炒制温度和时间对栀子中栀子苷、绿原酸和鞣质含量的影响

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摘要：目的考察炒制温度和时间对栀子中栀子苷、绿原酸和鞣质含量的影响。方法以CY640A型炒药机，在投药量一致的条件下，在多种温度下分别炒制栀子，制备不同受热条件的栀子供试品。用HPLC法分别测定各供试品栀子苷和绿原酸的含量，用皮粉法测定各供试品鞣质的含量。结果在180～240 ℃之间，随着炒制温度升高，时间延长，栀子苷、绿原酸含量呈逐渐降低的趋势，鞣质含量呈先升后降的趋势，220 ℃炒制21 min的供试品鞣质含量最高。结论炒制温度和时间对栀子中栀子苷、绿原酸和鞣质含量有明显的影响；此方法为探讨栀子的炮制机理提供了实验依据。

关键词：栀子；栀子苷；绿原酸；鞣质；炒制

中图分类号：R917文献标识码：A文章编号：1672-979X(2007)05-0007-04

Impact of Stir-frying Temperature and Time on Contents of Jasminoidin, Chlorogenic Acid and Tannin in Fructus Gardeniae

LI Hui-fen, ZHANG Xue-lan

(Shandong University of TCM, Jinan 250014, China)

Abstract：Objective To investigate the impact of stir-frying temperature and time on the contents of jasminoidin, chlorogenic acid and tannin in Fructus Gardeniae. Methods With the CY640A herbal medicine roaster as processing system equipment and the same administration dose, different samples from Fructus Gardeniae were made at different heating time and temperatures. HPLC method was adopted to measure the contents of jasminoidin and chlorogenic acid. Hide powder method was adopted to measure the content of tannin in each sample. Results Between 180 ℃ and 240 ℃, the contents of jasminoidin and chlorogenic acid reduced with the rising of stir-frying temperature and the prolonging of time, and the tannin increased gradually and then decreased. The sample which was processed 21 mins at 220 ℃ had the maximal content of tannin. Conclusion Stir-frying temperature and time has obvious influence on the contents of jasminoidin, chlorogenic acid and tannin in Fructus Gardeniae. The method provides an experimental evidence for the research on processing mechanism of Fructus Gardeniae.

Key words：fructus gardeniae; jasminoidin; chlorogenic acid; tannin; stir-frying

栀子为茜草科植物栀子（Gardenia jasminoides Ellis）的干燥成熟果实，具有泻火除烦，清热利尿，凉血解毒之功效。炮制栀子的方法有多种，目前以捣碎生用、炒黄、炒焦应用者居多，中国药典2005年版收有栀子、炒栀子和焦栀子。栀子主含栀子苷、异栀子苷、绿原酸、西红花苷、西红花酸、鞣质、挥发油等。研究表明，栀子苷具有抗炎、镇痛、利胆的作用[1]，味苦，有显著降低胰淀粉酶作用和泻下作用[2-3]；栀子苷在大鼠体内可水解生成京尼平，它能明显抑制大鼠胃液的分泌，栀子苷及京尼平可减少大鼠胃蠕动[3]。绿原酸具有抗炎、利胆、抗病毒、促进胃液分泌及止血作用。鞣质具有收敛止血作用。本研究以栀子苷、绿原酸和鞣质含量为指标，考察炒制温度和时间对栀子主要药效成分的影响，以冀为探讨栀子的炮制机理提供实验依据。

1仪器与试药

LC-10AT型高效液相色谱仪（日本岛津公司）；SPD-10A检测器；MA110型电子天平（上海第三分析仪器厂）；CY640A型炒药机（天津天泽制药机械厂）；PMPLUS型红外测温计（美国Raytek公司）；RE-52AA型旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；KQ-250E型医用超声波清洗器（江苏昆山超声仪器有限公司）。

药材产地为江西省宜春市，购自江西药材公司，经本校周凤琴教授鉴定为茜草科植物栀子的干燥成熟果实。栀子苷（geniposide）、绿原酸（chlorogenic acid）对照品（中国药品生物制品检定所，批号为0749200007，0753-20111）；高效液相色谱用乙腈（色谱纯）；其余试剂均为分析纯。

2样品的炮制

取大小均匀的净栀子1 kg，平行20份，置炒药机内（转速：20 r/min），分别于180，200，220和240 ℃炒制7，14，21，28 min，取出晾凉，筛去碎屑，混匀，塑料袋密封，即得。

3方法与结果

3.1水分含量测定

取各供试品粉末（过2号筛），按中国药典2005年版一部附录Ⅸ H水分测定法（烘干法）测定，结果见表1。

3.2栀子苷含量测定[4]

3.2.1色谱分析条件色谱柱：Diamonsil C18ODS柱（4.6 mm×250 mm，5μm）；检测波长238 nm；灵敏度1.0AUFS；柱温：室温；流动相：乙腈-水（15：85）；流速1 mL/min；进样量20μL。

3.2.2供试品溶液的制备取各供试品粉末（过4号筛）0.1 g，精密称定，置入具塞锥形瓶，精密加入甲醇25 mL，称定重量，超声处理20 min，放冷。再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精取续滤液10 mL，置入25 mL容量瓶，加甲醇至刻度，摇匀，即得（每mL相当于原药材0.001 6 g）。

3.2.3栀子苷对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷减压干燥至恒重的栀子苷对照品15.96 mg，加甲醇溶解并定容至50 mL容量瓶，摇匀，即得。

3.2.4线性关系考察精取栀子苷对照品溶液0.5，1，2，3，4，5 mL，分别加甲醇定容至5 mL，各取20μL进样，测定峰面积，以进样量（μg）为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，结果栀子苷的线性范围为0.304 ~3.040μg。回归方程为Y=1 547 814.7X-13 179.40， r=0.9 999。

3.2.5精密度实验取同一浓度栀子苷对照品溶液（0.06 384 mg/mL），连续进样5次，记录峰面积，结果平均峰面积为934 928，RSD=0.82%，表明仪器精密度良好。

3.2.6稳定性实验取同一生栀子供试品溶液，在室温下自然放置，分别在0，2，4，6，8，12 h测定，结果平均峰面积为818 144，RSD=1.26%，表明供试品溶液在12 h内稳定。

3.2.7重复性实验取同一生栀子供试品，平行6份，按供试品溶液制备方法制备并测定，结果平均含量为3.50%，RSD=0.54%，表明此测定方法重复性良好。

3.2.8加样回收率实验精密称定已知栀子苷含量的供试品，共6份，分别精密加入栀子苷对照品溶液适量，按“3.2.2”项下所述操作测定栀子苷含量，结果平均回收率为98.43%，RSD=2.78%。

3.2.9供试品含量测定精密吸取栀子苷对照品溶液、供试品溶液各20μL，注入液相色谱仪，测定峰面积，色谱图见图1。以干燥品计算供试品中栀子苷的含量，结果见表1。

A

B

图1栀子苷对照液、供试液HPLC图

A. 栀子苷对照液B. 供试液

3.3绿原酸含量测定[5]

3.3.1色谱分析条件色谱柱：Diamonsil C18ODS柱（4.6 mm×250 mm, 5μm）；检测波长330 nm；灵敏度0.02 AUFS；柱温：室温；流动相：乙腈-1%冰乙酸（10∶90）；流速：1mL/min；进样量20μL。

3.3.2供试品溶液的制备精密称取各供试品粉末（过4号筛）1 g，加石油醚[（60~90）℃]25 mL，加热回流30 min，滤过，药渣挥去石油醚，加50%甲醇50 mL，密塞，摇匀，称定重量，超声处理（功率250W，频率40 kHz）20 min，取出，放冷。再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精取续滤液25 mL，蒸干，残渣加蒸馏水10 mL溶解，用0.5 mol/L盐酸调pH值至2~3，用丙酮-乙酸乙酯（1∶2.5）振摇提取（15 mL×5），回收溶剂，50%甲醇定容至10 mL，摇匀，即得（每mL相当于原药材0.05 g）。

3.3.3对照品溶液的制备精密称取绿原酸对照品10.52 mg，置入100 mL容量瓶，加50%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

3.3.4线性关系考察精取绿原酸对照品溶液0.5，1.0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0 mL，分别加50%甲醇定容至10 mL棕色容量瓶中，各取20 μL进样，测定峰面积，以进样量（μg）为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，结果绿原酸的线性范围为0.105 2~2.104 0μg。回归方程为Y=2×106X-27207，r=1.000。

3.3.5精密度实验取同一生栀子供试品溶液，连续进样5次，记录峰面积，结果平均峰面积为3 058 606，RSD=0.98%，表明仪器精密度良好。

3.3.6稳定性实验取同一生栀子供试品溶液，在室温下自然放置，分别在0，2，4，6，8，12 h测定，结果平均峰面积为3 024 672，RSD=1.00%，表明供试品溶液在12 h内稳定。

3.3.7重复性实验取同一生栀子供试品，平行6份，按供试品溶液的制备方法制备并测定，结果平均含量为0.143 5%，RSD=1.14%，表明测定方法重复性良好。

3.3.8加样回收率实验精密称取已知绿原酸含量的生栀子供试品，共6份，分别精密加入绿原酸对照品溶液适量，按“3.3.2”项下所述操作测定绿原酸含量，结果平均回收率为98.56%，RSD=1.74%。

3.3.9供试品含量测定取绿原酸对照品溶液、供试品溶液，分别用0.45 μm微孔滤膜滤过，精取续滤液各20μL，按上述色谱条件测定峰面积，色谱图见图2。以干燥品计算供试品中绿原酸含量，结果见表1。

A

B

图2绿原酸对照液、供试液HPLC图

A绿原酸对照液B供试液

3.4鞣质含量的测定[6]

3.4.1供试品溶液的制备精密称取各供试品粉末（过4号筛）10 g，加蒸馏水200 mL，浸泡30 min，沸水浴加热1 h，冷却后移入250 mL容量瓶中，用水稀释至刻度，滤过，滤液作为供试品溶液。

3.4.2供试品含量测定用中国药典2000年版一部附录ΧB鞣质含量测定法，以干燥品计算供试品中鞣质的含量，结果见表1。

表1不同炒制条件供试品中栀子苷、绿原酸和鞣质含量测定结果（n=3）

4讨论

4.1实验结果表明，炒制温度和时间对栀子中栀子苷、绿原酸和鞣质含量影响较大。在180～240 ℃之间，随着炒制温度升高，时间延长，栀子苷、绿原酸含量呈逐渐降低的趋势； 240 ℃炒制28 min制备的供试品中栀子苷、绿原酸含量较生品分别降低42%和55%。在180～240 ℃之间，鞣质含量呈先升后降的趋势；以220 ℃炒制21 min的供试品鞣质含量最高，较生品增加1倍。本研究结果为进一步探讨栀子的炮制机制提供了科学依据。

4.2测定供试品中鞣质含量时，曾按中国药典2005年版一部附录鞣质含量测定法用紫外分光光度法测定，结果所测供试品中鞣质含量甚微，经定性分析，栀子中所含鞣质属缩合鞣质，中国药典2005年版一部附录鞣质含量测定法测定的是水解鞣质，而中国药典2000年版一部附录鞣质含量测定法既可测水解鞣质又可测缩合鞣质，故本实验按中国药典2000年版一部附录鞣质含量测定法用皮粉法测定供试品中鞣质的含量。

参考文献

[1]原田正敏. 山栀子の药理学的研究[J]. 药学杂志（日），1974，94（2）：157.

[2]杨稚珍. 栀子及其提取物对大白鼠胆胰功能的影响[J]. 大连医学院学报，1989，11（3）：53.

[3]石军译，油田正树. 山栀子的药理[J] . 现代东洋医学，1983，4（1）：42.

[4]国家药典委员会.中华人民共和国药典2005年版一部[M]. 北京：化学工业出版社，2005，1:173.

[5]李慧芬，张学兰. 栀子不同炮制品中绿原酸含量比较[J]. 山东中医药大学学报，2006，30（5）：380-394.

[6]国家药典委员会.中华人民共和国药典2000年版一部[M]. 北京：化学工业出版社，2000，附录63.

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