广西苦玄参不同药用部位的薄层鉴别与含量测定
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摘要：目的：对苦玄参的根、茎、叶、花进行薄层鉴别和含量测定研究,为进一步的应用研究提供科学依据。方法：采用薄层层析法对中苦玄参不同部位进行定性鉴别；采用反相高效液相色谱法（RP-HPLC）对其不同部位进行含量测定。结果:TLC鉴别均表明：茎、叶、花的乙酸乙酯∶甲醇（5∶1）提取物的主斑点一致，提示根、茎、叶、花中所含部分成分有可能相同。含量测定结果显示苦玄参苷ⅠA在0.0242～0.1694μg/μl范围内线性良好。结论：广西龙州县苦玄参药材中苦玄参苷ⅠA在根、茎、叶花中的平均含量分别为0%，0.11%，1.63%，1.12%。
关键词：苦玄参；定性鉴别；含量测定
中图分类号： R927．2；R282．5 文献标识码： A 文章编号： 1008-2409(2007)06-1179-03
Identification and content assay of Picria fel-tarrae lour with high performance liquid chromotography/CHEN Jun,ZHEN Han-shen,WEI Jian-hua∥Liuzhou Medical School, Liuzhou 545006, China
Abstract:Objective:To assay the contents of root,stem,leaf and flower of picria fel-tarrae lour with high performance liquid chromotography(HPLC).Methods:The different parts of picria fel-tarrae lour were identified and the contents were detected by RP-HPLC.Results:The extracts from root,stem,leaf and flower had the same main spots.It suggested that they have the same compositions.In contents assay,there was a good linear relationship at range of 0.0242~0.1694μg/μl of pacria fel-tarrae lour.Conclusion:The average contents of pacria fe-tarrae lour in root,stem,leaf and flower are 0%,0.11%,1.63% and 1.12%, respectively.
Key words:pacria fe-te-tarrae;identification;content assay
广西道地药材苦玄参(Picria fel-tarrae Lour)为玄参科苦玄参属植物，又名苦草，蛇总管、鱼胆草、苦胆草。主要分布于广西、广东、贵州及云南等地，印度至菲律宾也有分布[1]，在广西民间作为药用已有很长历史。据文献记载，苦玄参具有抑菌抗炎之功效。由于苦玄参使用的药用部位为全草，其不同药用部位的比较未见报道，因此，本实验对苦玄参的根、茎、叶、花进行薄层鉴别及含量测定研究，为更好地利用苦玄参植物资源提供参考。
1 仪器与试药
PBQ2I型自动薄层铺板器(重庆)；Agilent HPLC1100高效液相色谱仪。苦玄参采于广西龙州，经广西中医学院药用植物教研室刘寿养副教授鉴定为玄参科苦玄参属植物苦玄参。分取根、茎、叶、花四部分粉碎，过二号筛备用。苦玄参苷ⅠA对照品由广西植物研究所成桂仁教授提供，并经鉴定为单体纯品。薄层层析用硅胶G（200～300目），青岛海洋化工厂；甲醇为优级纯，中国医药集团上海化学试剂公司出品；色谱流动相用乙腈为色谱纯，天津市四友生物医学技术有限公司出品；其余实验试剂均为分析纯；水为超纯水，均经过0.45μm微孔滤膜过滤后使用。
2 薄层鉴别
2.1 供试品溶液制备
分别取苦玄参根、茎、叶、花各约1g，加乙酸乙酯∶甲醇（5∶1）25ml,超声提取30min,滤过,滤液挥干,残渣加甲醇1ml使溶解即得。
2.2 苦玄参苷ⅠA对照品溶液制备
取苦玄参苷ⅠA对照品适量, 加甲醇适量使溶解制成浓度约(2.51mg/ml)溶液。
2.3 薄层层析
照薄层色谱法实验[２]，分别取上述各溶液分别点于CMC-Na（0.7%）-硅胶G板上，以氯仿∶甲醇（4∶1）为展开剂，展距为10cm，取出晾干，以1%香草醛浓硫酸试液显色，105℃加热5min，茎、叶、花溶液色谱与苦玄参苷ΙA对照品溶液色谱相应位置上显一个相同的紫色斑点（见图1）。
图1 苦玄参不同部位TLC图
1.根;2.茎;3.叶;4.花;5.对照品
3 含量测定
3.1 色谱条件
LichrospherC18，色谱柱（4.6mm×250mm，5μm ）；流动相：乙腈-0.5%冰醋酸（36∶64）；检测波长：264nm；流速：流速1ml/min[３]。
3.2 供试品溶液制备
分别取苦玄参药根、茎约1g，花、叶约0.5g，精密称定后置于100ml锥形瓶中，加入25ml 75％甲醇浸泡10min，称定重量，超声30min，称定重量，摇匀，补足减失的重量。取该样品溶液1ml于微型离心管，以10000r/min速度离心10min,取上清液进样HPLC分析。
3.3 苦玄参苷ⅠA对照品溶液制备
精密称取苦玄参苷ⅠA 12.10mg置50ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得浓度为0.242mg/ml的对照品溶液。
3.4 苦玄参苷ⅠA标准曲线制备
精密吸取上述苦玄参苷ⅠA对照品溶液1，2，3，4，5，6，7ml，分别定容于10ml量瓶中，精密吸取10μl，注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积（见图2），以峰面积积分值为纵坐标，苦玄参苷ⅠA浓度为横坐标，绘制标准曲线（见图3），得到方程A=8111.72929×Amt-3.4766006,r=0．99994，线性范围0.0242～0.1694μg/μl
3.5 精密度试验
取同一供试品溶液，连续进样5次，计算得到苦玄参苷ⅠA峰面积的RSD=0.83%
3.6 稳定性试验
取同一份供试品溶液，于配制后0，2，4，6，8，12h依法测定苦玄参苷ⅠA峰面积的RSD＝1.16%（n=6），说明样品在12h内稳定。
3.7 重现性实验
取5份苦玄参叶，每份约0.5g，精密称定，依照3.2样品溶液制备项下提取，分别进样10μl，测定苦玄参的含量，RSD＝2．34%。
3.8 加样回收率实验
取已知苦玄参苷ⅠA含量的样品适量，精密加入一定量苦玄参苷ⅠA标准品，按照“供试品溶液制备”项下条件制备待测溶液，同法测定，计算回收率，结果见表1。
3.9 样品测定
分别取梧州苦玄参根、茎、叶、花样品适量，精密称定，按3.2方法制备成样品溶液，进样，结果见表2。
4 讨论
4.1 植物各器官中的成分及成分的含量是有差别的。苦玄参叶中含有较多的叶绿素，用甲醇提取的提取液有较多的色素杂质，所展的斑点拖尾严重；用石油醚或氯仿提走色素杂质后再用甲醇提取，所得效果不理想；用乙酸乙酯提取，叶的提取液色素减少，斑点清晰，但根、茎的成分较少，用乙酸乙酯很难提取出其成分。因此，选用乙酸乙酯∶甲醇（5∶1）提取。所得的苦玄参各部位提取液点样，用氯仿∶甲醇∶(4∶1)展开，展开效果比较理想，所得斑点较清晰集中，拖尾现象不明显。结果，茎、叶、花溶液色谱与苦玄参苷ΙA对照品溶液色谱相应位置上显一个相同的紫色斑点。提示茎、叶、花中均含有苦玄参苷ΙA。
4.2 苦玄参药用部位为全草但不同部位含量测定显示，苦玄参部位中苦玄参苷ⅠA的含量差异较大，苦玄参叶>花>茎>根，苦玄参叶的含量最高。中草药含量的差异与药用部位、药物产地、采收季节等因素有关。但本实验中样品品种单一，因此，在今后的研究中，可对其他不同产地及季节的苦玄参不同部位的玄参苷ⅠA进行比较，确定其有效部位。
参考文献：
［1］ 广西壮族自治区卫生厅.广西中药材标准［Ｍ］．南宁：广西科学技术出版社，1992：225.
［2］ 蒋明廉.苦玄参中苦玄参甙ΙA的含量测定［Ｊ］.桂林医学院学报,1997，10（6）：69.
［3］ 邹节明，吴敏菊，王力生.苦玄参HPLC指纹图谱研究［Ｊ］.中国药学杂志，2005，40（9）：664-666.
(收稿日期： 2007-02-15)
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