羌活提取物抗哮喘的研究

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【摘要】 目的 研究羌活提取物对小鼠哮喘模型的末梢血液内炎性细胞及肺泡灌洗液（BALF）内IL—4、IL—5、IL—6水平是否有抑制作用，探讨羌活预防和治疗哮喘作用。方法 本实验中利用鸡卵清蛋白（OvalbuminOVA）诱导BALB/C小鼠建立小鼠哮喘模型，将羌活提取物分低、中、高剂量组分别在小鼠激发前1小时给予2㎎/ml、10㎎/ml、50㎎/ml羌活提取物雾化吸入20ml时间为25min，处死小鼠后取末梢血通过Diff—quik染色检测嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、淋巴细胞和单核细胞的数量，利用酶联免疫吸附法检测BALF中IL—4、IL—5、IL—6水平。结果 大，中剂量组与模型组和小剂量组相比，嗜酸性粒细胞显著减少（p

【关键词】 羌活；哮喘；小鼠；鸡卵清蛋白

doi：10.3969/j.issn.1004—7484（x）.2012.08.035 文章编号：1004—7484（2012）—08—2431—02

支气管哮喘是一种慢性呼吸道炎症，表现为反复发作性的喘息、呼吸困难、胸闷和咳嗽等症状，并伴有大量嗜酸性粒细胞、肥大细胞和T淋巴细胞侵润。这些炎症细胞释放大量的炎症介质引起支气管收缩，粘液分泌和气道重构。近年来多数学者认为，嗜酸性粒细胞和T淋巴细胞在哮喘的发作及病程发展过程中起着重要的角色，并是分泌细胞因子促进细胞生长、分化、增殖和凋亡。此外Th1/Th2平衡机制失调被认为是引起哮喘发病的重要免疫学机制[1]，主要表现为Th2细胞反应增强，分泌的细胞因子主要有IL—4、IL—5、IL—9、等。这些细胞因子影响着T细胞的分化。提高B细胞表面的抗原呈递蛋白和MHCⅡ型分子的表达，结果提高抗原呈递到T细胞的分化能力，从而促进Th2细胞分化[2]。在Th2细胞所分泌的细胞因子中IL—5在促进嗜酸性粒细胞募集、增殖、和分化的起着重要的调控作用。嗜酸性粒细胞是哮喘气道炎症的主要效应细胞[3]，多数研究证实哮喘炎症的严重性与嗜酸性粒细胞在气道募集的程度有关，嗜酸性粒细胞的募集和凋亡时间影响着肺内炎症情况。此外嗜酸性粒细胞本身也能产生细胞因子，包括TNF—α、TGF—α、IL—1、IL—5、IL—6、IL—8、GM—CSF、和β。肺泡灌洗液中IL—6水平与嗜酸性粒细胞的数量呈正相关，认为IL—6可能在哮喘慢性气道炎症的持续中起着重要的作用，嗜酸性粒细胞的募集、浸润、迁移入呼吸道并对其炎症反应的持续形成了正向调控作用，通过对哮喘气道炎症相关的炎症细胞激活因子、抑制因子以及其分泌的化学媒介物质的作用、哮喘相关基因的多态情研究等揭示哮喘的发病机制，开发预防哮喘的药物。

1 材料与方法

1.1 材料 BALB/C小鼠50只，5—8周龄，均为雄性，体重为18—22g（延边大学动物实验中心）。羌活提取物（延边大学天然药物研究中心提供）根据实验要求将羌活提取物用二次蒸馏水稀释到实验用浓度2㎎/ml、10㎎/ml、50㎎/ml。

1.2 方法

1.2.1 动物分组及给药 小鼠适应性喂养一周后，无不良反应随机分为5组，每组10只，正常对照组；模型组；羌活提取物低；中；高剂量组。

模型组BALB/C小鼠在第1天和第7天2次腹腔注射50μgOVA和1㎎氢氧化铝的生理盐水混合液200ul，使小鼠处于致敏状态。第14、21、22和23天进行雾化吸入1%OVA溶液每10只小鼠20ml，持续进行雾化吸入25min，激发哮喘，在第24天处死小鼠后进行取材。羌活提取物低；中；高剂量组在激发前1小时分别给予浓度为2㎎/ml、10㎎/ml、50㎎/ml羌活提取物雾化吸入（20ml）25min，在第24天乙醚麻醉处死小鼠后进行取材。

1.2.2 取材 小鼠乙醚麻醉处死后，去眼球取血，放在含有乙二胺四乙酸（EDTA）试管中保存，行Diff—quik染色，每只小鼠随机抽取载玻片，取10个视野记录每平方毫米内的细胞数（N/㎜2），用均数±标准差表示。气管插管，注入1ml的生理盐水溶液，按摩小鼠胸部然后回抽，取得BALF。1500rpm4℃下离心10min，吸取上清液行酶联免疫吸附法检测IL—4、IL—5、IL—6。

1.2.3 统计学处理 实验数据应用SPSS13.0统计软件包统计分析，数据以均数±标准差（χ±s）表示，P

2 结 果

2.1 羌活对末梢血液中炎症细胞的影响 模型组组和正常对照组相比，嗜酸性粒细胞数量显著增多（p

*P

2.2 BALF中IL—4，IL—5，IL—6 模型组组和正常对照组相比，IL—4、IL—5、IL—6的量显著增高（p

3 讨 论

嗜酸性粒细胞在哮喘中起着重要的角色，对嗜酸性粒细胞的监测从某种意义上说也就是对气道炎症的监测。嗜酸性粒细胞是产生细胞因子的主要细胞，这些细胞因子促进细胞生长、分化、增殖。Th1/Th2平衡机制失调被认为是引起哮喘发病的重要免疫学机制，Th2细胞分泌的细胞因子IL—4和IL—5是目前所知的两个得要的细胞因子主要表现在，IL—4通过与细胞表面的受体结合调节B细胞生长、分化、活化和发挥功能过程中起到非常重要的作用[4]，从而促进Th2细胞分化[5]。血管中的IL—4能够启动血管内皮表达VCAM—1，能募集嗜酸性粒细胞等炎症细胞从血管向炎症部位游走[6]。IL—5是与嗜酸性粒细胞关系最密切细胞因子，对嗜酸性粒细胞的生长、成熟、分化等起着重要的调节作用。IL—5表达的转基因鼠的嗜酸性粒细胞存活时间明显延长[7]。嗜酸性粒细胞分泌的细胞因子IL—6，被认为与气道重构有关。在哮喘患者和哮喘动物模型的支气管肺泡灌洗液和肺组织中都可测得IL—6的高表达，本实验模型组B组BALF内IL—6的数量显著增高，与A组相比（p

参考文献

[1] GAO BA，XIONG WN，XU YJ，et al.Effect of IL—5 antisense oligonu—cleotides on expression of CD4+T eukomonocyte and protein in rat ofasthma [J].China Journal of Microbiology and Immunology，2005，25（5）：403—404.Chinese.

[2] Chung KF，Barnes PJ.Cytokines in asthma[J].Thorax，1999，54（9）：825—857.

[3] WELTMAN K.Cytokines：Regulators of eosinophilic inflammation[J].Allergy Asthma Proc，2000，21（4）：203.

[4] 邵莉，朱丽君，郭胤仕，等.支气管哮喘患者血清嗜酸粒细胞阳离子蛋白和IL—5测定的意义诊断学：理论与实践，2006，5（4）：354—355.

[5] Berro AI，Perry GA，Agrawal DK.Increased expression and activation of CD30 induce apoptosis in human blood eosinophils.J Immunol，2004，173（3）：2174—2183.

[6] 韦媛嫒，徐峰，陈晓伟，羌活抗炎实验研究.广西工学院学报，2006，17（4）：23—26.

[7] Seder RA.Acquisition of lymphokine—producing phenotype by CD4+ T cells[J].J Allergy Clin Immunol，1994，94（6 Pt 2）：1195—1202.