安宫牛黄丸对实验性大鼠脑缺血的保护作用

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摘要:目的 研究安宫牛黄丸对实验性大鼠脑缺血的保护作用及机制。方法 将60只大鼠随机分为假手术组、模型组、安宫牛黄丸组、西药组、中西药组，采用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血的动物模型，在脑缺血后6 h、24 h、48 h、72 h进行神经功能行为评分；造模连续给药4 d后，取脑组织，计算脑系数，干湿重法观察脑组织含水量，腹主动脉采血以酶联免疫吸附法（ELISA法）检测血清中白细胞介素-10（IL-10）水平的变化。结果 阻断大脑中动脉后4 d内，除了假手术组外，所有大鼠都出现程度不同的运动障碍；脑系数、脑含水量和血清IL-10水平均显著升高（P

关键词：安宫牛黄丸；缺血性中风；大脑中动脉梗死大鼠模型；细胞因子

中图分类号：R743 R289.5 文献标识码：A 文章编号：1672-1349（2011）06-0710-03The Protective Effect of Angong Niuhuang Pill on Experimental Cerebral Ischemia

Liu Zongtao,Sha Dike,Liu Yuanxin,et al

The Affiliated Hospital of Traditional Chinese Medicine,Xinjiang Medical University （Urumqi 830000）

Abstract：Objective To investigate the protective effect of Angong Niuhuang pill on experimental cerebral ischemia and its mechanism.Methods Rats were randomly divided into five groups：Sham group,model group,Angong Niuhuang pill group,western medicine group,Chinese traditional medicine with western medicine group.The models with focal cerebral ischemia of rat were established by the suture occluded method.Neurology evaluation was studied at 6 h,24 h,48 h and 72 h after middle cerebral artery occlusion（MCAO）and cerebral ischemia.The coefficient of brain and water content in whole brain were examined.The level of serum interleukin 10 （IL-10） in abdominal aorta was detected by enzyme linked in ununosorbent assay.Results Within four days of MCAO,different degrees of motion disturbances were observed in all rats except sham group.The coefficient of brain,the water content of whole brain and the level of serum IL-10 were obviously increased （P

Key words：Angong Niuhuang pillischemic apoplexymiddle cerebral artery occlusioncytokine缺血性中风，西医属于缺血性脑血管病范畴，是由于血管阻塞引起脑缺血损伤而致局灶或全脑的功能障碍。具有发病率高、致残率高、死亡率高和复发率高等特点，是威胁人类健康的重大疾病之一。中医认为，中风其本在肝肾亏虚，其标在风、火、痰、瘀、虚；它们在发病过程中相互影响，相互作用，临床出现烦躁神昏谵语，此乃为脑血管意外急性期的关键所在【sup】［1］【/sup】。Framingham流行病学研究结果,65%的中风为大脑中动脉供血区的血管堵塞所致,与之相应,大脑中动脉区局部缺血模型是实验性脑梗死研究中最常用的一种模型,其中大脑中动脉（MCA）线栓模型应用最为广泛【sup】［2］【/sup】 。因此本实验采用MCA线栓法造成局灶性脑缺血大鼠模型，探讨中药制剂安宫牛黄丸灌胃配合西药甘露醇与呋塞米针静脉给药对缺血性中风急性期大鼠脑水肿变化规律、血清细胞因子及神经行为学改变的影响，为中西医结合并治,多途径给药治疗缺血性中风提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 动物 健康雄性SD大鼠60只,3月龄，体重250 g～300 g,由新疆实验动物研究中心提供，实验动物使用许可证号：SYXK［新］2003-0003号环境温度控制在25℃～30℃饲养，空气湿度维持在（50±5）%，用灯照使动物体温维持在（37.5±0.5） ℃。

1.2 药物与试剂 安宫牛黄丸由北京同仁堂科技发展股份有限公司制药厂提供（国药准字Z11020076，批号9013181），实验前用蒸馏水配制成所需浓度；20%甘露醇、胞磷胆碱钠注射液，由上海旭东海普药业有限公司提供。呋塞米（速尿）由上海美优制药有限公司提供。白细胞介素（IL）-10定量ELISA试剂盒，购于上海瑞齐生物科技有限公司（批号20101221）。

1.3 仪器 显微手术器械（上海医疗手术器械厂）；电子分析天平（MC,京制0000249号,北京赛多利斯仪器系统有限公司）；电热恒温鼓风干燥箱（上海精宏实验设备有限公司）；TGL-16C台式高速离心机（金坛市医疗仪器厂制造）；酶标分析仪（美国伯乐公司制造，X Mark）；参照文献【sup】［3］【/sup】，选用4-0尼龙线,栓线直径为0.25 mm～0.28 mm。

1.4 方法

1.4.1 动物分组与给药 将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、安宫牛黄丸组（中药组）、西药组、中西药组；假手术组、模型组均给予等容量生理盐水3 mL灌胃；安宫牛黄丸组给予3 mL安宫牛黄丸溶解液灌胃治疗；西药组给予20%甘露醇2.625 mL、速尿0.42 mg尾部静脉注射；中西药组在西药组治疗的基础上加用安宫牛黄丸（将1.134 g安宫牛黄丸加入54 mL水中溶解稀释）；每只3 mL溶解液灌胃。动物造模后连续灌胃给药4 d，于末次给药后分别处死。

1.4.2 大鼠局灶性脑缺血模型的建立 参照文献采用线栓法制备大脑中动脉（MCA）局灶性脑缺血模型【sup】［4］【/sup】:大鼠腹腔注射麻醉（即阿托品、氯胺酮、安定各2 mL、4 mL、4 mL，稀释至20 mL，0.75 mL/100 g）后,仰卧固定,颈部正中切口,钝性分离甲状腺，将其上翻并用无菌纱布保护，分离右侧颈总动脉（common carotid artery，CCA）、颈内动脉（internal carotid artery，ICA）、颈外动脉（externa1 carotid artery，ECA）,并在ECA、ICA分叉处结扎ECA,右侧CCA剪口约0.2 mm的侧“V”字形切口，插入头端烧成圆钝形直径为0.28 mm的尼龙线,使线栓经过CCA分叉处进入ICA，到达MCA起始处，进线长度约（18.5±0.5） mm,感觉有阻力时即停止插入，并向外稍拉出一点即可实现MCA起始端堵塞MCA所有的血液来源,然后将CCA连同尼龙鱼线一起结扎，扎紧备线，甲状腺复位，关闭并缝合皮肤切口。假手术组大鼠接受相似手术处理，但是不插入线栓。缝合皮肤,实现MCAO造模完成。动物入选标准（按Longa五级评分法【sup】［5］【/sup】取神经功能行为评分为1分、2分、3分、4分的动物）：选择苏醒后左上肢屈曲、行走时向左侧旋转或左侧肢体瘫痪的大鼠为栓堵成功者进行实验,否则视为栓堵失败,弃之不用。模型成功后，分别于MCAO后6 h、24 h、48 h、72 h进行神经功能行为评分；大鼠在断头处死前取血清检测IL-10含量:各组大鼠麻醉后腹主动脉取血法分别取全血约5 mL，室温下放置20 min，然后以2 500 r/min离心10 min，小心吸取上清液即为血清标本（溶血标本不用），常温下保存备用。

1.5 观察指标及测定方法

1.5.1 神经功能行为学评分测定 动物苏醒后，按Longa法【sup】［5］【/sup】对其神经功能行为进行5分制评分：0分，无明显神经病学症状；1分，不能完全伸展左侧前爪；2分，向左侧旋转；3分，行走时向左侧倾倒；4分，不能自行行走。

1.5.2 脑系数 动物称重,造模给药4 d后断头取脑,沿脑桥上界水平切断,取全脑称重,脑系数全脑重÷体重×100%。

1.5.3 脑组织含水量的测定 造模给药4 d后断头取脑，去除小脑、嗅球、低位脑干等，用滤纸吸干表面水分，称量脑湿重，105 ℃烘烤24 h至恒重，精确称量干重，采用Elliot【sup】［6］【/sup】公式计算脑组织含水量。

1.5.4 血清IL-10含量测定 酶联免疫吸附法（ELISA法）检测IL-10含量，具体操作步骤参照试剂盒说明书。

1.6 统计学处理 实验数据以均数±标准差（x±s）表示，采用SPSS 17.0软件做统计分析；组间比较用单因素方差分析及Student-Newman-Keuls test统计。

2 结 果

2.1 一般状态 假手术组大鼠麻醉苏醒后精神好，反应灵活，活动度大，全部存活，未见明显对侧肢体活动障碍。其余各组术后4 d精神均较造模前差，反应迟钝，饮食较前减少，自洁能力下降，扎堆蜷缩，均出现不同程度的肢体活动障碍，而以模型组为甚；其中模型组、西药组、中西药组分别有2只大鼠造模后半小时左右死亡；中药组有1只大鼠造模后昏迷不醒，于第2天死亡。

2.2 体重指数 大鼠造模前称重（g）为基础值，造模后第1天、第2天、第3天、第4天分别称重，取各时间点体重与基础值之比,即体重指数。与模型组比较，各组动物术后均有体重渐回升的过程；而假手术组体重上升较明显，与其他各组比较有统计学意义（P

2.3 神经功能行为学评分 假手术组大鼠都没有神经功能行为学症状，而模型组、中药组、西药组、中西药组大鼠则有不同程度的神经功能行为学表现。与模型组大鼠比较，中药组、西药组、中西药组均可降低大鼠的神经功能行为学评分（P

2.4 各组对局灶性脑缺血大鼠脑水肿的影响（见表3） 与模型组比较，其他各组大鼠脑系数、脑组织含水量明显降低（P

表3 各组对大鼠脑系数、脑组织含水量的影响（x±s）%

2.5 各组对局灶性脑缺血大鼠血清IL-10的影响（见表4） 与假手术组比较，各造模组IL-10均明显升高（P

表4 各组对大鼠血清IL-10表达的影响（x±s）ng/L

3 讨 论

安宫牛黄丸是我国传统药物中久负盛名的良方，是中医治疗中风之要药。安宫牛黄丸出自清代吴鞠通《温病条辨》，素有“救急症于即时，挽垂危于顷刻”的美誉，由牛黄、水牛角浓缩粉、麝香、珍珠、朱砂、雄黄、黄连、黄芩、栀子、郁金、冰片等11味药组成。具有清热解毒、豁痰开窍的功效，主治热病、邪入心包、高热惊厥、神昏谵语。临床研究表明，安宫牛黄丸制剂具有改善缺血性中风急性期神经功能缺损情况的作用【sup】［7］【/sup】。对于急性中风患者，安宫牛黄丸配合常规西医综合抢救治疗明显优于单纯常规综合抢救治疗【sup】［8］【/sup】。

IL-10作为一种抗炎性细胞因子，在缺血性脑损伤中具有脑保护作用。其保护作用是通过缩小脑梗死灶范围，减缓炎性细胞浸润和减少神经细胞凋亡而发挥的【sup】［9］【/sup】。本试验结果显示模型组大鼠血清IL-10升高，推测可能是动物在受到应激性损伤之后机体的自身保护机制而引起的；安宫牛黄丸组大鼠血清IL-10升高显著，与单纯西药甘露醇、呋塞米、胞磷胆碱静脉用药疗效未见明显差别，而中西药合用大鼠血清IL-10水平升高更为显著，从而最终保护脑细胞，改善神经功能缺损症状，降低缺血性中风大鼠的死亡率、致残率；这提示改变抗炎性因子IL-10的分泌为安宫牛黄丸对局部脑缺血大鼠脑损伤保护作用的机制之一。总之，虽然传统中药安宫牛黄丸给药途径受限,但仍是具有特殊功效的良药，其与西药联用也许会提高临床疗效。

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作者简介： 刘宗涛（1983―），男，现为新疆医科大学在读硕士研究生（邮编：830000）；沙地克・沙吾提、刘远新（通讯作者），工作于新疆医科大学附属中医医院（邮编：830000）；李继彬，为新疆医科大学在读硕士研究生。

（收稿日期：2011-02-16）