多指标正交试验优选抗痨清肺颗粒提取工艺
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摘要：目的 优选抗痨清肺颗粒的最佳提取工艺。方法 以岩白菜素提取转移率、总多糖浸出率、浸膏得率为评价指标，采用正交试验设计考察浸泡时间、加水量、提取时间对提取工艺的影响。结果 抗痨清肺颗粒的最佳提取工艺条件为：加水浸泡1.0 h，回流提取2次，加水量分别为10、8倍量，提取时间分别为2.5、2.0 h。结论 优选出的提取工艺简单、稳定，可为抗痨清肺颗粒的工业化生产提供依据。
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2014.05.028
中图分类号：R283.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2014）05-0091-04
肺结核是由结核分枝杆菌引发的肺部感染性疾病，中医称之为“肺痨”。抗痨清肺颗粒来源于长沙市中心医院临床经验方，由白及、矮地茶、百部、玉竹、黄精等药味组成，具有杀虫化瘀、清补肺脏的功效，临床主要用于虚劳夹瘀型多耐药肺结核，症见咳嗽痰多或干咳少痰、气短或气促、神疲、消瘦、胸痛等。为确定该制剂合理的生产工艺，保证其临床疗效，本试验以岩白菜素提取率、总多糖浸出率、浸膏得率为评价指标，通过正交试验对其提取工艺进行优选。
1 仪器与试药
岛津高效液相色谱仪（配有SPD-10Avp检测器，LC-10ATvp泵，N3000色谱工作站），RE-52A型旋转
基金项目：国家科技重大专项-艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治（2013ZX10005004-003）
通讯作者：夏新华，E-mail：
蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂），SHB-3A真空泵（郑州杜甫仪器厂），766-3型远红外电热干燥箱（上海阳光实验仪器有限公司），UV1102型紫外分光光度计（配有UV Solution分析软件），80-1型电动离心机（城西晓阳电子仪器厂），XB-220A型电子分析天平（瑞士PRECISA）。
岩白菜素（批号111532-201203）、无水葡萄糖（批号110833-201205）对照品均购自中国食品药品检定研究院，药材饮片购自湖南三湘中药饮片有限公司。甲醇为色谱纯，水为重蒸水，其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 岩白菜素含量测定
2.1.1 色谱条件 Kromasil C18柱（4.6 mm×250 mm， 5 μm），流动相为甲醇-水（20∶80），流速1.0 mL/min，检测波长275 nm，柱温30 ℃，记录时间22 min。色谱图见图1。
A
B
C
注：A.对照品；B.供试品；C.阴性对照
图1 抗痨清肺颗粒中岩白菜素高效液相色谱图
2.1.2 对照品溶液的制备 取岩白菜素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含48 ?g对照品的溶液，即得。
2.1.3 供试品溶液的制备 精密量取提取液适量，置10 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，过0.45 ?m微孔滤膜，取续滤液，即得。
2.1.4 阴性对照溶液的制备 按处方称取缺矮地茶的药材饮片，加水提取2次，浓缩定容。精密量取适量，置于10 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，过0.45 ?m微孔滤膜，取续滤液，即得。
2.1.5 线性关系考察 精密吸取对照品溶液2、4、6、8、10 ?L分别进样，按“2.1.1”项下色谱条件测定峰面积，以进样量（?g）对峰面积积分值进行线性回归，得回归方程Y=5.1×105X-1372.6（r2=0.9999），表明岩白菜素在0.096～0.48 ?g范围内线性关系良好。
2.1.6 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液5 ?L，于0、1、2、4、8、12、24 h进样，依法测定，岩白菜素峰面积积分值RSD=2.00%，表明供试品溶液在24 h内基本稳定。
2.1.7 精密度试验 精密吸取同一供试品溶液5 ?L，连续进样6次，依法测定，岩白菜素峰面积的积分值RSD=1.74%，表明仪器精密度良好。
2.1.8 重复性试验 取同一提取液，平行制备6份供试品溶液，各精密吸取5 ?L进样，依法测定其含量，岩白菜素含量RSD=1.24%，表明该方法重复性良好。
2.1.9 加样回收率试验 精密量取已知含量的提取液0.8 mL，平行6份，置于10 mL容量瓶中，分别加入0.213 mg/mL岩白菜素对照品溶液1 mL，按“2.1.3”项下方法制备，在上述色谱条件下测定含量，计算加样回收率。结果见表1。