姜油对小鼠肝脏Cyp3a、Cyp2e1酶活性的影响

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摘要：目的

关键词：姜油；Cyp3a11；Cyp2e1

由合用药物而引起的药物不良反应（Adverse Drug Reaction，ADR）在临床用药当中已并不罕见，其原因多数与人体中的药物代谢酶或转运体被抑制或诱导有关。CYPs酶系（如CYP3A4、CYP2E1等）在许多化合物的转运过程中起着至关重要的作用。有研究报告称，葡萄柚通过抑制肠道CYP3A活性能显著增加非洛地平的口服生物利用度，从而引起严重的副反应。

近年来，药物不良反应的研究不仅仅局限在化学药物对代谢酶的影响，天然产物如食物、水果等同样也能影响代谢酶的活性。生姜是姜科植物姜 （Zingiber Officinale Roscoe） 的新鲜根茎，既是调味佳品，更是常用的中药材，目前生姜做为调味品和中药，在生活和临床中有着广泛的应用，然而当生姜与其他处方药物配伍使用时，是否发生代谢性药物相互作用尚未可知。因此本研究测定姜的主要成分姜油和对小鼠肝脏cyp3a及CYP2e的影响，进而判断其是否影响其他药物在人体内的吸收代谢，为临床合理用药提供参考。

1资料与方法

1.1一般资料

1.1.1动物 SPF级NIH小鼠，体重 18～26 g [广州中医药大学实验动物中心，动物合格证号 SCXK（粤2008-0020）]。

1.1.2试剂 姜油（由CO2超临界提取，含20% 6-姜酚，广州中医药大学科技园提供）；利福平（Rifampin，广东华南药业集团有限公司，批号091103）；酮康唑（Ketoconazole，南京白敬宇制药有限责任公司，批号090102）；NADPH（Sigma）；羧甲基纤维素钠（sodium carboxymethylcellulose，CMC，批号F20091021，国药集团化学试剂有限公司）；Folin-酚蛋白定量试剂盒（北京鼎国生物技术有限责任公司，批号07T001100）；其他试剂均为市售分析纯。

1.2仪器 Himac CR22G高速冷冻离心机（日立制作所）；G7-953T型组织匀浆机（As One，HOM，日本）；T6新世纪型紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）； Multipette plus手动连续分液器（Eppendorf，German）。

1.3方法

1.3.1分组与给药 将70只小鼠随机分为7组，10只/组，雌雄各半。CMC溶媒组（0.5%CMC溶液，10 mL/Kg）、酮康唑组（1.8 mg/Kg）、利福平组（40 mg/Kg）、姜油高、中、低、常剂量组（给药剂量分别为30 mg/Kg、15 mg/Kg、3 mg/Kg、0.6 mg/Kg）。灌胃给药2次/d，连续灌服5 d。实验当日，投予供试物后60 min断头采血，并迅速摘取肝脏。

1.3.2微粒体的制备 小鼠肝肠微粒体的分离参考文献方法进行进行[7-8]。方法如下：在冰上迅速取出肝脏。然后置于磷酸缓冲液（PBS）pH 7.4中，用组织匀浆机以920 rpm的速度进行匀浆操作。经梯度离心后，用适量的PBS缓冲液重悬所得微粒体，然后按1.2 mL/管分装后，于-80℃贮存备用。以Folin-酚法进行蛋白定量，以小牛血清作标准蛋白，按试剂盒说明书进行定量。

2结果

2.1小鼠肝微粒体Cyp3a活性测定结果 小鼠肝微粒体Cyp3a活性测定，见图1、图2，不论以氨基比林为底物还是以红霉素为底物，利福平、姜油高、中剂量组的活性显著高于对照组小鼠（P0.05）。

图1 小鼠肝脏Cyp3a活性测定结果（以红霉素为底物）（x±s，n=10）

注：与CMC对照组相比，*P

图2 小鼠肝脏Cyp3a活性测定结果（以氨基比林为底物）（x±s，n=10）

注：与CMC对照组相比，*P

2.2小鼠肝微粒体中cyp2e1活性测定结果 肝微粒体中Cyp2e1活性测定，见图3，姜油高、中剂量组中的Cyp2e1活性明显低于对照组（P0.05）。

图3 肝脏Cyp2e1活性测定结果（x±s，n=10）

注：与CMC对照组相比，*P

3讨论

CYP450系统的抑制或诱导是产生代谢性药物-药物相互作用的主要原因之一。CYP3A4人类最重要的CYP亚族，约占肝脏P450代谢酶的40%左右，50%以上的结构各异、性质不同的临床药物可由它代谢，如扑热息痛、安定、维拉帕米、硝苯地平等。CYP2E1也是肝脏中CYPs酶系的重要成员之一，约占肝脏中CYPs含量的7%，参与多种药物及毒物的代谢，如乙醇、丙酮、四氯化碳、苯胺等前致癌物。为更好的保证实验结果的准确性，本研究以红霉素和氨基吡啉两种底物，分别测定其代谢产物甲醛的生成量来反映Cyp3a的活性；以苯胺为特异性底物，测定代谢产物对氨基酚的生成量来反映小鼠肝脏Cyp2e1的活性。本研究中Cyp3a和Cyp2e1活性测定结果显示，不论以氨基吡啉还是以红霉素为底物测定Cyp3a活性，姜油高、中剂量时对小鼠肝微粒体中Cyp3a的活性具有一定的诱导作用，而对Cyp2e1的活性具有一定的抑制作用。

综上，姜油对药物在肝脏的代谢有影响。在临床用药中，同服姜可促进某些药物在体内的代谢，有助于某些有毒药物从肝脏代谢，对人体有较好的保健作用。

参考文献：

[1] Jiménez-Nácher I， Alvarez E， Morello J， et al. Approaches for understanding and predicting drug interactions in human immunodeficiency virus-infected patients [J]. Expert Opin Drug Metab Toxicol，2011，7（4）：457-77.

[2]Letelier ME， Pimentel A， Pino P， et al. Microsomal UDP-glucuronyltransferase in rat liver： oxidative activation [J]. Basic Clin Pharmacol Toxicol， 2005， 96（6）：480-486.

[3]Wang RW， Newton DJ， Scheri TD， et al. Human cytochrome P450 3A4-catalyzed testosterone 6 beta-hydroxylation and erythromycin N-demethylation. Competition during catalysis [J].Drug Metab Dispos，1997，25（4）：502-7.编辑/张燕