凉血止血祛瘀法对糖尿病大鼠作用机理的实验研究

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[摘要]目的：研究凉血止血祛瘀法对链脲佐菌素(STZ)造成的实验性糖尿病大鼠的作用，观察该法对糖尿病大鼠空腹血糖、血清胰岛素、血清C肽和血液流变学的影响。方法：一次性腹腔注射STZ溶液，制造糖尿病大鼠模型，观察治疗前后糖尿病特征性指标FBG、Ins、C-P和血液流变学指标。结果：治疗10 d后，高、中剂量组大鼠FBG水平明显降低，与治疗前比较有显著性差异（P

[关键词]糖尿病；实验研究；凉血止血祛瘀法；济津汤

[中图分类号]R285 [文献标识码]B [文章编号]1673-7210（2007）02（b）-113-02糖尿病（diabetes mellitus，DM）是一组由遗传和环境因素相互作用而引起的临床综合征。因胰岛素分泌绝对或相对不足，以及靶组织细胞对胰岛素敏感性降低，引起糖、蛋白质、脂肪、水和电解质等一系列代谢紊乱。临床以高血糖为主要共同标志，久病可引起多个系统损害，病情严重或应激时可发生急性代谢紊乱。中医药在防治糖尿病方面，对控制血糖、改善微循环、防治并发症方面有着相当的优势。

在进行糖尿病的中医诊治过程中，糖尿病患者所表现出的一系列症状都与机体正气不足、精微耗散密切相关。对这种情况，采用体现凉血止血祛瘀法的方剂“济津汤”。通过临床应用，发现该法能够在一定程度上控制患者血糖、缓解临床症状、改善患者的生活状态，收到很好的治疗效果。对于该法应用于糖尿病的临床及实验研究方面，目前未见报道。本实验通过观察济津汤对糖尿病大鼠空腹血糖（FBG）、血清胰岛素（Ins）、血清C肽（C－P）以及血液流变学相关指标的影响，初步探讨其作用机制，为该法应用于临床提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 动物 健康Wistar大鼠，雄性，体重250～300 g，黑龙江省兽医研究院小型动物实验中心提供。实验动物许可证号：黑动字第P00102004。

1.1.2 药品及试剂①济津汤（主要成分为大蓟、茜草等），黑龙江中医药大学第二科研门诊。生药1 000 g，加水煎煮3次，每次提取水煎液500 ml，3次水煎液合并、浓缩，备用。②格华止（盐酸二甲双胍），中美上海施贵宝制药有限公司。③消渴灵片（依据中华人民共和国药典2000年版第一部），黑龙江中医药大学第二科研门诊。④链脲佐菌素（Streptozocin，STZ），美国sigma公司产品。⑤胰岛素放射免疫分析测定盒，北京北方生物技术研究所。⑥血清C肽（C－Peptide，C-P）放射免疫分析测定盒，北京北方生物技术研究所。⑦柠檬酸、柠檬酸钠，上海化工试剂公司。

1.1.3 主要仪器和设备①会好III型全自动血糖仪及试纸，美国会好医疗设备有限公司生产。②FJ-2003PS型γ－放射免疫计数器，西安核仪器厂。③FASCO－3010型全自动血流变检测仪，重庆大学维多生物工程研究所。④LD4-2型低速离心机，北京医用离心机厂。

1.2 方法

1.2.1 模型的建立大鼠100只，随机抽取90只。禁食不禁水12 h，尾静脉取血测空腹血糖（FBG）。STZ用柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液（pH 4.0）配制成2%浓度溶液。一次性腹腔注射（40 mg/kg）。3 h后恢复饮食。4 d后禁食12 h测FBG。选取FBG＞10.0 mmol/L者为成模鼠（共73只）。

1.2.2 分组及给药实验设立空白组10只，将成模的73只大鼠随机分为6组，其中模型对照组13只，其余各组每组12只，分别为济津汤高剂量治疗组（相当于成人剂量100 g生药/d）、济津汤中剂量治疗组（相当于成人剂量50 g生药/d）、济津汤低剂量治疗组（相当于成人剂量25 g生药/d）、西药对照组（格华止）和中药对照组（消渴灵片）。各组均灌胃给药，模型组和空白组给予生理盐水。按照人与大鼠体表面积折算给药剂量、按照大鼠体重折算灌胃量， 1次/d。共治疗10 d。

1.2.3 观察指标及方法各组大鼠给药10 d后，禁食12 h，尾静脉取血测FBG。以20%浓度的氨基甲酸乙酯溶液腹腔注射（7 ml/kg），麻醉动物。取颈动脉血，其中5 ml血液置于加有20%肝素钠抗凝溶液0.1 ml的硬质试管中，保持于36℃条件下，检测血液流变学各项指标；9 ml血液分别置于3支加有3.8%柠檬酸钠0.5 ml的硬质试管中（每支3 ml），3 600 r/min，离心2 min，取血清检测血清胰岛素（Ins）、血清C肽（C-P）和纤维蛋白原。测定方法按照仪器及试剂盒说明书进行。

2 结果

2．1 凉血止血祛瘀法对糖尿病大鼠FBG的影响

本实验研究结果表明，模型组大鼠FBG水平明显升高，与空白对照组比较有显著性差异（P

表1实验动物治疗前后FBG水平的比较（x±s）

2.2 凉血止血祛瘀法对糖尿病大鼠Ins、C-P的影响

统计结果表明：各组治疗后血清胰岛素水平比较结果无显著性差异；治疗组血清C肽水平与模型组和空白组比较均有显著性差异（P

表2治疗后Ins和C-P水平的比较（x±s）

2.3 凉血止血祛瘀法对糖尿病大鼠血流动力学各指标的影响

本实验研究结果表明，经凉血止血祛瘀法治疗后的糖尿病大鼠血流动力学各指标均有显著改善。在各指标的综合比较中，中剂量治疗组优于高剂量组和低剂量组（表3）。

表3治疗后各组动物血流动力相关指标检测结果（x±s）

3 讨论

实验结果证实，凉血止血祛瘀法能明显降低糖尿病大鼠的血糖，其降糖效果与中药对照组和西药对照组大致相当，能够在一定程度上控制实验性糖尿病的高血糖。由于胰岛素前体、胰岛素抗体对C－肽的放射免疫法测定结果影响较小，而且C－肽和胰岛素以等克分子的比例从胰岛β细胞释放至血液，测定C－肽水平能够很好地反映出各组实验动物的胰岛β细胞分泌水平。由此可以推测，通过凉血止血祛瘀法的治疗，可能改善实验性糖尿病大鼠的胰岛β细胞的分泌功能。治疗组结果说明，凉血止血祛瘀法可以明显改善糖尿病大鼠血液流变学各指标，缓解高水平的血液黏稠度。其作用机理可能有如下几种可能：通过降低血糖，改善红细胞内外的血浆渗透压，降低细胞内血红蛋白糖化程度，使细胞内黏度下降，使红细胞膜上的正常脂质蛋白成分趋于正常，增加细胞膜弹性，提高红细胞变形能力；改善组织缺氧状态，防止和缓解内环境酸中毒，使血浆pH值升高，增加细胞膜表面电荷数量，使细胞离散程度增加，防止红细胞聚集。凉血止血祛瘀法对糖尿病大鼠血浆纤维蛋白原水平有明显改善作用（P

从实验研究结果来看，凉血止血祛瘀法对糖尿病动物能起到降低FBG、改善血液流变学状况，并有可能改善胰岛β细胞分泌功能的作用。在客观上验证了凉血止血祛瘀法在糖尿病治疗方面的有效性。该法在改善糖尿病血液黏稠度方面取得了与目前公认的活血化瘀法一致的治疗效果，证实了中医的治则治法在糖尿病治疗方面有着双向的调节作用，说明该法能够达到阻止体内精微耗散的作用。通过对实验结果的分析，说明对糖尿病患者以凉血止血祛瘀法进行治疗，对预防和治疗糖尿病及其并发症有着十分重要的意义。在凉血止血祛瘀法治疗糖尿病的实验和临床研究方面还有很广阔的研究前景。

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（收稿日期：2007-01-18）

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