慢性乙型肝炎患者血清中HBeAg水平与HBV-DNA载量的相关性分析

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作者单位：519000 中山大学附属第五医院

通讯作者：钱明

【摘要】 目的 研究慢性乙型肝炎病毒感染者中HBeAg水平及其HBV-DNA载量的相关性及临床意义。方法 用荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）精确定量，检测319例慢性乙型肝炎患者血清中HBV-DNA含量；以化学发光标记免疫法配对检测其血清hbeag水平。结果 不同HBeAg水平对应的hbv-dna载量有所不同。HBeAg 1～50（s/co）组的患者其HBV-DNA载量高于0～1（s/co）（即阴性组），但这种差异无统计学意义（P>0.05）。将HBeAg水平>50（s/co）组患者的HBV-DNA与1～50（s/co）组及0～1（s/co）阴性组比较，发现前者血清HBV-DNA载量明显高于后者（P

【关键词】 荧光定量聚合酶链反应； HBV-DNA； HBeAg

据统计，全世界约有3.5亿人感染慢性乙肝病毒，乙肝病毒感染可以导致慢性乙肝、肝硬化、肝癌。目前多以血清感染标志物（乙肝两对半，HBV-M）及荧光定量PCR检测HBV-DNA作为临床分析和判断乙肝患者病情、疗效及预后的主要依据。定量检测患者血清或血浆HBV-DNA病毒已成为监测抗病毒治疗的有效性及预测治疗成功与否的重要手段［1］。由于两对半组合模式复杂多样，导致部分患者的HBV感染复制状况难以判断。HBV-DNA虽是乙肝病毒感染和复制的特异性指标，为表明其有传染性的最有力证据，但受实验室的严格限制，无法快速检测。本文对患者的HBeAg水平与HBV-DNA载量的联合检测希望对乙肝患者的正确诊断、药物治疗效果及预后提供客观准确的依据。

1 材料与方法

1.1 标本来源 2011年1～3月中山大学附属医院门诊和住院的319例患者，申请单临床诊断为乙型肝炎，HBV-DNA、HBeAg含量检测结果。

1.2 标本采集 平静、放松状态下采集HBV患者5 ml全血，置于无菌干燥管用于HBeAg含量检测，同时采集另一管EDTA-2K抗凝全血2 ml用于HBV-DNA载量检测。以3000 r/min的速度离心5 min分离血清血浆。

1.3 试剂和方法

1.3.1 HBV-DNA检测 FQ-PCR法，采用中山大学达安基因有限公司提供的HBV-DNA荧光检测试剂盒，检测仪器为美国Mj opticon 2基因扩增仪，操作方法严格按照试剂盒和仪器说明书进行。

1.3.2 HBeAg含量检测 采用全自动化学发光免疫分析系统，试剂盒为美国雅培制药有限公司提供，检测仪器为美国雅培AMXSY化学发光仪，操作方法严格按照试剂盒和仪器说明书进行。HBeAg水平>1 s/co为阳性。

1.4 统计学方法 应用SPSS 10.0进行统计学分析处理，采用χ2检验，P

2 结果

通过比较不同水平HBeAg患者的血清HBV-DNA检出率及血清HBV-DNA载量，发现不同HBV-DNA载量的血清中HBeAg水平不同。HBeAg 1～50（s/co）组的患者其HBV-DNA载量高于阴性组，但这种差异无统计学意义（P>0.05）。将HBeAg水平＞50（s/co）组患者的HBV-DNA载量与1～50（s/co）组及阴性组比较，发现前者血清HBV-DNA载量明显高于后者，差异有统计学意义（P

表1 慢性乙肝患者血清中HBeAg水平与HBV-DNA

载量比较［n（%）］

3 讨论

血清HBV-DNA载量是反应病毒复制和宿主传染性的直接指标，本研究证明患者中不同含量的HBeAg在一定程度上可以提示HBV-DNA复制活跃程度，但与HBV-DNA载量水平不一定平行。在HBeAg>50 s/co患者组，高载量HBV-DNA患者占72.8%。HBeAg 水平试验结果表明，随着HBeAg 水平增高，HBV-DNA的载量也随之增高，由此可以推测HBeAg 的水平可能与HBV在体内的复制有关，也从基因定量水平进一步证实HBeAg确是反映乙肝病毒复制的良好指标［3］。由表1可以看出，部分低水平HBeAg患者其HBV-DNA载量也低，推测这可能是临床治疗中免疫清除期患者较免疫耐受期患者HBeAg和HBV-DNA相对容易双转阴的原因［4］。但低水平HBeAg的患者仍有一定的几率可检出高拷贝的HBV-DNA，说明HBeAg与HBV-DNA的变化并不一致。本次检测中的319例患者中有121例患者HBeAg在0～1s/co间，有30例患者HBV-DNA拷贝数>104 copies/ml，提示低水平的HBeAg患者中，并不能说明HBV停止了复制，其原因多是已临床用药，药物治疗有效，HBV-DNA的下降水平相比于HBeAg快得多，而其他原因还有［5］:（1）前C区基因变异，HBV前C区第1896位核苷酸由鸟嘌呤（G）突变为腺嘌呤（A），使前C区第28和原发位密码子TGG变为TAG，从而形成终止密码，使HBeAg合成和分泌发生障碍，使HBeAg合成终止［6］。（2）前C区缺失和插入变异或C区基因变异改变了HBeAg的抗原性，使常规试剂盒检测阴性。（3）X基因区基本核心启动子变异，导致HBeAg水平下降或缺失。（4）HBeAg少量复制而低于检测限。这种HBeAg水平低并不反映HBV复制减轻和传染性消失，相反可能提示有HBV变异株的存在和复制，从而使HBeAg表达缺少，不能认为患者已经进入恢复期。这种血清HBeAg阴性而HBV-DNA水平高的患者在临床上应引为注意，采用更为合理的治疗方案，以免贻误病情。由于受免疫学方法灵敏度的限制，很难检测出低水平状态的HBV复制情况，而PCR法就可以很准确地检测出来。因此，不能仅以ELISA法检测HBeAg阴性或低水平的HBeAg就确定HBV在宿主体内无复制现象，而要以更敏感的检测方法荧光定量PCR法检测HBV-DNA载量水平，才能更确切地判断HBV复制状况。部分高水平的HBeAg患者中，其血清HBV-DNA检测低，本次检测中81例HBeAg水平>50 s/co患者中有22例HBV-DNA复制水平低于104 copies/ml，占27.2%。这可能是因为部分可能与PCR引物相匹配的片段发生基因突变，血清中未检测到所致，又可能是：（1）病毒DNA与宿主肝细胞基因组完全整合，血清中DNA呈现低拷贝量，实验室无法检测，但血清学中HBeAg阳性。（2）处于免疫清除期的晚期阶段，由于免疫应答系统的激活，HBV-DNA被清除，但是HBeAg还没消失。（3）处于残余整合期的早期，有部分患者有低水平的病毒复制，但复制水平可能低于实验室所能检测的极限，但其e抗原系统还表现为弱阳性［7］。因此，HBeAg作为HBV复制的一种血清标志物仍然有重要意义。

临床上以血清感染标志物（乙肝两对半，HBV-M）及荧光定量PCR检测HBV-DNA两种方法作为临床分析和判断乙肝患者病情、疗效及预后各有优劣。仅以HBeAg或HBV-DNA作为复制的血清指标来判断HBV复制和评估传染性有明显局限性，故需综合HBV-DNA和HBeAg判断患者体内病毒的复制状态和机体的免疫状态。所以在临床上更应该正确认识HBeAg水平与HBV-DNA定量的关系，对于判断乙型肝炎病毒复制程度、传染性大小、抗病毒药物疗效、病毒的变化以及预后有参考价值，可为调整抗病毒药物剂量、确定疗效提供可靠依据。

参 考 文 献

［1］ Yeo W,Mo FK,Chan SL,et al.Hepatitis B viral load predicts survival of HCC patientsundergoing sysemic chemotherapy.Hepatology,2007,5:1382-1389.

［2］ 李媛媛.慢性乙型肝炎患者血清HBeAg阳性或阴性与HBV-DNA水平的关系.贵州医药,2009,33（5）:436-438.

［3］ 王添章,张宜俊,刘树人,等.慢性HBV感染者血清中HBV DNA与HBeAg量的关系及其临床意义.检验医学,2004,19（1）:71-72.

［4］ 赵大龙,骆海涛,何宁.慢性乙型肝炎不同模式的HBeAg-Ab与血清HBV-DNA水平之间的关系.齐齐哈尔医学院学报,2009,30（11）:1303-1304.

［5］ 李兰娟,陈瑜.重型肝炎发病机制的实验研究进展.中华医学杂志,2005,28（7）:755-757.

［6］ 潘晓微.慢性乙肝患者血清HBV-DNA和HBeAg定量的相关性分析.放射免疫学杂志,2009,22（1）:68-71.

（收稿日期：2011-06-09）