深静脉血栓形成动物模型的研究进展
开篇：润墨网以专业的文秘视角，为您筛选了一篇深静脉血栓形成动物模型的研究进展范文，如需获取更多写作素材，在线客服老师一对一协助。欢迎您的阅读与分享！
摘 要: 综述近年来深静脉血栓形成动物模型的制备方法、原理、特点及用途,旨在为深静脉血栓形成发病机制及治疗研究提供适用的方法学依据。
关键词:深静脉血栓形成;动物模型;综述
中图分类号:R-33 文献标识码:A 文章编号:1673-7717(2010)01-0057-03
Animal Models of Deep Venous Thrombosis
LIU Zheng,ZHANG yue,HOU Yufen
(Afiliated Hospital of Shandong University of Traditional Chinese Medicine,Jinan 250011,Shandong,China)
Abstract:The paper introduced the methods of building model on animal models of deep venous thrombosis in recent years. Building the right animal model of deep venous thrombosis has important meanings for deeply exploring its pathogenic mechanism, pathological characteristic and clinic diagnosis.
Key words:deep venous thrombosis;animal model;summary
深静脉血栓形成(deep venous thrombosis,DVT)已成为影响人类健康的重要疾病,早期易并发致命性的肺栓塞,后期遗留肿胀、郁积性皮炎、顽固性小腿溃疡等严重影响患者的生活质量。因此,建立DVT动物模型是研究体内静脉血栓形成发病机制、病理生理变化和评价各种诊治方法包括药物干预的重要载体。文献报道[1],应用实验性静脉血栓形成动物模型有50余年的历史,约有18种不同的动物被用来制备模型。近年来,我国各种DVT动物模型取得了很大进展,现将其综述如下。
1 静脉结扎(阻断)法
此方法是通过血液瘀滞诱导静脉血栓形成。结扎深静脉,导致静脉血液回流障碍,局部血流淤滞、缺氧,血管内皮细胞损伤,启动凝血过程。此外,血小板与局部形成的凝血因子也因血流受阻停留在局部,致使血栓形成。通常根据不同的实验动物,结扎的血管也各不相同。常用的方法如下。
1.1 下腔静脉结扎法
Reyers等[2]首先在1980年通过结扎大鼠下腔静脉建立大鼠DVT模型。方法如下:麻醉大鼠后,沿腹白线切开进腹,分离下腔静脉,于左肾静脉下方用粗丝线结扎下腔静脉,缝合腹壁,结扎后2～6 h重新打开腹腔,在结扎线下方2cm处夹闭血管,剖开管腔,取出血栓,称量血栓干重。一般在结扎后3h血栓形成率为60%～80%,结扎后6h血栓形成率为100%。以血栓形成百分率、血栓质量、凝血及纤溶系统为研究对象。顾毅等[3]采用此模型,插入Fogarty导管取栓,观察不同时相导管取栓对静脉壁的影响,探讨应用球囊导管取栓术治疗深静脉血栓形成的时机。
还有学者在Reyers造模方法的基础上进行改良,张智辉[4]等结扎大鼠下腔静脉下段及双侧髂总静脉制备后肢深静脉血栓形成模型,血栓形成率均较单纯结扎下腔静脉高;赛力克•马高维亚等[5]在左肾静脉与下腔静脉交汇处用丝线把下腔静脉与导丝一起结扎,血管夹阻断下腔静脉下段,1h后撤掉血管夹,抽出导丝,认为此模型能保障血栓近心端血管通畅,符合人体DVT急性期的病理演变,是适合作为动态研究的动物模型。
还有报道[6]采用单纯下腔静脉结扎法建立静脉血栓家兔模型。综合文献,制备兔下腔静脉血栓模型者远少于大鼠下腔静脉血栓模型,这与大鼠模型的易行性、经济性密切相关。
1.2 髂静脉结扎法
高峰等[7]采用髂静脉结扎法成功制备大鼠模型。方法:麻醉大鼠后,取下腹部正中切口,打开后腹膜,显露左髂动、静脉,6-0单丝尼龙线依次缝扎左髂静脉近端、沿途属支及远端。40min即见肉眼血栓形成。作者认为此模型与犬、猪、猫、兔等体型较大的动物模型相比,有术后管理容易,死亡率低等优势,且在解剖位置上可以模仿临床病例。缺点:大鼠髂静脉较细,不易解剖分离。
1.3 股静脉结扎(阻断)法
常选用犬、兔等形体较大的动物。方法:暂时结扎(或阻断)股静脉近、远端,血栓形成后,松开结扎线或解除阻断。采用此模型,戎建杰等[8]研究和比较导管直接溶栓和系统性溶栓对急性深静脉血栓形成后静脉壁形态学的影响及近期疗效;王辉等[9]根据血栓形成不同时期应用超声消融仪的超声溶栓效果、血管再通情况、静脉壁及瓣膜的病理变化,探讨腔内超声溶栓治疗深静脉血栓的疗效;周为民等[10]则通过观察Amplatz血栓消融术、经导管药物溶栓及外科取栓术对急性股静脉血栓形成后静脉壁形态学的影响,探讨这三种治疗方法的各自优势。
2 机械性损伤法
采用器械损伤血管,使内皮下细胞外基质,促使血小板与胶原接触而被激活和黏附,形成血栓。该方法主要是模拟创伤后或手术后肢体制动等而导致的深静脉血栓形成,能较好的反映创伤后发生深静脉血栓形成的病理变化过程。何飞等[11]采用击打装置,以固定能量击打兔左侧大腿近端外侧,石膏固定左下肢屈髋屈膝位,7天后即成功制备创伤性肢体DVT模型。张春强等[12]将大鼠麻醉后,切开皮肤,显露股静脉,直接钳夹股静脉,制备急性大鼠创伤性深静脉血栓形成模型;采用定量打击大鼠双侧大腿+石膏固定的方法制备亚急性大鼠创伤性深静脉血栓形成,观察炎症相关基因的表达变化,探讨炎症在创伤性深静脉血栓形成中的意义。
3 电流损伤法
利用电刺激,损伤血管内膜,启动凝血机制,从而导致深静脉血栓形成。杨军[13]先给大鼠肌注地塞米松磷酸钠注射液(1mg/kg体重),每日1次,连续7天。第8天麻醉大鼠后,取股内侧纵行切口,游离股静脉主干长约1.5cm,将实验性体内血栓形成测定仪的正、负电极分别置于股静脉的远、近端,接通直流电(1.5mA),持续刺激7min。成功制备大鼠DVT模型,探讨药物抗静脉血栓形成的药理作用。
4 静脉异物法
此方法通常暂时阻断局部血管血流,然后插入异物(铜丝),启动内、外源性凝血过程,促发静脉血栓形成。国内学者[14-15]依照Knight[16]等方法建立犬、兔动物模型。麻醉动物后,沿股静脉走向切开皮肤,钝性分离皮下组织及肌肉,充分暴露股静脉,于其近端和远端分别上血管夹,向近心端插入自制的螺旋铜丝,缝合血管,确定血管再通后,逐层缝合。此模型旨在评估放射性核素标记抗血栓成分(血小板和纤维蛋白)的单克隆抗体对体内新、旧血栓的放免显像研究。
5 光化学法
本法是将光敏物质注射入动物血管内,在特定的波长的光线照射下,发生光化学反应而产生单线态氧等活性氧,继而损伤静脉内皮细胞,激发血小板黏附、聚集而形成血栓。朱听等[17]利用光化学诱导仓鼠股静脉血栓形成,并采用数字显微缩时摄影记录血栓形成的过程,通过数字处理获得血栓的三维图像,可用于血栓形成机理和抗栓药物的研究。
6 血栓诱导剂致血栓形成法
通常局部血管注射凝血酶,启动凝血过程,形成血栓。张鹏等[18]在DSA的导引下,经颈外静脉及股静脉途径分别将直径10mm和6mm的球囊导管置于髂总静脉近心端及股静脉远心端,充盈球囊阻断血流,并经导管注入凝血酶100U,1h后彩超检查证实血栓形成,4h后抽瘪球囊退出导管,成功建立犬静脉血栓模型,认为介入技术建立的犬下肢DVT模型具有操作简单、创伤小、动物易存活,血栓形成快速可靠地优点,有利于深静脉血栓的影像学诊断和临床治疗研究。
7 展望和问题
建立合适的DVT模型是研究DVT发病机制和治疗方法的基本前提。当前,DVT动物模型仍是诱发性动物模型,主要以阻断静脉回流,造成血液淤滞诱发血栓形成为主,注入血栓诱导剂或(和)机械性损伤血管内皮细胞为辅,并建立了一些较为可靠、易行的动物模型,如对药物抗血栓机制的研究,下腔静脉结扎法大鼠血栓模型最为经济、常用;犬、兔等股静脉血栓模型常用于血管介入溶栓、取栓及对血栓放免显像诊断的研究,但费用高、造模术后管理困难大等。国外还有文献报道[19-20]利用基因敲除或转基因老鼠,制备DVT模型,有助于对DVT发病机制进行更深入研究。DVT的发病机制复杂,目前公认是Virchow的三大发病因素,即血流滞缓、血液高凝、静脉壁的损伤相互作用的结果。研究表明[21-22]中医药可以从多环节、多层次干预DVT的发生、发展,具有良好的针对性和科学性,但目前缺少病症结合的DVT动物模型。因此,如何能制造出更加接近临床状态、符合中医证候的DVT模型,将是今后推进深静脉血栓形成防治研究的关键,也是我们需要努力研究的问题。
参考文献
[1] Marcel Levi,Janine Dorffler-Melly,Gerhard J.Johnson,et al.Usefulness and Limitations of Animal Models of Venous Thrombosis[J]. Thromb Haemost,2001,86:1331.
[2] Reyers I, Mussoni L,Donati MB, et al.Failure of aspirin at different doses to modify experimental thrombosis in rats[J].Thromb Res,1980,18(5):669.
[3] 顾毅,时德,赵渝,等.不同时相球囊导管取栓的实验研究[J].中华普通外科杂志,2003,18(6):370-372.
[4] 张智辉,林少芒,姚艳丹,等.大鼠后肢深静脉血栓模型的制备与研究[J].现代临床医学生物工程学杂志,2006,12(2):146-148.
[5] 赛力克•马高维亚,王护国,罗军,等.一种适合动态研究的大鼠深静脉血栓动物模型[J].中国普外基础与临床杂志,2008,15(6):408-411.
[6] Rhodes JM, Cho JS,Gloviczki P, et al. Thrombolysis for experimental deep venous thrombosis maintain valvular competence and vasoreactivity[J].J Vasc Surg,2000,31:1193.
[7] 高峰,胡建国,关薇薇.SD大鼠深静脉血栓模型的建立及其静脉壁形态学研究[J].江西医学院学报,2008,48(2):21-23.
[8] 戎建杰,伍波,何礼荣,等.导管直接溶栓治疗犬股静脉急性深静脉血栓后静脉壁形态学的变化[J].苏州大学学报(医学版),2004,24(2):169-172.
[9] 王辉,王岭,陈江浩,等.腔内超声溶栓治疗犬外周血管血栓形成[J].第四军医大学学报,2003,24(10):870-872.
[10] 周为民,李晓强,余朝文,等.血栓消融、溶栓和取栓对犬股静脉壁形态学影响的研究[J].中国普通外科杂志,2003,18(4):214-216.
[11] 何飞,胡敏,王兵,等.构建创伤性肢体深静脉血栓动物模型及其应用评价[J].中国临床康复,2005,9(22):112-113.
[12] 张春强,黄河,赵学凌,等.两种创伤性深静脉血栓大鼠模型中炎症相关基因的表达研究[J].生物医学工程研究,2008,26(1):66-70.
[13] 杨军,屈立志,杨霄,等.通塞脉片对深静脉血栓形成纤溶功能的实验观察[J].中药新药与临床药理,2003,14(1):32-33.
[14] 季顺东,刘晓健,张荣军,等.99Tcm-抗血栓成分单克隆抗体对动物血栓的放免显像研究[J].苏州医学院报,2000,20(1):4-7.
[15] 安锐,张凯军,黄韬,等.99Tcm-SZ-51用于犬静脉血栓模型放射免疫显像的研究[J].临床心血管病杂志,2000,16(12):554-556.
[16] Knight LC, Maurer Ah, Ammar I A, et al. Tc-99m antifibrin fragment for imaging venous thrombi: Evaluation in a canine model[J]. Radiology,1989,173:163.
[17] 朱听,吴嘉,赵虎成,等.血栓的三维重建及动静脉血栓形成过程的在体研究[J].中国血液流变学杂志,2002,12(4):261-264.
[18] 张鹏,施海滨,刘圣,等.犬下肢深静脉血栓模型的实验研究[J].介入放射学杂志,2006,15(5):299-302.
[19] Myers DD, Hawley AE, Farris DM, et al. P-selectin and leukocyte microparticles are associated with venous thrombogenesis[J].J VascSurg,2003,38:1075.
[20] Mosesson MW, Cooley BC, Hernandez I, et al. Thrombosis risk modification in transgenic mice containing the human fibrinogen thrombin-binding gamma' chain sequence[J]. J Thromb Haemost,2009 Jan;7(1):102-10.
[21] 刘政,侯玉芬,周涛,等.消栓通脉颗粒剂对深静脉血栓形成模型大鼠血浆t-PA PAI的影响[J].中医药学刊,2006,24(10):1846~1848.
[22] 李国信,宋歌今. 双藤通脉颗粒对DVT家兔纤溶功能及血管内皮形态的影响[J].辽宁中医杂志,2005,32(5):484-485.