老年HBV感染者外周血T淋巴细胞亚群的变化

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机体感染HBV后，诱发机体的免疫反应间接损伤肝细胞［1］，免疫反应主要由T淋巴细胞完成。本实验检测老年hbv感染者外周血T淋巴细胞亚群在不同组间的变化。资料与方法

健康志愿者20例，年龄50～68岁；HBV携带25例，年龄52～72岁；慢乙肝28例，年龄51～67岁。均符合2000年西安会议所修订的病毒性肝炎诊断标准，排除合并其他肝炎的存在。

主要试剂和仪器：流式细胞仪及试剂，全自动血液分析仪。

方法：清晨空腹静脉血，分别进行白细胞计数和分类及淋巴细胞亚群检测。样品测定管，EDTAK3抗凝，加入10μl TRITESTCD4FITC/CD8PE/CD3PerCP，再加入50μl抗凝血，振荡混匀，室温避光20分钟。加入1ml溶血素，振荡混匀，室温避光10分钟。1500r/分离心5分钟，弃上清液。加入1ml PBS，1500r/分心5分钟离钟，弃上清液，重复1次，加入450μl PBS，流式细胞仪分析。将白细胞计数和淋巴细胞百分比相乘，得出淋巴细胞计数。CD3+，CD4+，CD8+细胞计数为淋巴细胞计数与各自百分比的乘积。

统计学处理：SPSS11.5统计软件分析，T淋巴细胞百分率用(X±S)，组间均数比较用t检验。

结果

慢乙肝组CD4+/CD8+百分率比值比另两组降低(P＜0.05)；慢乙肝组CD8+百分率比另两组升高(P＜0.05)；而HBV携带组CD4+/CD8+百分率比值、CD8+百分率与对照组有差异，但无统计学意义(P＞0.05)。

各组间CD4+百分率，CD3+百分率无显著性差异(P＞0.05)。

讨论

乙肝病毒的活动受到机体免疫系统的控制，innate和adaptive以及病毒变异的过程是非常复杂的。免疫系统漠视病毒的存在，保持免疫耐受状态时是一个免疫平衡；免疫系统强大到控制病毒又是另一个平衡；而双方反复搏斗的过程就会造成肝脏损伤。

细胞免疫在HBV清除中起主导作用，执行者是T淋巴细胞，CD4+T细胞和CD8+T细胞是其主要亚群，CD4+T细胞水平和功能下降将导致细胞免疫低下。CD8+T细胞分为幼稚型和效应/记忆型，CTL是其效应阶段，是细胞免疫的主要效应细胞［2］，特别是在抗病毒及胞内感染的作用尤为明显。迄今的研究认为急性HBV感染时，CD8+T细胞在病毒的清除中起主要作用，这可能是HBV感染后免疫清除期的免疫病理机制。慢性HBV感染时，CTL数量不足及功能缺陷导致机体不能及时清除病毒，感染得以持续，以往一些研究也说明了这一点。

本实验室无法检测HBV特异CD8+CTL，通过检测CD8+T细胞发现，慢乙肝组CD4+/CD8+百分率比值比另两组降低(P＜0.05)；CD8+百分率比另两组升高(P＜0.05)；与文献报道是一致的，提示了老年慢乙肝患者体内存在CD8+T细胞功能障碍，根据特异性CD8+T细胞在HBV清除中的重要作用，不难判断老年慢乙肝患者存在特异性CD8+T细胞功能障碍；HBV携带组CD4+/CD8+百分率比值比对照组略低、CD8+百分率比对照组略高，但无统计学意义(P＞0.05)；各组间CD4+百分率，CD3+百分率无显著性差异(P＞0.05)。李梦东等曾报告［3］，CD4+百分率在各型肝炎均有下降，CD4+/CD8+百分率比明显下降，与本实验结果不一致。这可能与实验的方法、试剂及病例不同有关。本实验CD4+，CD3+百分率在3组间无显著性差异，说明老年HBV感染者的成熟T细胞总量无明显改变，与李玲报导慢乙肝患者外周血T淋巴细胞总数可无变化相一致［4］。

通过本实验可发现老年慢乙肝患者体内存在CD8+T细胞免疫功能障碍，尤其是特异性CD8+T细胞存在功能缺陷，这也可能是HBV感染慢性化的主要免疫病理机理，这为对乙肝患者进行特异性的免疫治疗提供了理论依据。如何使其获得具有正常功能的CD8+T细胞，是以后在乙肝治疗方面的研究方向。

参考文献

1 骆抗先.乙型肝炎基础与临床.北京:人民卫生出版社,2001.

2 龚非力.医学免疫学.北京:科学出版社,2004:151-152.

3 李梦东.实用传染病学.北京:人民卫生出版社,1998.

4 李玲,顾长海.慢性乙型肝炎PBMC凋亡及淋巴细胞亚群的检测.中国免疫学杂志,2001,11.