花生愈伤组织细胞悬浮培养初探

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摘要：初步研究了花生细胞悬浮培养过程。比较了不同基本培养基、接种量和激素对悬浮培养过程中细胞生长量的影响。

关键词：花生愈伤组织；悬浮细胞；接种量

中图分类号：S56文献标识码：A文章编号：1671-1297（2008）08-141-01

一、前言

悬浮细胞的培养过程要求比较严格，一般2―3天转代一次，转代时的无菌操作必须小心谨慎，避免因外界原因使培养基染菌。但在花生各个培养过程中，均产生不同程度的褐变现象，导致细胞分裂和生长受到制约，本实验就基本培养基、接种量对悬浮培养过程中细胞生长量的影响作了测定和分析。

二、 材料与方法

（一）材料

选取生长旺盛、结构疏松、状态相似的花生愈伤组织，作为细胞悬浮培养的材料。

（二）方法

1.基本培养基、接种量对细胞悬浮培养的影响

选取3 种液体培养基MS、B5、ER ，均加入1.00 mg/ L 22 ，4-D、0.5 mg/ L KT ，水解乳蛋白50 mg/ L、葡萄糖20 g/ L ，考察不同培养基对花生细胞生长的影响。接种量分别选取0.5、1. 0、3. 0、5. 0 g ，以B5 为基本培养基，附加1. 0 mg/ L 2 ，4-D、0. 5 mg/ L KT、水解乳蛋白50 mg/ L、葡萄糖20 g/ L ，以考察接种量对花生细胞生长情况的影响。两者培养条件均为pH 值5. 8 ，24 ℃，摇床转速为100 rpm/ min 暗培养。

2.植物激素的调控

以B5 为基本培养基，葡萄糖20 g/ L ，pH 值调至5. 8 ，接种量为3 g ，2 ，4-D 分别取0. 5、1. 0、3. 0、5. 0 mg/ L 4 个水平，KT 分别取0. 1、0. 5 mg/ L 2个水平。

3.花生悬浮细胞生长曲线的测定

在150 mL的三角瓶先加入20 mL 液体培养基，每瓶接种愈伤组织1. 0 g ，放置在摇床上，24 ℃黑暗状态下进行振荡培养，转速为110 rpm/ min。3 d 后每瓶加入成分相同的新鲜培养基至60 ml 。每3 d 测1 次鲜、干重，重复3 次。15 d 后收获悬浮培养细胞，继代培养时用无菌的尼龙网细胞筛过滤，弃去较大的细胞团，选择1 mm 大小的细胞团约1 g 加入60 mL 新鲜培养液重新进行振荡培养。

4.实验数据的测定方法：悬浮培养细胞鲜、干重的测定

①测量烘干至恒重的滤纸；②将滤纸用水浸湿，称量滤纸湿重； ③取出细胞液倒入放置滤纸的漏斗里，过滤，并抽滤多余水分，称量鲜细胞和湿滤纸的质量； ④把细胞和滤纸同时放到60 ℃烘箱中至恒重，称量干细胞和干滤纸的质量。每隔2 d测量1 次，每次3 个重复。细胞鲜重= 鲜细胞和湿滤纸的质量―湿滤纸的质量；细胞干重= 干细胞和干滤纸的质量―干滤纸的质量。

三、结果与分析

实验表明在细胞悬浮培养中，2，4-D 一般有利于细胞的生长，这与试验结果相符。但2，4-D 添加过多会导致严重的褐变。故2，4-D 范围选择在0.5～3.0 mg/ L 。细胞分裂素选取KT ，范围为0.05～0.4 mg/ L。

参考文献

[1] 李焕秀，王乔春，李春秀.梨芽和茎尖多酚氧化酶活性和总酚含量的初步研究[J].四川农业大学报，1994，2(2).

[2] 罗晓芳，田砚亭，姚洪军.组织培养过程中PPO 活性和总酚含量的研究[J].北京林业大学学报， 1999，21(1).

[3] 朱广廉，钟海文，张爱琴. 植物生理学实验[M].北京：北京大学出版社，1990.