真菌中药双向强化培养制剂的研究
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近两年来,我们在食(药)用菌研究基础上,遵循中医药扶正祛邪、调理气血的理论和特点,突出药用菌的特色和优势,将葛根、丹参、蚕蛹等活血通络、祛瘀止痛的中药和灵芝、虫草药用菌,通过微生物学手段,致使以中药作为培养基质被灵芝、虫草菌丝吸收利用,促进菌丝体及其次生代谢产物的性质和功效产生了质的变化。同时,菌丝在生长过程中分泌出各种酶,促进了中药基质的分解,最后被菌体利用。这种双向调节、协同作用,形成了新成分、新功能的药用菌质。基于中药内在的某些成分为菌丝的生长不完全有利或具有拮抗和抑制作用,因此采用的菌种必须事前以不同梯度的中药基质对其进行驯化,使之逐渐适应增强两者的亲和力,这就是菌种的驯化和强化培养。
1 丹参等与灵芝的强化培养
1.1 工艺路线:丹参等中药(粉碎)粗粉(加水、装瓶)料瓶(灭菌)无菌基质(接种)菌瓶(培养)菌丝体(挖瓶、干制、粉碎)药粉(新菌质)。
1.2 技术要领:①中药粉碎的粒径约1mm,以增加通透性,利于菌丝生长。②根据灵芝菌丝的生理特点,拌料时基质的含水量比一般真菌稍高,应控制在70%左右。自然PH。③将基质和水混合拌匀,分装入750ml蘑菇瓶内,瓶口加棉塞。④0.137Mpa保持1.5h高压灭菌,要求彻底、无死角。在无菌条件下冷却至常温,接入灵芝菌种。⑤25±1℃条件下遮光培养,菌丝满瓶后继续培养7d,使灵芝与基质充分结合和作用,强化新菌质的生成。⑥菌丝熟透后挖出,置55℃条件下烘干并粉碎成细粉备用。
2 蚕蛹、葛根等与蛹虫草的强化培养
2.1 工艺路线:蚕蛹、葛根等中药(粉碎)粗粉(加营养液)装瓶、料瓶(灭菌)无菌基质(接种)叩瓶、菌瓶(培养)菌丝体(挖瓶、干制、粉碎)药粉(新菌质)。
2.2 技术要领:①从购取的干蚕蛹中选取粒大、饱满、色正、无破损、无霉变,清除败血蛹、虫蛀蛹,清水反复清洗,对于缫丝中采用老工艺添加硅酸钠等化学物质的蚕蛹需用热水浸泡、冲洗后曝晒或烘干,以防残留药剂抑制蛹虫草菌丝生长。蚕蛹、葛根等粉碎成粒径约1mm的粗粉。②蛹虫草菌丝生长阶段,要求培养基的含水量约60%。根据基质的重量计算出需加水的重量,精确量取需水量加入蛋白胨1%、柠檬酸铵0.1%、糖1%、磷酸二氢钾0.2%、硫酸镁0.1%、维生素B10.001%组成营养液。PH7.0。③将培养基质与营养液混合并充分拌匀,分装入750ml蘑菇瓶内,装量为瓶子容积的2/3,棉塞或塑料薄膜封口。④0.137Mpa保持1.5h高压灭菌,出锅后趁热叩瓶,使基质松散,置无菌条件下冷却至常温,逐瓶接入蛹虫草颗粒菌种,接种量宜大。⑤控温23±1℃条件下遮光培养,基于蛹虫草有接触基质即能吃料生长的特点,因此接触后次日应逐渐进行摇瓶,使菌种在料面滚动充分接触基质,促使菌丝很快占领表层,也可通过摇瓶将菌种分散致整个料层内各个方位,达到同步发菌。这样做,既能促使菌丝快速生长,又能杜绝杂菌孳生。菌丝满瓶后继续培养7d,使之熟透,获取新的菌质。⑥菌丝与基质充分结合后,将菌丝体挖出,置50℃条件下烘干并研磨成细粉备用。
3 制剂和剂型
①制剂形式:新药的处方由两种药用真菌和数种中药,经固体发酵后研制而成,无赋形剂,属于复方硬胶囊形式,药名定为“复方灵芝虫草胶囊”。②研制工艺:发酵产物(药用菌质)烘干粉碎配料分装胶囊质量检查包装成品。③质量要求:胶囊剂应整洁,无异臭,不得粘结、变形或爆裂,采用胶囊分装器分装,每粒0号胶囊含生药0.3%,应符合药典要求。④毒性试验:取本制剂最大耐受量50克/kg之水混浊液灌入小狗胃内,经观察无出现毒副作用。⑤包装:装空心胶囊的原塑料瓶分装,每瓶100粒。⑥贮藏:遮光、密封,阴凉干燥处保存。⑦保质期:24个月。
收稿日期 2009-03-23