反相高效液相蒸发光散射检测法测定三金软胶囊中羟基积雪草苷含量
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[摘要] 目的：建立测定三金软胶囊中羟基积雪草苷含量的方法。方法：采用反相高效液相色谱法测定羟基积雪草苷含量。色谱条件为Diamonsil C18柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相为甲醇-水(50∶50)，检测器为蒸发光散射检测器。结果：羟基积雪草苷在1.006~10.064 μg的范围内，进样量与峰面积呈良好的线性关系（r=0.999 2），精密度、8 h内稳定性、重复性均符合要求，平均回收率为100.16%（RSD=2.28%）。结论：该含量测定方法灵敏、准确，重复性好，专属性强，适合羟基积雪草苷的含量测定。
[关键词] 三金软胶囊；高效液相色谱法；蒸发光散射检测器；羟基积雪草苷
[中图分类号] R927.2[文献标识码]A [文章编号]1673-7210（2008）10（b）-026－０２
Determination ofmadecassoside in Sanjin Soft Capsulae by RP-HPLC-ELSD
GAO Yong-yan，LI Yong-jie
(Guangdong Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine,Guangzhou510120,China)
[Abstract] Objective：To determine the content of madecassoside in Sanjin Soft Capsulae. Methods：HPLC method was used to determine the content of madecassoside. The column was Diamonsil C18(150 mm×4.6 mm,5 μm),the mobile phase was methanol-water(50∶50),and the evaporative light-scattering detector(ESLD) was used as detector. Results：The linear range was 1.006-10.064 μg (r=0.999 2), precision, stability and reproducibility were good, the average recovery was 100.16% (RSD=2.28%). Conclusion：The method is sensitive, accurate with good reproducibility and strong specificity, and it can be used for the determination of madecassoside.
[Key words] Sanjin Soft Capsulae; HPLC; ELSD; Madecassoside
三金软胶囊是由金樱根、积雪草等中药组成的复方制剂，具有清热解毒、利湿通淋、益肾的功效。可治疗下焦湿热，小便短赤，淋沥涩痛，热淋，肾盂肾炎，膀胱炎，肾虚湿热下诸证者[1，2]。临床应用广泛，具有较好的疗效。本研究参考文献[3]使用反相高效液相色谱法，测定积雪草中羟基积雪草苷的含量。
1仪器与试药
Agilent 1100 series高效液相色谱仪，SEDEX 75蒸发光散射检测器，Agilent HPLC色谱工作站；羟积雪草苷对照品（中国药品生物制品检定所）；三金软胶囊(自制)；甲醇为色谱纯；水为重蒸馏水；其余试剂均为分析纯。
2方法与结果
2.1色谱条件
Diamonsil C18柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相为甲醇-水(50∶50)；检测器为蒸发光散射检测器；漂移管温度：35℃；载气（空气）压力：3.6 bar；柱温30℃；流速1.0 ml/min[2，3]。色谱图如图1所示。
2.2溶液配制
2.2.1对照品溶液的制备取羟基积雪草苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 ml分别含0.2 mg、0.6 mg的溶液，即得。
2.2.2供试品溶液的制备取本品12粒，精密称定内容物1.0 g，精密加入甲醇40 ml，称定重量，超声处理（功率250 W，频率40 kHz）30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液25 ml，回收溶剂至干，残渣加水20 ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次15 ml，合并提取液，用氨试液洗涤2次，每次15 ml，取正丁醇液，减压回收溶剂至干，残渣用甲醇溶解，转移至5 ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，即得。另按处方制备缺积雪草的三金软胶囊，同法制得阴性样品溶液，备用。
2.3标准曲线
精密吸取羟基积雪草苷（0.503 mg/ml）对照品溶液2、4、8、12、16、20 μl进样，测定峰面积，以峰面积对进样量分别取对数后，进行线性回归，回归方程为：A＝1.352M+15.698（r=0.999 2），表明羟基积雪草苷在1.006～10.064 μg的范围内，进样量与峰面积的线性关系良好。
2.4精密度试验
精密吸取羟基积雪草苷对照品溶液10 μl，连续进样6次，记录峰面积，RSD=1.56％，表明仪器精密度良好。
2.5稳定性试验
取供试品溶液，在8 h内每隔2 h精密吸取10 μl，注入液相色谱仪，记录峰面积，其RSD=1.80%，表明供试品溶液在8 h内稳定性良好。
2.6重复性试验
取样品5份，每份1.5 g，精密称定，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，测定并计算其含量，RSD=1.90%，表明分析方法的重复性良好。
2.7回收率试验
精密称取已知羟基积雪草苷含量的样品6份，分别精密加入定量羟基积雪草苷对照品，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，测定含量，计算回收率，结果见表1。
2.8样品测定
分别精密吸取上述两种浓度的对照品溶液各10 μl，供试品溶液10 μl。注入液相色谱仪，测定峰面积，用外标两点法对数方程计算样品中羟基积雪草苷的含量，3批样品含量分别为1.85、1.80、1.83 mg。
3讨论
在研究过程中，根据羟基积雪草苷易溶于水、醇等极性溶剂，不溶于氯仿等低极性溶剂的理化性质，并考虑醇提时易溶出大部分的其他成分，特别是有机酸、酚类及多糖类成分，对所测的羟基积雪草苷干扰严重的情况，实验采用甲醇溶液超声提取，回收甲醇，加水溶解，正丁醇萃取，再用氨水洗涤正丁醇，基本避免了有机酸、酚类及多糖类等成分的干扰。
使用紫外检测器的HPLC图谱中，羟基积雪草苷峰干扰较多，专属性不强；使用蒸发光散射器的HPLC图谱中，羟基积雪草苷峰干扰少，方法简便、准确、可靠，可作为质量控制方法。
[参考文献]
[1]中华人民共和国国家药典委员会.《卫生部药品标准》中药成方制剂第１２册[S].1997.11.
[2]中华人民共和国国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京:化学工业出版社,2005.326.
[3]曾建国,宋云飞,侯团章,等.HPLC法测定积雪草中三萜类化合物的含量[J].基层中药杂志,2000,14(6):7-8.
（收稿日期：2008-05-07）
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