醒脑静对兔心肌缺血再灌注损伤的抗炎性因子和改善凝血-纤溶功能障碍的作用

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摘要：目的探讨醒脑静预处理对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的抗炎性因子的影响和改善凝血纤溶功能障碍的作用。方法20只新西兰兔随机分成安慰剂组与醒脑静组，各10只。结扎冠状动脉造成MIRI模型，分别在冠状动脉结扎前、结扎后1 h、再灌注后1 h，取心房血分别检测肿瘤坏死因子－α(TNF－α)、组织型纤溶酶原激活物(t－PA)、纤溶酶原激活物抑制物－1(PAI－1)、肌酸激酶(CK)水平。同时观察各组梗死范围。结果 冠状动脉结扎后醒脑静组TNF－α、PAl－1、CK水平较安慰剂组显著降低(P＜0.01)．心肌梗死面积显著小于安慰剂组(P＜0.01)。结论醒脑静预处理对MIRI有良好的抗心肌缺血再灌注损伤作用。

关键词：醒脑静；心肌缺血再灌注损伤；肿瘤坏死因子－α；组织型纤溶酶原激活物；纤溶酶原激活物抑制物－1

中图分类号：R542.2 R285.5 文献标识码：A 文章编号：1672―1349(2007)04―0316―03

随着静脉溶栓、经皮冠状动脉腔内成形术(PTCA)等技术治疗急性心肌梗死的广泛开展，心肌缺血再灌注损伤(myocardial ischemia reperfusion injury，MIRI．)日益成为人们关注的热点。MIRI是心脏缺血性疾病和心脏手术体外循环致病的病理生理基础。心肌缺血预处理(ischemic preconditioning，IP)是指亚致死性缺血应激对随后较长时间心肌缺血再灌注损伤产生保护性耐受的现象。MIRI的药物性预处理及其作用机制的研究是一个热点，而中药对心脏保护作用的研究也愈来愈受到重视。本实验通过采用兔急性心肌缺血再灌注模型，观察醒脑静预处理对MIRI有抗炎性因子和改善纤溶，缩小梗死面积及良好的心肌保护作用。

1　材料与方法

1.l　1材料肿瘤坏死因子－α(TNF－α)、肌酸激酶(CK)试剂盒由美国杜邦公司提供；内皮素(ET)试剂盒由北京福瑞生物有限公司提供；一氧化氮(NO)试剂盒由南京建成生物工程公司提供；醒脑静注射液，每支20 mL，由无锡健宏药业有限公司提供。

1.2　动物分组新西兰兔20只，体重为(2.0～2.5)kg，雌雄不拘，由广东省医学实验动物中心提供，合格证号：SCXK(粤)2003―0002。将动物随机分成安慰剂组与醒脑静组，每组10只。

1.3 给药方法实验前1 h给安慰剂组动物灌服生理盐水每只10 mL，醒脑静组每只静脉输注1 mL/kg。

1.4　动物模型[1，2]将兔用2％戊巴比妥钠25 mg/kg作全身麻醉，沿胸骨正中切口打开胸腔，取右房血。剪开心包膜，在冠状动脉前降支根部穿0号丝线，结扎之。关闭胸腔l h后，再开胸腔取右房血，放松结扎线，让心脏再灌注1 h，再取右房血。然后处死动物，取出心脏。

1.5　生化指标的测定所采血液离心后取血清，－20℃以下保存，测定结扎前(T1)、结扎后1 h(T2)、再灌注后1 h(T3)心房血TNF－α、纤溶酶原激活物抑制物－1(PAI－1)、组织型纤溶酶原激活物(t－PA)、CK水平。TNF－α水平测定采用放射免疫法，PAl－1、t－PA活性测定采用发色底物法，CK水平测定采用比色法。

1.6 心肌梗死范围测定 将心脏用生理盐水冲洗，切除心房，留下左心室，称重测定左心室质量(LV)。从心尖到心基部平行将兔心室切成(0.3～O.5)em厚的组织片，放在1％的TTC溶液中，在37℃中染色，(5～7)min后立即用水冲洗，梗死区不着色，非梗死区被染成红色。剪去非梗死区心肌，称重测定心肌梗死区质量(infarction area weight，I)及并计算I/LV(％)。

1.7　坏死心肌及周围心肌组织病理把心肌组织用1％甲醛固定，石蜡包埋，苏木精一伊红染色，光镜400倍下选择5个视野，观察心肌形态结构。

1.8　统计学处理数据以均数±标准差

表示，计量资料组间比较采用t检验，以P＜O.05为有统计学意义。

2　结　果

2.1　醒脑静对TNF－α、PAl－1、t－PA、CK的影响两组兔结扎前血浆TNF－α、PAI－1、t－PA、CK水平均无统计学意义。冠状动脉结扎后两组TNF－α、PAI－l、CK水平均升高，其中以安慰剂组最明显，与醒脑静组比较有统计学意义(P＜0.01)。而安慰剂组t-PA下降，与醒脑静组比较有统计学意义(P＜O.01)。详见表1。

2.3 醒脑静对兔心肌缺血再灌注损伤心肌形态的影响 安慰剂组有心肌间质出血、细胞变性、组织灶性坏死和炎性细胞浸润，有较大范围细胞凝聚、崩解。醒脑静组则仅有少量炎性细胞浸润和心肌闸质出血。3讨论

MIRI是一个极其复杂的多因素、多途径的病理生理过程。近几年的基础研究证实TNF－α参与了心肌缺血再灌注损伤的发生[5]，TNF－α是一种多肽激素，具有广泛的生物学效应，主要来源于停留在心肌内的单核一巨噬细胞及心肌细胞。TNF－α对凝血和纤溶系统的作用途径或机制有几方面：①TNF－α通过抑制内皮细胞合成凝血酶调节蛋白，破坏凝血抗凝平衡，抑制内皮细胞抗凝血机制。②TNF－α能刺激组织因子的表达与产生。③TNF－α损伤血管内皮细胞。④TNF－α可刺激内皮细胞分泌白细胞介素－1(IL－1)。⑤TNF－α作用于内皮细胞，可使其诱生血小板活化因子(PAF)。⑥TNF－α抑制纤溶反应。TNF－α可以使PAl－1活，陛增强，合成释放增多。同时TNF－α还降低t－PA的分泌，从而导致机体纤溶活性低下促进血栓形成。TNF－α对内皮的作用总体上讲是产生促炎症及促凝血，抗纤溶反应。

纤溶系统由一系列酶组成，这些酶之间互相作用，互相抑制，在正常生理状态下凝血与纤溶过程保持平衡。其中t－PA和PAl－1两种酶的作用尤为重要。在许多病理情况下．PAI－1浓度增高是一种急性期反应。因此，观察t－PA和PAI－1值的变化，可以评价纤溶系统的改变，亦间接地反映了血管内皮细胞的功能。有研究表明，凝血与纤溶系统的异常改变是导致冠状动脉内血栓形成的重要原因之一[4，5]。在冠状动脉硬化性心脏病病人中，由于动脉粥样硬化病变损伤血管内膜，粥样斑块内膜面的血管内皮细胞的完整性受到破坏，使其功能显著减退。因而导致t－PA合成与释放减少。同时，血管平滑肌细胞在内膜层大量增殖，也可加强抑制血管内皮细胞分泌t－PA，从而使局部的血管内膜纤溶功能减弱[6]。当动脉粥样硬化斑块因各种原因而导致破裂时，促成凝血的物质生成增加，凝血系统从而被激活。同时，活化的血小板可通过释放PAI－1而将机体的纤溶

活性进一步削弱。由于以上的改变，影响了体内凝血与纤溶系统之间的平衡，从而导致冠状动脉内血栓形成。

血清CK活性增加被认为是心肌细胞损伤最敏感的指标之一，与心肌坏死程度呈正相关，因此测定血清CK活性对于判断心肌缺血损伤的程度和范围很有价值[7]。本实验发现预先给予醒脑静可保护心肌细胞，并减少心肌细胞死亡数量，明显降低结扎冠状动脉所致的血清CK活性。说明此方能很好地缓解心肌的缺血、缺氧现象，减轻再灌注对心肌的损伤，使酶的外漏减少在保护心肌细胞上起到很好的作用。本实验采用的CCT染色法测定急性心肌梗死范围的结果表明，与安慰剂组比较，醒脑静组可明显缩小心肌梗死面积。而在心肌形态的影响方面，醒脑静组形态结构改变较轻，与CK水平和梗死面积相符。提示此方可防治缺咀再灌注损伤过程导致的心肌组织病理损伤，保持心肌细胞结构的完整性。

安宫牛黄丸是我国传统药物中最负盛名的急症用药，源自清代吴鞠通《温病条辨》，由牛黄、犀角、麝香、珍珠、朱砂、雄黄、黄连、黄芩、栀子、郁金、冰片11味药组成[8]。麝香有辛温香窜、辟秽通络、活血散瘀的功效。冰片气味芳香，助麝香之力，开窍通络，行气活血，止痉镇痛。黄连、黄芩有清热燥湿、泻火解毒之功效[9]。栀子可清泻三焦之邪热，起到凉血行气、解毒作用。郁金化痰开窍，行气活血，为化痰开郁通窍之要药。醒脑静是经科学提取，精制而成的新型中药制剂(或称类方)[10]，亦具有通络行气、活血、化痰逐瘀之功效。

我国传统医学认为心肌梗死急性期特别是超急性期以痰浊血瘀热结痹阻心脉，心阳痹阻不通，痰浊瘀毒为其主要病理。本研究大胆假设其治则应为通络行气、活血、化痰逐瘀。在此原则指导下率先将醒腑静应刚于预处理心肌缺血再灌注动物模型，并探讨其对心肌保护的作用机制。研究结果显示，经醒脑静预处理后能显著降低TNF－α、PAI－1、CK上升水平，减缓t－PA下降水平，明显缩小心肌梗死面积，保持心肌细胞结构的完整性。表明醒脑静预处理能抗炎性因子，明显减少内皮细胞损伤。改善内皮功能障碍，改善凝血一纤溶功能障碍，防止血栓形成，改善冠脉循环，发挥抗心肌缺血再灌注损伤作用。同时也证实了通络行气、活血、化痰逐瘀治则的可行性，为临床应用研究提供了理论基础，也提示醒脑静在心血管疾病治疗方面有着较为广阔的应用前景。

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作者简介：许耘红(1973―)，女，主治医师，现工作于广州医学院附属第三医院(邮编：510303)；吴沃栋、陈明、李文杰，工作于广州医学院附属第三医院。

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