cGMP。结论：黄精对长期超负荷游泳致阴虚模型大鼠行为学指标（体重、抓力、痛阈、面温）、免疫功能（血清免疫球蛋白IgA，IgG，IgM）、环核苷酸系统（血浆cAMP，cAMP/cGMP）均有改善作用，从而改善五心烦热、形体消瘦、腰膝酸软、免疫功能低下、环核苷酸系统紊乱等阴虚证候。

[关键词] 黄精；超负荷游泳；大鼠；阴虚；模型

黄精始载于《名医别录》，是常用滋补中药，在我国已有2 000多年的药用历史，2010年版《中国药典》记载，黄精为百合科植物滇黄精Polygonatum kingianum Coll. Et Hemsl.、黄精P. sibiricum Red.或多花黄精P. cyrtonema Hua的干燥根茎。黄精味甘、性平，归脾、肺、肾经，具有补气养阴、健脾、润肺、益肾等功效。用于脾胃气虚、体倦乏力、胃阴不足、口干食少、肺虚燥咳、劳嗽咳血、精血不足、腰膝酸软、须发早白、内热消渴。化学成分研究表明，黄精含有皂苷、菸酸、糖类、醌类、氨基酸及微量元素等。药理研究发现，黄精具有增加免疫功能、抗衰老、抗肿瘤、提高和改善记忆、降血糖、降血脂等作用[1]。黄精多糖能改善温热药所致的阴虚模型小鼠体重和痛阈、免疫功能及环核苷酸系统，有明显的滋阴作用[2]。本实验通过长期超负荷游泳训练，在“形劳伤阴”的理论基础上建立在病因上接近临床、无人为直接干预机体生理过程的阴虚内热证模型，进一步研究黄精对大鼠的滋阴作用。

1 材料

1.1 动物

SD大鼠50只，体重180～210 g，雌雄各半。浙江省实验动物中心提供，许可证号SCXK （浙） 20080033，动物质量合格证号0000945。

1.2 药物及配制

黄精水提物：取黄精（批号130501），加水浸泡、提取3次，过滤，合并3次滤液减压浓缩，得含生药量为1 g・mL-1的药液。黄精水提物的主要成分为黄精多糖和黄精皂苷。六味地黄丸：将六味地黄丸（北京同仁堂科技发展股份有限公司，批号Z19993068）用前配制成质量浓度为0.25 g・mL-1的溶液，备用。

1.3 试剂

免疫球蛋白IgA，IgG，IgM试剂盒，IL-2，IL-6试剂盒，血浆cAMP，cGMP试剂盒，均购自南京建成生物工程研究所，生产批号201309；肝素钠（上海伯奥生物技术有限公司，批号130402）用前配成0.01 g・mL-1。

1.4 仪器

8877红外线非接触式额温量测器（北京东方海汇电子技术有限责任公司）；YSL-13A大小鼠抓力测定仪（山东省医学科学院设备供应维修站）；YLS-12A鼠尾光照测痛仪（山东省医学科学院设备站）；LP123电子天平（常熟市衡器厂）；Microcl17微量离心机（美国Thermo）；DDL-5低速冷冻多管离心机（上海安亭科学仪器厂）；Powerwave340酶标仪（美国Bio-TEK公司）；AR2130分析天平（瑞士Mettler Toledo公司）；中药煎药机（北京东华原医疗设备有限公司）；旋转蒸发器（上海豫康科教仪器设备有限公司）。

2 方法

2.1 造模与给药

采用先造模后给药。先造模8周，第9周起给药，连续给药8周。大鼠适应性喂养1周后，除正常对照组（10只）外，造模大鼠游泳8周，每周5 d，每天1次，日游泳时间由10 min逐日增加至第7周末180 min，水深60 cm，水温30 ℃。制备无人为直接干预机体生理过程的阴虚内热证模型。

游泳8周后，观察到模型大鼠的体重和抓力明显下降、面温和痛阈敏感性明显升高，出现了阴虚的症状，说明造模成功。造模成功率为88.89%，死亡率为7.78%。之后，大鼠随机分5组：正常对照组（NC）、模型对照组（MC）、阳性对照组（六味地黄丸，PC，2.5 g・kg-1）、黄精水提物低、高剂量组（HJ，2.5，10 g・kg-1），每组10只，雌雄各半。除对照组外，其余4组持续游泳造模，每周5 d，每天1次，每次180 min，受试药组分别给予黄精水提物2.5，10 g・kg-1，模型组及对照组给等容量蒸馏水，阳性对照组给予六味地黄丸2.5 g・kg-1，灌胃给药容量为10 mL・kg-1，每天1次，连续8周。

2.2 测定指标

体重：每3 d称量1次，观察大鼠体重趋势。面温：每2周测定1次，将红外测温计测试孔紧贴大鼠面部测量，测定3次取平均值。抓力：每2周测定1次，抓持大鼠尾根处，置于抓力测定仪，测定3次取平均值。痛阈：每2周测定1次，大鼠辐射热甩尾法测痛阈，测定3次取平均值。第8周眼眶取血，37 ℃温浴30 min，3 500 r・min-1离心10 min，吸取上清液制备血清，采用酶联免疫双抗夹心法测免疫系统指标（血清IgA，IgG，IgM，IL-2，IL-6水平）；用肝素钠抗凝，37 ℃温浴30 min，3 500 r・min-1离心10 min，吸取上清液制备血浆，采用酶联免疫双抗夹心法测环核苷酸系统指标（血浆cAMP，cGMP水平），按试剂盒的方法和步骤测定。

2.3 统计分析

数据用SPSS 17.0软件统计并分析，计量资料数据结果均采用±s表示，组间差异做两样本均数比较的t检验，以P

3 结果

3.1 对长期超负荷游泳致阴虚模型大鼠体重的影响

3.1.1 对雌鼠体重的影响 与对照组比较，模型组雌鼠体重明显保持较低状态（P

与对照组比较1）P

图1 对雌鼠体重的影响

Fig.1 Effect on weight of female Yin deficiency rats induced by long-term overload swimming

3.1.2 对雄鼠体重的影响 与对照组比较，模型组雄鼠体重明显保持较低状态（P

3.2 对长期超负荷游泳致阴虚模型大鼠抓力的影响

3.2.1 对雌鼠抓力的影响 与对照组比较，模型组雌鼠经超负荷游泳抓力显著降低（P

图2 对雄鼠体重的影响

Fig.2 Effect on weight of male Yin deficiency rats induced by long-term overload swimming

型组比较，黄精水提物2.5，10 g・kg-1剂量组给药4周时雌鼠抓力开始显著升高（P

3.2.2 对雄鼠抓力的影响 与对照组比较，模型组雄鼠经超负荷游泳抓力显著降低（P

3.3 对长期超负荷游泳致阴虚模型大鼠面温的影响

与对照组比较，模型组大鼠经超负荷游泳面温显著升高（P

3.4 对长期超负荷游泳致阴虚模型大鼠痛阈的影响

与对照组比较，模型组大鼠经超负荷游泳痛阈显著降低（P

3.5 对长期超负荷游泳致阴虚模型大鼠免疫功能的影响

3.5.1 对大鼠血清IgA，IgG和IgM的影响 与对照组比较，模型组大鼠经超负荷游泳血清IgA，IgG和IgM的含量显著下降（P

3.5.2 对长期超负荷游泳致阴虚模型大鼠血清IL-2，IL-6的影响 与对照组比较，模型组大鼠经超负荷游泳血清IL-2，IL-6的含量显著下降（P

3.6 对长期超负荷游泳致阴虚大鼠血浆环核苷酸系统的影响

与对照组比较，模型组大鼠经超负荷游泳血浆cAMP含量显著升高，cGMP含量显著下降，cAMP/cGMP显著升高（P

4 讨论

作为人体生命活动的物质基础，一切生命活动都是以的损耗为代价的。《本草经解》曰“七伤者，食伤、忧伤、饮伤、房室伤、饥伤、劳伤、经络营卫气伤之七伤也，七伤皆伤真阴”。《素问・举痛论》曰“劳则耗气之说，劳则气耗，劳则喘息汗出，外内皆越，故气耗矣”。可见短暂的剧烈运动可导致一时性的气耗，长期过度劳作造成的则是真阴受损精绝[3]。本实验通过长期超负荷游泳训练，在“形劳伤阴”的理论基础上建立在病因上接近临床、无人为直接干预机体生理过程的阴虚内热证模型。

黄精是常用的滋阴补气药。现代药理研究发现，黄精除具有增加免疫功能、抗衰老、抗肿瘤、提高和改善记忆、降血糖、降血脂等作用外，还有抗菌作用，尤其是对结核杆菌和真菌有显著的效果，同时又有降低血压的作用；近期研究表明黄精对增加冠状动脉血流量，减轻动脉粥样硬化程度，提高肝脏中超氧化物歧化酶（SOD）活性有明显的作用。本实验进一步研究黄精的滋阴作用。

阴虚精血或津液亏损的病理现象，多见于劳损久病或热病之后而致阴液内耗的患者。主症为五心烦热、颧红或午后潮热、形体消瘦、性情急躁、心烦易怒、失眠多梦、头晕眼花、腰膝酸软、小便次多量少、心跳偏快、夜间盗汗、手足心发热、耳鸣等[4]。

本实验室之前观察了灌服甲状腺片加烟熏制备大鼠肺阴虚模型、性激素致大鼠肾阳虚模型、烟熏（外邪犯肺）+冰水游泳（形寒劳倦）+服用冰水（内饮生冷）+冰他巴唑复合因素致大鼠肺阳虚模型等动物虚证模型，观察了虚证模型大鼠的一般行为学、体重、抓力、肛温、背温、血液学血液流变学指标、各脏器系数等[5-7]。为本实验在选择阴虚大鼠的造模方法和需观察的药效指标上提供了理论依据和参考。

形体消瘦、腰膝酸软是阴虚证的主症之一，形劳伤阴所致。本实验观察到模型大鼠的体重降低、抓力减弱。黄精水提物2.5，10 g・kg-12个剂量组均能增加大鼠体重和抓力。这可能与黄精性平、归脾肾经，能改善胃阴不足、口干食少、体倦乏力等症状有关。

五心烦热、性情急躁、颧红是阴虚证的主症之二，表现为手足心热、午后潮热、情绪易波动、敏感。本实验观察到模型大鼠面温升高、痛阈降低。黄精水提物2个剂量组均能增加大鼠的面温和痛阈值，这可能与黄精性平，能治内热消渴，改善五心烦热、性情急躁等症状有关。

现代药理及临床研究表明，阴虚会导致机体免疫功能低下，表现为身体虚弱，精神萎靡，疲乏无力，食欲降低，睡眠障碍等症状[8]。IL-2是由Th细胞产生的一种淋巴因子，是体内重要的免疫调节物质；IL-6具有调节免疫应答、急性期反应及造血功能，并在机体的抗感染免疫反应中起重要作用。检测血清IL-2，IL-6含量能较大程度上了解体内淋巴细胞的功能水平。本实验通过观察血清IgA，IgG，IgM及IL-2，IL-6的含量，反应免疫功能。结果，黄精水提物能不同程度地升高大鼠血清IgA，IgM及IL-2，IL-6的含量，还能升高血清IgG的含量，但没有统计学差异，表明黄精能提高阴虚模型大鼠的免疫功能。

研究表明，交感神经兴奋常见患者表现出阴虚的症状，如手足多汗、脸红、性情急躁、食欲降低等阴虚内热症状。阴虚会出现交感神经兴奋，血浆cAMP含量升高，cGMP含量下降或不降，cAMP/cGMP升高[9]。本实验通过观察血浆cAMP，cGMP含量，反应血浆环核苷酸系统的功能。结果，黄精水提物能明显降低阴虚模型大鼠血浆cAMP含量，降低cAMP/cGMP，表明黄精能改善阴虚模型大鼠的环核苷酸系统。

本实验研究结果表明，黄精不仅能增加长期超负荷游泳致阴虚模型大鼠的体重和抓力，恢复阴虚模型大鼠的面温，降低阴虚模型大鼠对痛阈的敏感性，改善血清免疫球蛋白IgA，IgM水平，调节cAMP水平及cAMP/cGMP，从而改善五心烦热、形体消瘦、腰膝酸软、免疫功能低下、环核苷酸系统紊乱等阴虚证候，起到滋阴作用。这为黄精的滋阴功效提供了药理学数据，为提高黄精的临床应用及深入开发提供参考。

[参考文献]

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